脯氨酸-4-羟化酶在大肠杆菌中的密码子优化表达及对反式-4-羟脯氨酸生物合成的作用

为了使脯氨酸-4-羟化酶基因在重组大肠杆菌中得到高表达,通过调整大肠杆菌密码子偏好性以及mRNA二级结构,使得脯氨酸-4-羟化酶基因得到优化。将优化后的脯氨酸-4-羟化酶基因插入含有色氨酸串联启动子的p UC19质粒,构建重组质粒p UC19-ptrp2-Hyp,并导入大肠杆菌BL21(DE3)中。在摇瓶水平,重组菌以L-脯氨酸为底物发酵8 h,可积累(0.492±0.034)g/L的反式-4-羟脯氨酸。在发酵罐水平,通过补料分批发酵来提高反式-4-羟脯氨酸的产量,当补糖速率为18 g/h时,反式-4-羟脯氨酸的产量高达42.5 g/L,反式-4-羟脯氨酸产率为0.966 g/(L·h)。     

红光抑制绿豆下胚轴伸长时富含羟脯氨酸蛋白质的含量变化

红光能增加细胞壁的Hyp含量和细胞各部分的Hyp／Pro,绿豆下胚轴切段伸长被红光抑制的程度与两者是正相关。环己酰亚胺和放线菌素D明显降低细胞壁的Hyp含量,提高WSFC和CWRSE中的Hyp／Pro,抑制切段伸长。香豆素不仅显著减少细胞壁的Hyp含量,而且降低WSFC和CWRSE中的Hyp／Pro,促进下胚轴伸长。α,α．二吡啶降低细胞壁的Hyp含量和WSFC中的Hyp／Pro,解除红光对切段伸长的抑制。EGTA、verapamil、La3 和A23187均可解除红光抑制切段伸长的作用,但对细胞壁的Hyp含量和细胞三部分蛋白质中Hyp／Pro影响较小。     

L-羟脯氨酸用于减肥的实验研究

用添加L -羟脯氨酸的饲料对营养性肥胖Wistar大鼠和昆明种小鼠进行实验 ,与对照组比较体重、体脂、血脂和摄食量的变化。结果表明L -羟脯氨酸能减少营养性肥胖大鼠的体重和体脂 ,降低血脂 ,且无毒 ,不影响食欲 ,在减肥方面有良好的发展前景。     

L-羟脯氨酸-Zn(Ⅱ)的配合机制及其抗氧化性研究

以L-羟脯氨酸(Hyp)和ZnSO4制备Hyp-Zn(Ⅱ)配合物,研究其配合机制及抗氧化能力。与L-羟脯氨酸相比,配合物在1100cm-1处出现了一新的红外吸收峰,说明L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)发生了配位作用;配合物的差热-热重图与L-羟脯氨酸相比,在290℃和375℃的吸热峰消失了,确证L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)发生了配位作用;配合物核磁核磁共振图中3.5~3.9ppm的羧基氢和羟基氢的信号峰的消失,表明L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)发生配合的位置是L-羟脯氨酸的α碳的羧基或γ碳的羟基氧;从配合物的原子力显微形貌相图可见数个L-羟脯氨酸围绕Zn(Ⅱ)形成的配合结构。透析实验结果证实L-羟脯氨酸与Zn(Ⅱ)配合的比例为4∶1(mol/mol)。上述测定和表征表明所形成配合物的分子式为Zn(Hyp)4.H2O。(Hyp)4-Zn(Ⅱ)配合物抑制Zn(Ⅱ)产生的羟基自由基,抑制百分比为75.5%,其总抗氧化能力为80.167u/mL,抗超氧阴离子活力为53.19u/mL。     

牛磺酸、羟脯氨酸、γ－氨基丁酸、鸟氨酸和色氨酸的测定

在日立８３５－５０型氨基酸分析仪上,用７２ｍｉｎ程序进行分析,通常一次只能分析１７种氨基酸。采用本文所述方法则一次能分析２２种氨基酸。在不延长分析时间,不增加成本的情况下,一次多分析了五种氨基酸,提高了仪器工作效率。经过精密度、准确度试验和样品分析证明：该方法测定的数据准确、可靠,是一个又快又省的好方法。     

