超临界CO_2诱导双酚A型聚碳酸酯预聚体的结晶行为

采用超临界CO_2技术对不同数均分子量(M_n)的双酚A型聚碳酸酯预聚体进行诱导结晶,应用热分析(DSC)、广角X射线衍射(WAXD)、扫描电子显微镜(SEM)对诱导结晶后的聚碳酸酯进行了结构和形貌的表征。研究表明,预聚体经超临界CO_2诱导结晶形成同一晶型、尺寸不同的片状晶体,片晶随着诱导结晶时温度、压力的升高逐渐增厚,结晶度增大。在二氯甲烷、乙醇和丙酮三种共溶剂中,极性最大的丙酮诱导的晶体结晶度最大。随M_n的增大,结晶度减小。同时广角X射线衍射结果也证实了超临界CO_2诱导的聚碳酸酯的晶体是单斜晶系结构。     

从废弃蛹虫草大米培养基中高效提取纯化虫草素工艺条件研究

虫草素是蛹虫草的次生代谢产物,具有重要的药用价值,当前主要从蛹虫草子实体中提取。本文提供了一种从蛹虫草子实体生产的副产物——大米培养基中高效提取纯化虫草素的新方法。该方法包括连续逆流提取、732阳离子交换树脂柱层析和结晶三步。对每一步的工艺参数进行了系统优化。用该优化的方法从大米培养基中提取虫草素,虫草素产品的纯度达98.0%以上,产率达66.0%以上。     

Bt杀虫基因与Bt转基因抗虫植物研究进展

苏云金杆菌是一类非常重要的昆虫病原体,它能产生特异性的杀虫结晶蛋白,对农业上和生物医学上的许多有害的昆虫有毒杀作用,这些害虫包括鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、螨类和线虫。近三十年来,以苏云金杆菌为基础的生物杀虫剂已在世界范围内商业化用于防治重要经济作物的害虫。近年来有关Ｂｔ基因的遗传、分子生物学和基因工程已取得显著进展。本文对苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类和杀虫机理及用该类基因构建的工程转基因植物研究状况作一简要综述,同时对Ｂｔ基因工程存在的潜在问题和解决途径作了简单的探讨。     

东方栓孔菌在染料脱色中的应用及其脱色条件的优化

本研究利用东方栓孔菌(Trametes orientalis)菌株Cui 6300发酵所得的粗酶液,对刚果红、结晶紫、铬天青、亚甲基蓝和中性红5种染料进行了催化脱色试验,并对其中脱色效果较好的染料进行了脱色条件优化.结果表明:东方栓孔菌漆酶粗酶液对结晶紫有相对较好的脱色效果.添加2,2'-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸) (ABTS)的粗酶液对结晶紫的降解效果没有明显促进作用,因此后续试验中直接采用粗酶液.脱色条件优化结果为:最佳初始pH值6.0,最佳培养温度55℃,最佳接种量2.0%,最佳转速160 r/min,最佳底物浓度160 mg/L.在此条件下反应96 h,脱色率可达98.45%.本试验说明东方栓孔菌在印染废水治理方面具有较好的应用前景,可以作为一种新型菌株应用于染料脱色.     

蛋白质的晶体生长及其进展

蛋白质晶体生长是用衍射法测定和研究蛋白质三维结构不可缺少的首要步骤,因而对于从分子水平了解生命过程和有效地开发蛋白质工程、理性药物设计等新的生物技术具有重要意义。这一结构测定步骤所处的落后状态,更使蛋白质晶体生长成为倍受重视的研究课题。蛋白质和核酸等生物大分子的结晶是一个受多个因素影响的过程。来自不同学科的研究人员从各个方面对蛋白质的晶体生长开展了研究,并取得了不同程度的进展。     

酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段的表达、纯化及晶体培养研究

[目的]为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体,为研究该酶的三维结构和功能打下基础;[方法]构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段(Apaldn16)的表达质粒,用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性.将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经.IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况.将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离,收集组分进一步用Superdex 75分子筛纯化.纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性,然后用悬滴气相扩散法进行了蛋白结晶条件的初筛.[结果]成功地用大肠杆菌可溶性地高效表达了Apaldn16蛋白.得到了分子量约为36 kD的单一蛋白条带,纯度在95%以上.质谱结果证明该蛋白纯度高,分子量正确.将纯化后的蛋白用悬滴气相扩散法进行晶体初筛,得到了针状簇晶.此晶体经SDS-PAGE检测,证明为Apaldn16蛋白晶体.[结论]利用大肠杆菌高效表达体系可以正确表达Apalan16蛋白,蛋白经过纯化后,用悬滴气相扩散法可以生长出针状晶体,适合于进一步的三维结构研究.     

三种蛋白质生物素化化学方法的比较研究

本文以N-羟基丁二酰亚胺(N-Hydroxy succinimide,NHS)活化酯偶联法原理为基础，探究结晶偶联法、反应液直接偶联法及二环己基碳二亚胺(dicyclohexylcarbodiimide,DCC)偶联法之间的优劣。旨在为实验室安全有效、快捷便利地进行蛋白质生物素化提供更优选择。分别用上述三种方法对牛血清白蛋白(bovine albumin,BSA)进行生物素偶联实验，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)以及紫外波谱扫描特征吸收峰鉴定偶联产物，用凝胶成像系统及Image Lab软件操作系统测定偶联产物相对分子质量，以此确定偶联比。结合上述定性、定量结果对三种偶联方法进行评价。结果显示，三种方法均可以将生物素偶联到BSA上。结晶偶联法首先通过化学合成活化酯并结晶，产率为37.28%，熔点为214～217，偶联比为8.9，单次反应成本128.71元；直接偶联法偶联比为7.0，单次反应成本34.01元；DCC偶联法偶联比为2.2，单次反应成本33.81元。综上可知，反应液直接偶联法相较于结...     

两种新型培养细胞数量检测技术的探索

将SRB比色法和结晶紫比色法与MTT比色法与MTT比色法在96孔板培养HeLa细胞的数量及活力测量精确度和操作方法上进行了对比。试验结果显示：SRB比色法和结晶紫比色法的最佳检测波长均为490nm。最佳染液浓度分别为0.4%和0.25%。SRB比色法的检测精确度略逊于MTT法，结晶紫比色法与MTT法无显著差异。另外，此两种检测方法的操作过程更为简便，所需时间也较短，可在一定范围内取代MTT比色法。