蛇毒纤溶酶的分离纯化-单克隆技术的成功应用

目的从蛇毒中纯化具有溶栓功效的纤溶酶.方法用DEAE-Sephadex A50离子交换,单抗亲和层析两步柱层析方法,对白眉蝮蛇蛇毒进行纯化,得到了一种纤溶酶活性组分.结果分离出的纤溶酶没有出血毒及神经毒等毒性,是一种安全的溶栓药物.结论运用单克隆技术的亲和层析能成功分离纤溶酶.     

新一代溶栓药物--注射用纤溶酶

对新一代溶栓药物-注射用纤溶酶进行了综述,介绍了纤溶酶的分离纯化、药效学、药理学、药代动力学、毒理学及临床研究等方面的研究进展,为临床上治疗血栓性疾病提供一种新的、安全有效的药物.     

纤溶酶治疗急性脑血栓的临床研究

目的观察用纤溶酶治疗急性脑血栓的疗效及安全性.方法将80例患者随机分成治疗组与对照组.治疗组使用纤溶酶,对照组使用巴曲酶作为阳性对照.在治疗前与治疗后第1、7、14d,对两组患者临床疗效进行评定,并测定血小板、出凝血时间及血浆蛋白原含量,同时观察出血倾向及其它不良反应.结果纤溶酶组临床疗效评分与巴曲酶组进行比较,没有统计学意义(P＞0.05),说明两种药物溶栓效果相同,同时在纤溶酶组未见出血倾向及其它不良反应.结论纤溶酶治疗急性脑血栓疗效与巴曲酶相同,临床使用也更加安全.     

里氏木霉306生物合成t-PA的代谢调节机制的研究

对基因工程菌株里氏木霉 (Trichodermareesei) 30 6生物合成组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)的代谢调节机制进行了研究。在基础发酵条件下 ,L 山梨糖、D 果糖、可溶性纤维素、CMC、麦芽糖、乳糖和棉子糖等单糖及多糖对t PA生物合成都有诱导作用 ,其中L 山梨糖的诱导效果最好 ,加量以 1 .0 %为宜。葡萄糖及其中间代谢产物对t PA的生物合成产生分解代谢物阻遏作用。纤维二糖在低浓度时可以促进t PA的生物合成而在高浓度时对t PA生物合成起反馈阻遏作用     

利用逆转录病毒RNAi载体抑制心肌成纤维细胞分泌纤维连接蛋白

心脏间质纤维化是心室重塑的最重要表现之一, 心肌细胞外基质的过度积聚在其中扮演着重要角色. 纤维连接蛋白是细胞外基质的重要成分之一, 它负责胶原之间的连接、细胞的黏附和增殖等. 纤维连接蛋白主要由心肌成纤维细胞产生. 由于导致心肌细胞外基质过度分泌的因素很多, 单独阻断某一上游途径很难完全抑制由其他途径导致的过度合成. 利用RNAi技术试图在细胞外基质合成的终末途径进行阻断以期达到更为有效的结果. 通过体外合成的双链RNA, 抑制了纤维连接蛋白在血管紧张素Ⅱ刺激下的过度表达, 进而构建带有H1启动子的逆转录病毒载体, 成功地实现了用可稳定表达的shRNA抑制纤维连接蛋白的过度分泌. 该载体也可作为今后进行基因功能快速分析和基因治疗的工具.     

肺癌的超声像、超声引导下穿刺活检及纤支镜检、酶组织化学,超微结构的研究

为了探讨超声对肺癌诊断的可行性价值,研究对象包括20例患者,20例可疑病例,均采用超声像,超声引导下穿刺活检和纤支镜检,常规病理检查,酶组织化学检查和电镜观察,结果超声诊断肺癌可以确认肺部肿块的存在,并可以观察肿瘤的大小,形态及内部结构,B超引导下活检可应用于周围型肺部肿块以及患者不宜行纤支镜检或镜检失败的某些中心型肺部肿块,肺癌组织酶组织化学活性反应为（NOS、LDH,CCO,ACP）的活性增高,SDH的活性降低,呈“四高、一是低”的特点,其超微结构示肺组织结构破坏,肺癌组织细胞结构不清,提示：超声像有助于发现肺部肿块,B超引导下活检是安全,快速,简便可行的有效手段,酶组织化学检查及电镜观察对肺癌的鉴别诊断有意义。     