富含谷氨酰胺和支链氨基酸的肠外制剂对创伤大鼠的效用

研究普通氨基酸注射液 (17AA)与富含谷氨酰胺及支链氨基酸注射液 (2 0AA)对创伤大鼠的营养效用。以Wistar大鼠为创伤模型 ,分别输注两种配方的氨基酸注射液 ,以日立L - 85 0 0氨基酸自动分析仪测定动物血浆游离氨基酸 ,并测定创伤处海绵内羟脯氨酸含量。结果显示创伤后大鼠血浆牛磺酸、谷氨酸、谷氨酰胺和支链氨基酸含量较术前下降 ,但 2 0AA组血浆氨基酸恢复优于 17AA组 ,创伤处海绵内羟脯氨酸含量 2 0AA组显著高于 17AA组 (1.2 9± 0 .2 1vs 0 .83± 0 .16mg/块海绵 ,P <0 .0 5 )。提示 ,创伤后给予富含谷氨酰胺和支链氨基酸的营养制剂能提高血浆氨基酸浓度并有利于创伤的恢复     

植物细胞壁富含羟脯氨酸糖蛋白（HRGP）的电子显微镜观察

本文介绍了一种简单可行的,用以观察和鉴定一种植物细胞壁蛋白质－富含羟脯氨酸糖蛋白（HRGP）的方法,胡萝卜HRGP属于一种伸展蛋白（extensin)。通过简化的装置将HRGP喷射到云母片上,再经旋转投影,使其在透射电子显微镜下呈现为棒状分子（rod-like molecule),经电镜观察和测量表明,HRGP的分子长度为87nm。     

红豆草与苜蓿原生质体融合再生属间体细胞杂种植株

通过PEG诱导红豆草抗羟脯氨酸细胞系原生质体与苜蓿根癌农杆菌702转化系原生质体融合,首次选择得到非对称属间体细胞杂种愈伤组织,并分化出17株小植株.PEG可诱导原生质体紧密粘连,使相连膜环化形成泡囊状结构,导致原生质体相互融合.融合诱导溶液中附加 5％～ 10％甘油可以明显提高异源融合频率.采用后滴原生质体法具有较好的结果.杂种再生芽的染色体数目处于30～60条之间,并包含红豆草的小染色体和苜蓿的2条具有2个明显缢痕的染色体.同工酶分析和胭脂碱合成酶活性检测,均证实其杂种特征.     

产顺式-4-L-羟脯氨酸工程菌的构建及转化条件的优化

【目的】构建产顺式-4-L-羟脯氨酸(cis-4-Hyp)的工程菌并优化其转化条件。【方法】通过调整大肠杆菌的密码子偏好性以及mRNA二级结构对顺式-4-L-脯氨酸羟化酶(cis-P4H)基因进行优化,构建该基因的表达菌株。采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化cis-P4H,测定cis-P4H的酶活和稳定性。然后采用全细胞催化法制备cis-4-Hyp,通过单因素试验和正交试验对相关的转化条件进行优化。【结果】构建了一株产cis-4-Hyp的工程菌,cis-P4H的比活为2.65 U/mg,半衰期为2.32 h。经过条件优化后,采用OD600为0.9时加入IPTG获得的工程菌菌体构建转化体系,在转化体系pH 6.5,转化温度为31°C,转化时间为60 h时,L-脯氨酸转化率最高达到83.33%。【结论】研究获得的工程菌及转化条件具有良好的工业应用前景。     

动物脂肪组织中羟脯氨酸测定方法研究

本研究通过试验,提出了盐酸水解—氨基酸自动分析仪快速、准确测定动物脂肪组织中羟脯氨酸的分析方法,该方法适用于动物育种、选种,动物发育期生理生化变化研究和肉质检验等方面。