高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1、α-SMA的表达和细胞外基质沉积

目的:探讨高脂喂养对大鼠肾脏小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1、α-SMA表达和细胞外基质(ECM)的影响。方法:高脂饲料喂养大鼠12周后,油红O检测肾脏脂质沉积,Masson染色检测肾小管间质细胞外基质沉积,免疫组化、Western blot和原位杂交检测SREBP-1、TGF-β1、α-SMA和FN的表达。结果:高脂喂养后大鼠体重明显增加,血糖、甘油三酯和胰岛素均升高,油红O检测显示大鼠肾小管上皮细胞内出现明显脂滴。SREBP-1蛋白和mRNA在肾小管上皮细胞内表达,高脂组高于正常对照组,分别是正常组的1.88倍和1.85倍;TGF-β1和α-SMA也定位于肾小管上皮细胞胞浆并出现上调。Masson染色显示高脂喂养大鼠肾间质ECM沉积增多,纤维粘连蛋白FN检测也显示模型组表达强于对照组。结论:高脂饮食喂养可能通过上调肾脏小管上皮细胞SREBP-1表达使细胞内脂滴沉积,并进一步诱导TGF-β1、α-SMA合成而导致细胞外基质堆积。     

鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及定向诱导分化为内皮样细胞

目的：探讨体外大鼠骨髓间充质干细胞（rBMMSCs）的分离培养和血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对其定向诱导为内皮样细胞（ELCs）的可行性。方法：采用Percoll（1.073g/ml）分离液分离骨髓单个核细胞,用含10%胎牛血清（FBS）的LG-DMEM培养基贴壁纯化培养,倒置显微镜、免疫细胞化学法、流式细胞仪、MTT法、透射电镜（TEM）联合对rBMMSCs形态、表型、生长曲线、细胞周期以及超微结构进行鉴定;诱导后的细胞,采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法检测CD31、CD144（VE-cadherin）和CD34表达以及摄取Dil-ac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点。结果：rBMMSCs呈长梭形,漩涡状排列。细胞生长曲线显示潜伏期、对数生长期和平台期,符合干细胞的生长规律。透射电镜结果表明：rBMMSCs有两种不同的形态结构,其中体积较小、核质比大、胞质内细胞器稀少者为处于未分化或分化较低状态的幼稚型rBMMSCs。细胞周期分析显示：第4代细胞G0/G1期为95.67%,表明绝大部分细胞处于非增殖状态;诱导后的部分细胞形态可见类似ELCs改变,表达血管内皮细胞（ECs）特异性表面标志CD31、CD34和CD144,具有摄取Dil-ac-LDL以及结合FITC-UEA-1的功能特点。结论：采用Percoll密度梯度离心与贴壁培养相结合的方法所培养的rBMMSCs在体外具有定向诱导分化为ELCs的潜能,可能成为血管组织工程理想的种子细胞来源。     

大鼠细小肺动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定方法的研究

目的：建立一种重复性好、培养周期短及传代次数多的大鼠细小肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）培养方法。方法：在无菌条件下,分离雄性SD大鼠肺细小动脉,剥离外膜和剔除内皮细胞,经胶原酶I消化,培养PASMCs。0.4%台盼蓝染色测定细胞活力;倒置相差显微镜观察;免疫细胞化学法和免疫荧光染色法,进行平滑肌α-肌动蛋白（α-SMactin）鉴定。结果：形态学观察、免疫细胞化学法及免疫荧光染色法鉴定表明培养细胞为PASMCs;细胞存活率在96.5%以上;原代培养后4～7d即可传代,并且生长特点、细胞形态不易发生改变。结论：采用胶原酶I消化法培养PASMCs,方法简单、酶消化时间易控制、培养周期短、重复性好,培养的原代PASMCs具有数量多和生长迅速的特点。     

微流控技术对细胞微环境的模拟及应用研究

细胞微环境是一个多因素组成的、时空可变的复杂集合,对细胞的行为和功能发挥起着决定性作用。但传统的细胞生物学研究方法很难在体外为细胞提供这样一个复杂的、微尺度的生长环境,致使许多体外研究结果与在体情况相差甚远。近年来,微流控技术与细胞培养技术的结合为细胞微环境的模拟和控制提供了可能。文章通过提炼微环境的重要参数及其特征,介绍微流控技术是如何满足这些参数的需求,探讨了微流控技术在体外模拟细胞微环境的可行性,并总结了近年来该技术在微环境体外模拟研究中取得的成果,对微流控技术在细胞微环境构建中的发展方向和应用前景进行了展望。     

豚鹿血液细胞和血液化学指标测定

应用Sysmex F-820血球计数仪和Olympus AU400全自动生化分析仪,对成都动物园圈养的16只豚鹿的46个血液样本进行血液细胞及血液化学43项指标检测,并对成体、亚成体及幼体进行统计分析,建立了一个参考指标.这对豚鹿的疾病诊断和繁育研究具有重要的意义.     

