MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响

miR-199a-5p是miRNAs家族的一员.为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(anti-sense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞.采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和Collagen Ⅰ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平.结果 表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P＜0.01)、迁移(P＜0.01)和集落形成(P＜0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P＜0.01)、迁移能力(P＜0.01)和集落形成能力(P＜0.01)受到抑制.RT-qPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P＜0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达水平升高.以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖.     

三烯生育酚研究进展

三烯生育酚和生育酚统称为维生素E,是重要的脂溶性维生素。维生素E只能在植物或者光合细菌中合成,是人类和动物必需且只能通过食物等摄取的重要维生素。一直以来,由于三烯生育酚与生育酚相比,生物活性较低且分布范围较小,人们对其研究相对较少。近些年的研究发现,由于三烯生育酚和生育酚的结构相似,因此三烯生育酚具有与生育酚相同的抗氧化等功能;但又由于三烯生育酚含有不饱和的植基侧链,使得三烯生育酚还具有一些不同于生育酚的功能,比如保护神经免受损伤、降低胆固醇、保护脑细胞免受损伤等。因此,三烯生育酚逐渐成为了研究热点。根据维生素E的生物合成途径,人们也开始了对三烯生育酚的生物强化研究,其合成途径中第一个关键酶基因HGGT的过表达是目前三烯生育酚含量提高的最有效途径;将来还需结合其合成调控的分子机制及其吸收利用问题,开发针对三烯生育酚的功能型产品。从三烯生育酚的合成途径、生物学功能、生物强化等方面进行了综述,并对今后的研究重点提出了展望。     

RTN4对于结肠癌细胞增殖的调控作用

2018年全球癌症统计调查显示,结直肠癌约占患癌新病例的12.1%。因此,寻找新的结肠癌发生有关的基因,发现新的治疗靶点显得尤为迫切。通过数据库分析发现,RTN4基因的表达水平与结肠癌患者生存率的相关性具有统计学意义。针对RTN4基因构建其干扰质粒,将慢病毒作为载体转染结肠癌HCT116细胞中构建敲低RTN4的结肠癌细胞系,最后检测了低表达后RTN4基因的细胞增殖。结果发现,敲低RTN4基因后显著促进了结肠癌细胞HCT116的增殖,研究通过Western blot观察敲低RTN4后HCT116细胞自噬通路相关蛋白p62和LC3的表达情况,发现与对照组相比较,敲低RTN4组LC3转化量（LC3-II/LC3-I）增多,而p62蛋白减少。研究分析了RTN4的潜在抑癌作用,发现敲低RTN4基因会显著增强结肠癌细胞的增殖能力,并且诱导自噬,说明RTN4可能与激活LC3/p62自噬途径有关。     

金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。     

酒石酸锑钾对人胃癌细胞HS-746T增殖和侵袭的影响

目的 研究酒石酸锑钾对人胃癌细胞HS-746T的作用.方法 采用MTT和Transwell方法分别观察VEGF和MMP-9蛋白分泌表达量.结果 酒石酸锑钾对HS-746T细胞的增殖和侵袭具有很强的抑制作用,抑制率随酒石酸锑钾浓度增大而增强,对HS-746T细胞增殖半数抑制浓度（IC50）为82.27 μmol/L;同时,酒石酸锑钾可明显降低人胃癌细胞HS-746T上清中VEGF和MMP-9的分泌表达.结论 酒石酸锑钾能抑制人胃癌细胞HS-746T的增殖和侵袭.     

Notch信号通路在血管损伤修复中的作用

Notch信号通路是进化中高度保守的信号转导通路,其调控细胞增殖、分化和凋亡的功能涉及几乎所有组织和器官。血管损伤后,Notch信号通路分子表达改变,引起内皮细胞（endothelial cell,EC）和血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）表型改变,其增殖、迁移、抗凋亡等能力也随之变化,从而参与血管的损伤修复。Notch信号通路能够促进EC和VSMC增殖以及VSMC迁移至内膜,并提高其存活能力,凶此能够促进新生内膜的形成。     

小鼠可溶性PD1的克隆、真核表达及生物学活性检测

旨在克隆小鼠PD1胞外区(简称mPD-1)基因,利用真核表达系统表达有活性的分泌型mPD-1蛋白,初步研究其生物学活性。克隆mPD-1基因,将其连入pcDNA3.1(+)/Fc中获得pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1重组表达质粒,转化至大肠杆菌DH5α,进行PCR和双酶切鉴定,并送测序。将阳性质粒转染L929细胞,利用RT-PCR和Western blotting方法鉴定mPD-1/L929稳定表达株。利用Alamar Blue法检测分泌的mPD-l蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性。结果显示,成功构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1,转染了pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1的L929细胞可将mPD-l蛋白分泌至胞外。A lamar Blue检测结果显示,真核细胞分泌的mPD-1蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖。本试验成功地克隆mPD-1胞外区蛋白,并在L929细胞中得到了分泌型表达。分泌的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件。     

