幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原的可溶性表达及其多克隆抗体的制备和分析*

目的:利用原核表达和蛋白质纯化技术获得高纯度的幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原(rCagL),利用其制备anti-CagL多克隆抗体,并分析抗体的特异性。方法:通过生物信息学软件分析rCagL的抗原结构;利用PCR长片段DNA合成技术合成不含有信号肽序列的幽门螺杆菌致病岛CagL基因,将其插入表达质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-rCagL。然后,将pCzn1-rCagL转入大肠杆菌Arctic Express中,经IPTG诱导表达后,通过Ni-IDA镍离子亲和层析纯化重组抗原rCagL,利用Western blot鉴定rCagL与His标签抗体和Anti-H. pylori抗体的免疫反应性;最后,通过rCagL辅以弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,制备anti-CagL多克隆抗血清,通过ELISA方法分析抗血清的特异性。结果:生物信息学软件表明重组抗原rCagL具有较好的抗原性质;重组质粒pCzn1-rCagL经双酶切和基因测序等技术鉴定,证实rCagL核苷酸序列与理论序列完全一致;基因工程菌株pCzn1-rCagL/Arctic Express在低温11℃条件经IPTG诱导表达。 SDS-PAGE实验结果证实:rCagL可实现相对高效地可溶性蛋白表达,可溶性蛋白约占包涵体的62.07%。经Ni-IDA亲和层析柱纯化,可获得高纯度rCagL,纯度约为96.6%。Western blot结果证实:重组抗原rCagL可特异性与His标签抗体和Anti-H. pylori抗体结合。ELISA结果证实:经rCagL免疫小鼠制备的多克隆抗体anti-CagL可特异性识别rCagL和H. pylori裂解物,具有较高的抗体特异性。结论:重组抗原rCagL在低温条件下可实现可溶性表达,经纯化可获得高纯度抗原蛋白;rCagL具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体具有较好的免疫特异性,为发展H. pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。     

去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价

水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)糖蛋白E(glycoprotein E,gE)是VZV亚单位疫苗的主要候选蛋白,但目前原核表达系统制备的gE蛋白以包涵体形式为主,可溶性差。本研究采用去除第1～30氨基酸序列的VZV gE胞外域基因,将其与原核表达载体pET32a连接,并转化至感受态细胞BL21(DE3)中。使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,His-tag柱纯化重组gE蛋白,蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测其特异性。用该重组gE蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光法检测多克隆抗体效价及特异性。结果显示,BL21/pET32a-VZV gE工程菌可以表达可溶性重组gE蛋白,纯化后纯度约为90%。WB鉴定该重组蛋白具有良好的免疫反应性。ELISA检测显示小鼠抗VZV gE多克隆抗体效价＞1∶10 000,间接免疫荧光实验结果显示该抗体特异性较高。结果表明,本研究在原核表达系统中成功表达可溶性重组VZV gE蛋白,同时该蛋白具有较强的免疫原性,这为VZV gE亚单位疫苗的研制和大规模生产奠定了基础。     

Functional analysis of slow myosin heavy chain 1 and myomesin-3 in sarcomere organization in zebrafish embryonic slow muscles

Myofibrillogenesis, the process of sarcomere formation, requires close interactions of sarcomeric proteins and various components of sarcomere structures. The myosin thick filaments and M-lines are two key components of the sarcomere. It has been suggested that myomesin proteins of M-lines interact with myosin and titin proteins and keep the thick and titin filaments in order. However, the function of myomesin in myofibrillogenesis and sarcomere organization remained largely enigmatic. No knockout or knockdown animal models have been reported to elucidate the role of myomesin in sarcomere organization in vivo. In this study, by using the gene-specific knockdown approach in zebrafish embryos, we carried out a loss-of-function analysis of myomesin-3 and slow myosin heavy chain 1 (smyhc1) expressed specifically in slow muscles. We demonstrated that knockdown of smyhc1 abolished the sarcomeric localization of myomesin-3 in slow muscles. In contrast, loss of myomesin-3 had no effect on the sarcomeric organization of thick and thin filaments as well as M- and Z-line structures. Together, these studies indicate that myosin thick filaments are required for M-line organization and M-line localization of myomesin-3. In contrast, myomesin-3 is dispensable for sarcomere organization in slow muscles.     