江浙蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化

目的：从江浙蝮蛇蛇毒中纯化出无出血毒的纤溶酶。方法：经DEAE-SepharoseFF离子交换树脂和Superdex75PG凝胶过滤树脂,从江浙蝮蛇蛇毒中纯化出2种可直接溶解纤维蛋白的蛋白酶：F1,F2。结果：它们20μg皮下注射小鼠都无出血反应,F1,F2SDS-PAGE电泳纯度在95%以上。结论：纯化的两个纤溶酶为进一步基础研究和临床应用奠定了基础。     

一种产生纤溶酶的链霉菌C—3662的鉴定与发酵研究

对一株从土壤中分离的纤溶酶产生菌链霉菌C-3662的形态、培养、生理生化和化学分类特征进行了研究,发现其与泛温链霉菌（Streptomyces eurythermus Corbaz et al.1968)的特征很相符。通过对链霉菌C-3662的16SrDNA序列进行测定与比对,发现它与泛温链霉菌的16SrDNA序列也有高达98.19%的同源性。根据多相分类原则,认为链霉菌C-3662属于泛温链霉菌。对链霉菌C-3662的发酵培养基组成等的研究表明,合适的发酵培养基中应含有氮源黄豆饼粉2.0%、碳源淀粉1.0%和葡萄糖2.5%以及少量的无机盐类和硫酸镁。链霉菌C-3662的发酵过程研究表明,纤溶酶是菌丝体生长停止之后才大量产生。     

棕尾别麻蝇幼虫肠道溶纤活性蛋白酶的分离纯化和性质

从以富含纤维蛋白的血凝块为食物的棕尾别麻蝇幼虫肠道浸提液中分离纯化出3种具有溶纤活性的蛋白酶,分别命名为BPGFP1,BPGFP2和BPGFP3。其中,BPGFP1由两个分子量分别为32000和30000的亚基组成。BPGFP2和BPGFP3均为单体,分子量分别为40000和28000。这三种蛋白酶具有相似的底物特异性和抑制剂特性。三种蛋白酶均能降解溶纤活性蛋白酶的特异底物纤维蛋白,Chromzym,P,Chromzym UK和S－2288。三种酶还能够强烈降解类胰蛋白酶专一底物Bz-Phe-Val Arg NA,cBz Gly-Pro-Arg NA,Bz-Pro－Phe-Arg NA和Bz-Val-Gly-Arg NA.PMSF,STI,LBTI和SBBI能够对三种蛋白酶活怀有极强的抑制作用。三种溶纤活性蛋白酶均在pH9.0-10.0范围内表现出较高活性。     

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响

通过研究重组apo(a)KringleⅣ 10 (KⅣ 10 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]致动脉粥样硬化机理研究提供依据 .将含apo(a)野生型KⅣ 10 ((wild typeKⅣ 10 Trp72 ,wt KⅣ 10 Trp72 )和突变型KⅣ 10 (mutate typeKⅣ 10 Trp72 ,mut KⅣ 10 Arg72 )基因片段重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析柱进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析柱检测其赖氨酸结合能力 .再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothe lialcells ,HUVEC)结合的影响 .结果显示 :在E .coliDH 5α菌株中表达的野生型谷胱甘肽S 转移酶(glutathioneS transferase ,GST) KⅣ 10 Trp72 (GST wt KⅣ 10 Trp72 )融合蛋白和突变型谷胱甘肽S 转移酶 (GST mut KⅣ 10 Arg72 )融合蛋白在赖氨酸结合能力上存在明显差异 .其中GST wt KⅣ 10 Trp72能有效地抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 10 Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用 .结果