CD151蛋白促内皮细胞增殖和eNOS蛋白表达

目的研究CD151及其突变体CD151-ARSA245-248对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及eNOS表达的影响,探讨CD151促血管生成的机制。方法构建pAAV-CD151及其突变体CD151-ARSA245-248(囊泡运输缺陷突变体),并转染HU-VEC。CCK-8法测定HUVEC增殖的能力,Western Blot检测CD151及eNOS蛋白的表达。结果 pAAV-CD151组及pAAV-CD151-ARSA245-248组CD151蛋白表达均增加,显著高于正常对照组和pAAV-GFP组(P<0.05),但pAAV-CD151组及pAAV-CD151-ARSA245-248组之间CD151蛋白表达没有统计学意义(P>0.05)。CCK-8法测定HUVEC增殖能力亦无统计学意义(P>0.05)。正常对照组,pAAV-GFP组,pAAV-CD151组及pAAV-CD151-ARSA245-248突变体组的OD值分别为1.393?.685、1.498?.746、2.346?.52和1.71?.863,pAAV-CD151组较pAAV-GFP组和正常对照组细胞增殖能力明显增强(P<0.01),pAAV-CD151-ARSA245-248组较pAAV-CD151组细胞增殖能力减弱(P<0.05)。此外,pAAV-CD151组eNOS蛋白表达较pAAV-GFP组和正常对照组明显增加(P<0.01),pAAV-CD151-ARSA245-248组较pAAV-CD151组eNOS蛋白表达降低(P<0.05)。结论 CD151是促细胞增殖的重要蛋白质,CD151影响eNOS信号通路的激活。上述机制可能为CD151促血管生成的重要机制之一。     

骨髓瘤细胞中阿霉素诱导的ATP变化与自噬的关系

目的：检测用阿霉素（doxorubicin DOXO）处理的骨髓瘤细胞株NCI-H929中ATP与自噬表达水平的变化,探讨两者之间的关联。方法：分别以DOXO 2umol/l 24h、DOXO 2umol/l联用自噬抑制剂3MA 10mmol/l 24h处理H-929细胞后,采用MTT法检测细胞存活率;ATP生物发光法检测ATP表达量;Western Blot检测靶细胞自噬标志分子LC3蛋白的表达。结果：各组相对未处理组存活率分别为54%、35%;相对未处理组%ATP分别为400%、150%;DOXO 24h LC3表达显著上调。结论：经DOXO处理H-929细胞系自噬形成,进而ATP上升以保护细胞。     

四联疗法治疗幽门螺杆菌阳性胃溃疡的疗效观察

目的：观察埃索美拉唑联合瑞巴派特、阿莫西林、克拉霉素治疗幽门螺杆菌阳性胃溃疡临床疗效。方法：60例确诊的Hp阳性胃溃疡患者随机分为对照组（30例）和治疗组（30例）,其中对照组患者给予奥美拉唑＋阿莫西林＋克拉霉素三联法治疗,实验组给予埃索美拉唑＋瑞巴派特＋阿莫西林＋克拉霉素四联法治疗。观察比较两组患者临床症状缓解情况,溃疡愈合率、Hp根除率及溃疡复发率。结果：①经过治疗,所有患者腹痛、腹胀、反酸、暧气等临床症状积分均显著降低（P〈0.01）,且治疗组下降程度大于对照组,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。②治疗组患者痊愈率为60.00%、总有效率为93.33%,明显高于对照组痊愈率（43.33%）和总有效率（80.00%）,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。③治疗组S2期获得率、溃疡愈合率和Hp根除率分别为93.33%、96.67%和93.33%,显著高于对照组60.00%的S2期获得率、70.00%的愈合率和83.33%的根除率（P〈0.01或0.05）。④随访1年后,治疗组患者溃疡复发率为11.54%,与对照组32.00%的复发率比较差异有显著性（P〈0.05）。结论：四联疗法治疗幽门螺杆菌阳性胃溃疡可有效缓解患者临床症状,提高溃疡愈合质量,根除Hp感染,减少复发,效果优于三联疗法。