β-catenin的生物学功能与调控机制

β-连环蛋白（β-catenin）是一种胞内糖蛋白,具有双重功能。一是作为附着连接的组成部分,与钙黏蛋白结合形成复合体参与细胞间连接;二是作为信号分子,是Wnt信号途径的重要环节,在胚胎发育和肿瘤发生中起重要作用。β-catenin选择何种途径发挥作用,与不同配体竞争性结合密切相关。目前已经证实β-catenin Y142位点酪氨酸磷酸化是决定β-catenin功能的关键调控点,而E—cadherin、Left、APC和α-catenin均参与β—catenin活性的调节,对细胞的命运有着重要影响。     

血清GPAA1、SF、OPN与儿童急性淋巴细胞白血病危险度的关系及对血栓发生风险的评估效能研究

摘要 目的：分析血清糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1（GPAA1）、铁蛋白（SF）、骨桥蛋白（OPN）与儿童急性淋巴细胞白血病危险度的关系及对血栓发生风险的评估效能。方法：选择我院自2017年1月至2022年12月接诊的112例急性淋巴细胞白血病患儿作为观察组，另选112例性别、年龄与观察组相匹配的健康体检儿童作为对照组。检测两组血清GPAA1、SF、OPN表达水平，分析不同危险度的急性淋巴细胞白血病患儿血清GPAA1、SF、OPN表达水平的差异性，观察急性淋巴细胞白血病患儿的血栓发生情况，通过受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）评价血清GPAA1、SF、OPN预测急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的效能。结果：观察组血清GPAA1、SF、OPN表达水平均高于对照组（P＜0.05）；在低危、中危和高危的急性淋巴细胞白血病患儿中，血清GPAA1、SF、OPN表达水平有差异（P＜0.05）；经Spearman相关性分析，血清GPAA1、SF、OPN表达水平与儿童急性淋巴细胞白血病危险度呈正相关（P＜0.05）；在112例急性淋巴细胞白血病患儿中，发生血栓12例，占10.71%；经多因素Logistic回归分析，血清GPAA1、SF、OPN均是急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的独立预测因素（P＜0.05）；经ROC曲线分析，血清GPAA1、SF联合OPN预测急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的AUC为0.901。结论：血清GPAA1、SF、OPN与儿童急性淋巴细胞白血病危险度密切相关，联合预测患儿发生血栓的效能较好，对此病的诊治具有重要指导意义。     

维生素E对TCDD染毒小鼠白细胞介素和T细胞亚群的影响

为研究维生素E(VE)对2,3,7,8四-氯代二苯并-对-二噁英(TCDD)染毒雄性小鼠白细胞介素(IL)和T细胞亚群的影响,我们设计了5个实验组,将40只小鼠随机分为5组,5组动物给予TCDD和维生素E的水平依次为:TCDD 0 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD 100 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD 100 ng/kg和VE20 mg/kg、TCDD 100ng/kg和VE100 mg/kg、TCDD 100 ng/kg和VE500 mg/kg。灌胃7周后取其血液和脾脏,用酶联免疫法测小鼠血清IL的水平,用流式细胞仪法测定脾脏T淋巴细胞亚群的变化。结果表明:TCDD染毒组小鼠血清IL-1α水平明显高于对照组;VE20 mg/kg和100 mg/kg的两组,其血清IL-1α水平均明显低于染毒组;而VE500 mg/kg组,其血清IL-1α水平与染毒组间差异没有统计学意义;TCDD染毒组小鼠血清IL-2水平明显低于对照组;VE100 mg/kg和500 mg/kg两组,其血清IL-2水平明显高于染毒组;TCDD染毒组CD4 T淋巴细胞百分比明显低于对照组;给予VE的三组,其脾CD4 T淋巴细胞百分比与TCDD染毒组相比有升高的趋势,但没有统计学意义;TCDD染毒组小鼠脾CD8 T淋巴细胞百分比明显高于对照组;VE为100 mg/kg组,其脾CD8 T淋巴细胞百分比明显低于染毒组和VE20 mg/kg两组;VE500 mg/kg组,其脾CD8 T淋巴细胞百分比明显低于染毒组。表明TCDD能导致机体白细胞介素分泌的紊乱以及脾脏T淋巴细胞亚群的变化,而适当剂量的VE对TCDD所致的毒性有拮抗作用。     

细胞凋亡检测方法探讨

采用图例法和比较法分析评价细胞凋亡检测方法的应用范围和检测结果的相关性,指出只有选择多种适当的方法进行综合检测,才能对结果做出正确而合理的分析判断。流式细胞术简便、快速,从膜上分子、胞内蛋白到DNA水平全方位多角度分析凋亡,可作为检测细胞凋亡的首选方法。     

树突状细胞在肾小管间质纤维化中作用及缬沙坦的干预调节

探讨树突状细胞(DC)在肾纤维化大鼠肾小管间质中分布,以及缬沙坦对DC浸润聚集的干预作用。建立肾大部切除大鼠模型,随机分为正常组(n=18),假手术组(n=18),模型组(n=18),缬沙坦治疗组(n=18)。分别于建模1、4、12周取肾组织,采用HE和Masson染色评定各组肾小管间质纤维化(TIF)程度;采用免疫双染及荧光图像分析法,观察DC-SIGN DC在各组大鼠肾组织中分布变化;采用免疫组化方法,观察P-选择素以及TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、III型胶元(ColIII)、纤维连接蛋白(FN)在上述肾组织中表达;以及RT-PCR检测P-选择素、TGF-β1、α-SMA、ColIII、FN的mRNA水平。结果显示,(1)模型组DC-SIGN DC主要分布于肾小管、肾间质和肾血管,以肾间质最为明显;其分布数量于12周较1和4周呈明显增多,且与慢性肾功能减退呈正相关。(2)12周时手术组大鼠肾小管间质区P-选择素、TGF-β1、α-SMA、ColIII、FN mRNA转录水平和蛋白质表达均明显增加,并与TIF程度以及DC-SIGN DC分布数量呈正相关。(3)经缬沙坦治疗后,DC-SIGN DC分布减少,以及P-选择素、TGF-β1、α-SMA、ColIII、FN mRNA转录水平和蛋白质表达下降,TIF程度减轻及肾功能改善。研究结果表明,DC启动参与了肾小管间质纤维化形成,并与肾功能损害程度密切相关。缬沙坦对此具有明显的抑制和肾脏保护作用。