人白细胞介素18的基因克隆与表达

人白细胞介素１８（ＩＬ－１８）是新近发现的细胞因子之一．研究表明它参与Ｔ１辅助细胞介导的细胞免疫．利用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人外周血细胞扩增得到了ＩＬ－１８的ｃＤＮＡ并测定其核酸序列．利用基因重组技术构建ＩＬ－１８的表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达．这为以后进一步研究ＩＬ－１８的功能奠定了基础．     

水环境中磺胺嘧啶胁迫下异育银鲫的组织病理学研究

为研究不同浓度磺胺嘧啶胁迫下鱼肝脏、肾脏、鳃、肠道、肌肉等组织的病理变化, 以异育银鲫为研究对象, 采用室内模拟半静态法分别将其置于低(1 μg/L)、中(100 μg/L)、高(10 mg/L)三个不同浓度的磺胺嘧啶水环境中养殖28d。结果显示, 不同磺胺嘧啶浓度胁迫下, 异育银鲫的肝脏、肾脏、鳃、肠道、肌肉组织均产生了不同程度的病理变化, 主要表现为肝细胞淤血, 空泡化, 核固缩, 细胞溶解坏死; 肾小管上皮细胞空泡化, 肾小球细胞坏死, 肾间质淤血; 鳃小片上皮细胞肿大、增生, 鳃丝成板状, 鳃小片结构消失; 肠道微绒毛脱落, 黏膜下层增厚, 黏膜皱襞破损; 肌纤维排列疏松、紊乱、断裂。各组织中肝脏、鳃、肾脏损伤尤为严重, 且随着磺胺嘧啶处理时间的延长, 剂量的增加均会导致组织损伤加重。试验可为水产养殖过程中合理使用磺胺类药物提供一定的理论指导。     

脯氨酸转运相关基因的研究进展

作为植物中普遍存在的一种逆境适应机制, 脯氨酸积累一直被认为是其合成和降解调控的结果。然而越来越多的研究表明, 脯氨酸转运也可能在其积累过程中起重要作用。在植物中, 有多个氨基酸转运蛋白家族, 如氨基酸通透酶家族(AAPs)、赖氨酸组氨酸转运蛋白家族(LHTs)和脯氨酸转运蛋白家族(ProTs)参与脯氨酸在各个器官间的运输。该文对参与脯氨酸运输的基因家族成员的表达模式、生理功能及表达调控进行了综述, 以期为脯氨酸运输与积累在植物抗逆方面的研究提供参考。     

弱氧化醋杆菌阿拉伯糖醇脱氢酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

The partial genomic library of Acetobacter suboxydans was constructed using Yeast\| E.coli shuttle plasmid YEp352 as vector.Two positive transformants,designated as DH5α(pAD91) and DH5α(pAD98),were obtained by screening the growth of transformants on the agar plate in which D\|arabitol was used as the sole carbon source.The results of Southern blot and restriction endonuclease analysis showed that the two recombinants are identical.The insert is about 2.3kb.Arabitol dehydrogenase activity assay indic…     

激光照射血液疗法中的组织光学研究及其应用

本文从组织光学的角度 ,对激光照射血液疗法中的发展现状与存在问题进行分析 ,提出该领域应开展的若干研究内容。本文开展了激光照射血液疗法所涉及的若干组织光学研究。获得了中国人血液的吸收系数、散射系数、各项异性因子、全衰减系数等 ;研究获得了人血管的若干光学参数。通ＭｏｎｔｅＣａｒｌｏ模拟计算 ,以及实验测试结果 ,分别从理论与实际上分析对比了激光血管内照射时 ,光在人体血管、血液中的分布情况 ,以及不同的激光入射角 ,发散角 ,不同的血管直径等因素对激光血液照射的影响。根据对应的组织光学的研究结果 ,文中还讨论并提出…     

杉木愈伤组织培养中的褐化控制研究

以杉木茎尖诱导形成的愈伤组织为试验材料,研究维生素C、柠檬酸、半胱氨酸、硫代硫酸钠4种抗氧化剂和活性炭对杉木愈伤组织培养中褐化的影响。结果表明：维生素C和半胱氨酸能有效地控制褐化的发生,且对愈伤组织生长没有明显的抑制作用,是杉木愈伤组织培养较为适宜的抗褐变剂。     

IaaL基因的维管束特异表达导致烟草茎和根外植体分化能力的改变

我们利用水稻苯丙氨酸解氨酶启动子(AQ630)和吲哚乙酰胺赖氨酸酯合成酶基因(iaaL)构建了维管束特异表达的植物表达载体pBAL1并导入烟草基因组中。比较了对照植株、转基因植株的幼茎和根外植体在组织培养中分化能力的变化,结果表明转基因植株茎外植体的不定芽形成明显受到促进,而转化植株根外植体在不定根发生方面对外源IAA的敏感性下降。