曼地亚红豆杉细胞系的建立与评价

红豆杉(Taxus)细胞内紫杉醇的含量低且不稳定,限制了利用细胞培养大规模生产紫杉醇的产业化进程。以紫杉醇含量较高的曼地亚红豆杉(Taxus m edia)为试材,诱导得到了曼地亚红豆杉愈伤组织,在添加抗坏血酸(VC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、活性炭(activated carbon)的改良B5培养基上,15次反复继代培养后获得了高产紫杉醇的细胞系。对新建立的曼地亚红豆杉细胞系(MC)与同期诱导的东北红豆杉细胞系(NC)及实验室继代多年的中国红豆杉细胞系(SC)在细胞生长周期、紫杉醇含量和细胞死亡率等方面进行了分析比较。结果表明,SC的生长量达5.9倍,高于MC和NC的3.6和4.2倍。在初始接种量相近的情况下,MC的悬浮培养细胞在一个周期内紫杉醇产量可达9.5 mg/L,经过茉莉酸甲酯(M J)诱导后可达到41 mg/L。     

红豆杉器官,组织,细胞培养和基因工程的研究进展

本文综述了红豆杉器官、组织、细胞培养和基因工程的研究文献,并对这些领域存在的问题及其发展前景进行了讨论。     

元宝山南方红豆杉的解剖结构及其环境适应性

以分布于广西北部元宝山自然保护区的南方红豆杉为研究对象,利用石蜡切片方法和光学显微技术,对其茎和叶的解剖结构及其对环境的适应性进行了研究和探讨。结果表明:(1)茎和叶的表皮细胞均较小,外壁角质层发达,胞内富含单宁类物质;(2)1～2年生茎无周皮,皮层基本薄壁组织分成5瓣,茎横切面呈"梅花"形,3年生茎具周皮,次生韧皮部薄壁组织发达、细胞内含物丰富;(3)叶片下表皮气孔带和中脉带均有角质层乳状突起分布,乳突大而密集,气孔仅分布于下表皮,气孔器为双环型,叶肉海绵组织发达,约占叶肉厚度的3/4。进一步分析显示,元宝山南方红豆杉茎和叶的解剖结构与元宝山的中亚热带山地气候和阴生环境相适应;与前人研究结果不同,本研究发现叶片角质层乳状突起遍布下表皮,这可能与元宝山南方红豆杉的分布区海拔高且环境温度低有关。     

蔓地亚红豆杉3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶基因的克隆与序列分析

3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶(DBTNBT)是催化紫杉醇生物合成最后一步反应所需要的酶,负责将带有不完全侧链的紫杉醇前体催化形成紫杉醇。利用蔓地亚红豆杉的总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆出DBTNBT基因的DNA序列和cDNA序列,测序结果显示长度分别为1465bp和1362bp,编码438个氨基酸的多肽。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT基因的一致性为99%,其氨基酸序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT氨基酸序列的一致性为96%。DNA序列和cDNA序列比对发现该基因含有1个内含子。利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其蛋白序列进行了分析,为利用基因工程的方法生产紫杉醇或其前体物质提供了分子基础。     

南方红豆杉园林增秀

南方红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ.ｍａｉｒｅｉ）又称美丽红豆杉，是红豆杉科的常绿乔木。高约达１６米，树冠广卵形。树皮红褐色呈条状剥落。条形叶近镰状，叶背沿凸起的中脉两侧有两条黄绿色的气孔带。雌雄异株，雄球花集成头状，雌球花具短梗，３—４月开花。种子１１月成熟。南方红豆杉是我国特有树种。产于长江流域及其以南各省区，陕西、河南、甘肃等地的南部亦有，野生于海拔１０００—１５００米的山谷溪边或山地半荫处林下。南方红豆杉树姿古朴端庄，叶色苍翠，秋季成熟的种子包于红色的假种皮中，散布在深绿色的…     

HPLC法测定红豆杉细胞培养物中的α-萘乙酸

建立高效液相色谱法检测红豆杉细胞培养物中萘乙酸残留的方法。细胞培养液直接用二氯甲烷萃取,鲜细胞用99%乙醇浸提后,再用二氯甲烷萃取,分别得到回收率均达到87%以上的萘乙酸试样,色谱分离采用Nova-pak C18柱,柱温30℃,紫外检测波长为281 nm,进样体积5μL,外标法定量。结果显示萘乙酸的质量在0.001～0.125 ug(R=0.9998)范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,萘乙酸在细胞培养液中的检出限为0.02 mg/L,在鲜细胞中的检出限为0.2 mg/kg。本方法简便快速、灵敏度高,可监测红豆杉细胞培养生产紫杉醇过程中萘乙酸的残留。     

九寨沟世界生物圈保护区

四川九寨沟九寨沟生物圈保护区位于四川省阿坝藏族羌族自治州九寨沟县,面积720平方公里,以保护红豆杉、独叶草等植物和大熊猫、金丝猴、绿尾虹雉等野生动物为主。1 997年加入联合国教科文组织世界生物圈保护区网络。驾车路线:北京→成都→都江堰→汶川→茂县→松潘→九寨沟。     

南方红豆杉细胞悬浮培养条件优化研究

针对红豆杉细胞生长相对缓慢和培养褐化问题,本文通过正交实验和均匀实验方法并采用人工神经网络技术对南方红豆杉细胞悬浮培养条件进行优化,使细胞的生长速率和比生长速率有较大提高,并考察了细胞活性随时间的动态变化.     

东北紫杉及其扦插育苗研究

紫杉 Taxus cuspidata Sieb.et Zucc 别名:赤柏松,红豆杉。一、形态特征紫杉是一种生长缓慢的常绿乔木,高达10～17米。直径10～40厘米,树冠倒卵形或阔卵形,大枝近水平开展。树皮红褐色或灰红色,薄质,具浅裂沟,片状剥裂;裂片里面紫红色,内皮很薄,外面紫色,内面黄白色。枝条密生,幼枝深绿色,较老枝均带红褐色,平滑     

云南红豆杉中紫杉醇和四种紫杉烷类化合物含量

云南红豆杉中紫杉醇和四种紫杉烷类化合物含量项伟张宏杰阮德春孙汉董（云南省林业科学院,昆明６５０２０４）（中国科学院昆明植物研究所,昆明６５０２０４）Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔａｘｏｌａｎｄｏｔｈｅｒ４ｔａｘａｎｅｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓｉｎＴａｘｕｓｙｕ...