曲克芦丁注射液无菌检查法方法学研究

目的:验证曲克芦丁注射液无菌检查方法,确认曲克芦丁注射液在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计。以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的专属性。方法:按照《中国药典》2010年版二部附录ⅪH无菌检查法进行方法学验证试验。结果:与对照组比较,含供试品的各滤筒中试验菌均生长良好,并与各对照组中相应的菌落生长情况相似,供试品对照组、阴性对照组均无菌生长。由此说明,在此检验条件和检验量下,供试品不存在抑制微生物生长的因素。因此,可照此检查法和检查条件进行曲克芦丁注射液的无菌检查。三批供试品无菌检查符合规定。结论:经方法学验证,采用薄膜过滤法进行曲克芦丁注射液的无菌检查,可有效检测样品无菌情况,为控制产品质量提供检测依据。     

成团泛菌YS19 symplasmata结构对菌体抵抗逆境的作用

成团泛菌（Pantoea agglomerans）YS19是从水稻“越富”品种中分离出的优势内生菌,其所形成的共质体（symplasmata）是一种与生物薄膜（biofilm）类似的多细胞聚集体结构,但细胞间联系比biofilm更加紧密。研究symplasmata结构对成团泛菌YS19抵抗逆境的贡献,有助于阐释内生菌与植物的相互作用的适应性。比较研究了symplasmata结构与散生菌体对于蔗糖渗透压冲击、重金属离子和干燥处理的抵抗能力差异,结果表明,与以散生状态存在的菌体相比,在面临逆境时形成symplasmata结构的菌体抗逆存活能力显著增强。     

心肌肌钙蛋白I和糖原磷酸化酶同工酶BB金标记免疫层析联合检测法的建立

目的：建立人心肌肌钙蛋白I（cTnI）及糖原磷酸化酶同工酶BB（GPBB）的胶体金免疫层析联合检测法。方法：以纯化的人心肌cTnI和GPBB为免疫原免疫小鼠,制备抗cTnI和抗GPBB单克隆抗体,并用胶体金标记cTnI和GPBB抗体,采用免疫层析技术建立快速准确检测cTnI和GPBB的胶体金免疫层析法。结果：建立的检测方法灵敏度高,可检出血液样品中1ng／mL的cTnI和7ng／mL的GPBB;特异性强,与心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白C、肌酸激酶同工酶均无交叉反应。结论：该方法特异性强,灵敏度高,快速、简便,弥补了传统心肌梗死诊断方法的不足,对急性心肌梗死的早期筛查有重要意义,具有较高的临床应用价值和广泛的应用前景。     

响应曲面法优化心肌肌钙蛋白Ⅰ在E.coli中表达及纯化

为优化已构建表达人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)基因工程菌的表达条件,获得纯度较高的cTnI作为抗原用于研制临床上检测心肌梗塞的试剂盒;通过PBD(Plackett:Burman Design)设计,考察各因素对目的蛋白cTnI表达的影响,证明诱导时间、pH、KCl浓度是影响最大的三个因素,通过响应曲面法(RSM)优化对cTnI表达影响最大的三个因素,构建回归方程预测cTnI的表达所占总蛋白的百分比,在最优条件下目的蛋白表达所占体总蛋白含量的26%.经过硫酸氨沉淀和DEAE-Cellulose离子交换层析,将重组的cTnI蛋白进行纯化,经SDS-PAGE检测后,目的蛋白只有一条带;经Western-blottting和临床检测cTnI试剂盒检测后,证明纯化的cTnI有良好的特性,可以作为免疫动物的抗原,制备特异性强,亲和力好的单克隆抗体,也可以作为临床上标定不同cTnI检测方法的校准物.     

脊髓损伤修复相关10号蛋白在COS7细胞中的表达、纯化与鉴定

目的:在COS7细胞中表达脊髓损伤修复相关10号蛋白(SCIRR10),并对表达产物进行纯化和鉴定。方法:在实验室前期研究基础上,用PCR方法扩增SCIRR10基因,将其克隆入pcDNA3.1/myc-HisA穿梭质粒中,转染COS7细胞进行表达;对表达产物用金属螯合层析方法纯化,并进行SDS-PAGE和Western印迹检测。结果及结论:构建了含有SCIRR10基因的穿梭质粒pcDNA3.1/myc-His-SCIRR10,并使其在COS7细胞中得到表达,纯化后的重组蛋白SCIRR10-His-myc的纯度在80%以上,可用于下一步的实验研究。     

家蝇变形期抗菌蛋白的提取及其抑菌活性研究

目的:分离纯化家蝇变形期体内抗菌蛋白并分析其抑菌作用.方法:对家蝇(Muscadomestica)5日龄幼虫进行针刺诱导,并于24h后挑取变形后的蛹,通过研磨、调酸、加热提取蛹体内的耐热水溶总蛋白,经过两步CM-sepharose F.F.离子交换层析分离,以金黄色葡萄球菌作指示菌,检测其抑菌活性,并用SDS-PAGE不连续电泳检测蛋白质的分子量.结果:经两步离子交换分离后,得到一种对金黄色葡萄球菌具有较强抑菌活性的蛋白,经SDS-PAGE检测为单一条带,其分子量为43kDa.结论:家蝇处于变形期时,经过诱导后体内能产生一种抑菌活力较强的蛋白质.     

金红石型氧化钛覆膜热解碳的制备及血液相容性研究

用离子束增强沉积 (IBED)方法 :即在氧气氛中 ,通过惰性气体Xe+离子轰击和Ti的电子束蒸发进行了氧化钛薄膜的合成 .X射线衍射分析表明 ,用离子束增强沉积技术合成的薄膜为金红石结构 ,具有 ( 10 0 )择优取向 .用背散射技术分析了薄膜的成分 ,发现薄膜的O/Ti基本上接近 2∶1.薄膜中含有一定量的Ti2 +和Ti3+.体外试验及动物体内试验结果表明 ,金红石型氧化钛薄膜具有比目前临床应用的热解碳更好的血液相容性 .并认为 ,金红石型氧化钛覆膜热解碳极可能成为新的人工心脏瓣膜材料 .     

大鼠诱发肝癌过程中N乙酰氨基葡萄糖转移酶V的高效液相层析测定

提纯人血浆运铁蛋白(Tf),经链霉蛋白酶水解,再经肼解法制备Tf中的二天线N糖链,后者经还原末端的氨基吡啶(PA)化进行荧光标记,再切除外链的唾液酸和半乳糖残基,获得Gn_2Man_3Gn_2-PA荧光标记糖链,以此制备的糖链为受体底物,UDP-GlcNAc为供体底物,用反相HPLC分离底物和产物,建立了N乙耽氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)的测定法。用GnT-V作为肿瘤生化标志物,观察到在二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的过程中,此酶在诱癌第4周轻度上升,第6周恢复,第10周后持续升高,至18周达正常鼠肝的20倍以上,与病理学上的癌变期相一致。     

新型冠状病毒(2019-nCoV)IgM /IgG抗体检测试剂的研制及性能评价

目的:建立新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)IgM /IgG胶体金抗体联合检测试剂的制备方法,并对检测试剂的性能指标进行评价。方法: 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,分别用刺突蛋白(S蛋白)受体结合域(receptor binding domain, RBD)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, NP)作为标记抗原,硝酸纤维素膜上包被鼠抗人IgM单抗(M线)和鼠抗人IgG单抗(G线),并用二硝基苯酚-牛血清白蛋白(DNP-BSA)和兔抗DNP多抗为独立C线质控系统制备胶体金检测试剂;比较RBD蛋白和NP蛋白临床测试符合率,选取较优抗原制备检测试剂,对试剂交叉、干扰反应性,加速稳定性及临床诊断特异性和灵敏度进行性能评价。结果: RBD蛋白临床测试总符合率 98.48%(389/395);NP蛋白临床测试总符合率89.11%(352/395),RBD蛋白总符合率高于NP蛋白。选用RBD蛋白制备检测试剂盒,与13种常见病原体抗体阳性样本均无交叉反应;样本中的甘油三酯、血红蛋白、胆红素、类风湿因子(RF)、人抗鼠抗体(HAMA)、抗核抗体(ANA)对测试结果无干扰。试剂盒50℃加速破坏6周稳定。临床确诊样本及排除样本测试,IgM灵敏度为78.31%(65/83),特异性为98.90%(721/729);IgG灵敏度为92.77%(77/83),特异性为99.31%(724/729);IgM和IgG联合检测灵敏度为92.77%(77/83),特异性为98.35%(717/729);一致性检验Kappa值为0.883 0,P<0.05。结论: 2019-nCoV IgM/IgG抗体检测试剂(胶体金法)检测性能的特异性和灵敏度高,检测速度快,操作便携,可作为已有的2019-nCoV核酸检测法的补充手段。