细胞工程

<正>抗核酸单克隆抗体可以为阐明核酸一蛋白质交互作用提供一种独特的模型。用SpZ/O骨髓瘤细胞与来自MRL/lpr的脾细胞或经过特异免疫的BALB/小鼠的脾细胞相融合,再经过两次克隆而选择出杂交瘤细胞系。已建立一种硝酸纤维滤膜测定法。将已经放射性标记的DNA再经超     

替米沙坦联合叶酸对老年H型高血压合并2型糖尿病患者凝血功能及肾功的影响

目的:观察替米沙坦联合叶酸治疗对老年H型高血压合并2型糖尿病患者凝血功能及肾功的影响.为老年H型高血压合并2型糖尿病患者的临床治疗以及延缓病程提供理论依据.方法:选择66例符合标准的老年H型高血压合并2型糖尿病患者,测定血压,胰岛素敏感指数,糖化血红蛋白,同型半胱氨酸,凝血指标及尿白蛋白排泄率(UAE)等基线数据.上述患者随机分为对照组及实验组,分别接受替米沙坦80 mg/d及替米沙坦80 mg/d+叶酸片0.8 mg/d治疗后,于24周后复查上述指标,并与用药前进行对比研究.结果:对照组及实验组患者均较治疗前血压下降,糖化血红蛋白、纤维蛋白原、尿白蛋白排泄率明显下降(P＜0.05),胰岛素敏感指数较治疗前升高(P＜0.05).经治疗后,实验组患者较对照组血压、糖化血红蛋白、同型半胱氨酸、纤维蛋白原、尿白蛋白排泄率下降均低于对照组(P＜0.05),胰岛素敏感指数较对照组升高(P＜0.05).结论:对于老年H型高血压合并2型糖尿病患者替米沙坦联合叶酸治疗较单纯替米沙坦治疗具有更良好的降压作用,增加胰岛素敏感性,改善高凝状态,改善肾功.     

蛇毒纤维蛋白（原）溶酶

在蝰亚科、蝮亚科和眼镜科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白 (原 )的酶 ,称为纤维蛋白 (原 )溶酶 (简称纤溶酶 ) [1] 。 1 976年 ,Ｏｕｙａｎｇ等第一次从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到纤溶酶[2 ] 。这些纤溶酶可用于溶解在心肌梗塞、中风、血栓等期间形成的血凝块[1] 。作为一种潜在的强有力的抗栓药物 ,纤溶酶已成为蛇毒蛋白酶领域的一个研究热点。1 .蛇毒纤溶酶的分类蛇毒纤溶酶的分类方法主要有 3种 :第一种根据纤溶酶对纤维蛋白原 (ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ ,Ｆｇ)的作用方式 ;第二种是根据纤溶酶的结构特点[3] ;第三种是根据纤溶酶的分…     

大鼠神经元凋亡相关碱性蛋白ARBP cDNA的克隆和功能

利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法 ,得到凋亡相关碱性蛋白 (ARBP)的全长序列 ,进而构建了其真核表达体系以了解其功能 .ARBP的全长cDNA序列为 90 1bp ,其开放读码框架编码 10 9个氨基酸残基 .免疫组化分析表明 ,ARBP蛋白在大鼠体内有广泛的分布 .在R2L1细胞中转染ARBP反义cDNA表达载体后 ,既可以促进细胞增殖 ,又可以抑制去血清诱导的细胞凋亡 .因而 ,ARBP蛋白对神经元细胞的凋亡具有重要的调节作用 .     

HCMV-DNA定量检测和HCMV-IgG抗体AI检测在儿童HCMV感染诊断中的临床价值

摘要 目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）-DNA定量检测和HCMV-免疫球蛋白G（IgG）抗体亲和力指数（AI）检测在儿童HCMV感染诊断中的临床价值。方法：收集高度疑似HCMV活动性感染患儿血清样本103例作为研究组,健康体检儿童血清样本94例作为对照组。分析HCMV-DNA定量检测结果和HCMV-IgG抗体AI检测结果,并比较不同年龄、不同性别患儿HCMV-DNA阳性结果检出率和低HCMV-IgG抗体AI检出情况。结果：研究组血清HCMV-DNA阳性率为33.01%（34/103）,对照组血清HCMV-DNA均为阴性,研究组血清HCMV-DNA阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。研究组血清低HCMV-IgG抗体AI检出率为13.59%（14/103）,对照组未检出低HCMV-IgG抗体AI,研究组血清低HCMV-IgG抗体AI检出率高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。研究组不同性别之间患儿血清的HCMV-DNA阳性率、低HCMV-IgG抗体AI检测结果均无统计学差异（P>0.05）。研究组年龄1～5岁患儿血清HCMV-DNA阳性率明显低于年龄1 d～<6个月和年龄6个月～<1岁患儿（P<0.05）。三个年龄段患儿的血清低HCMV-IgG抗体AI检测结果均无统计学差异（P>0.05）。结论：1岁以下儿童更易受到HCMV感染,HCMV-DNA定量检测和HCMV-IgG抗体AI检测结果可以为临床早期诊断和治疗HCMV感染提供有效依据。     

纤维蛋白溶酶原相关生长因子家族的结构与功能

ＨＧＦ作为对肝细胞具有刺激作用的因子,已为人广泛认识。近几年有关ＨＧＦ结构－功能相互关系方面的研究结果以及与其组成,结构均相似的ＭＳＰ的发生,将视线引向与此相关的一类蛋白－纤溶酶原相关生长因子家族。ＭＳＰ的出现以及ＭＳＰ和ＨＧＦ结构与功能的特性,使得人们不再单纯地研究某一因子／蛋白的结构和功能,而更关注结构与功能间的相互关系、结构作为进化结果的意义,更重要的是在此基础上实现对相关因子／蛋白的功能预     

整合素亲和力调控的机制

整合素是一类重要的细胞表面粘附分子,是由α和β两个亚基组成的异源二聚体跨膜蛋白。整合素作为细胞内外的桥梁,一方面负责介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质以及细胞与病原体的相互作用,另一方面可以双向传递跨膜信号,对于免疫反应、免疫细胞的组织定位、凝血、组织愈伤、癌细胞转移以及组织和器官的发育等都至关重要。整合素与配体的结合及其相关的信号转导是受到精确调控的,这个过程伴随着整合素的一系列构象变化。整合素的另外一个特性是其与配体的结合受到二价金属阳离子的调控。本文重点介绍了整合素功能与构象的关系以及金属离子调控整合素功能的分子机制。     

红脖游蛇咬伤引起严重中毒的临床观察报告

目的为了观察红脖游蛇(Rhabdophis subminiatus)咬伤的临床表现,探明其中毒引起出血的机制。方法对2001~2005年我科诊治的7例红脖游蛇咬伤病人,采取临床观察结合实验室检查:试管法凝血时间(coagulation time)、PT、APTT、TT、纤维蛋白原浓度(Fibrinogen,Fib)和纤维蛋白降解产物含量(3P和D-二聚体)测定等实验检查的血液学研究。并采用自行设计方法治疗:蛇咬伤伤口局部消毒后给予点状加压止血(绝对不能切开,已经切口的需把伤口缝合后再止血)。全身治疗主要有(1)根据需要输注全血或血浆;(2)止血抗纤溶药:止血敏维生素K,止血芳酸,止血环酸;(3)654-2加地塞米松静脉点滴防治全身炎症反应综合症(SIRS);(4)口服中草药蛇药;(5)抗感染;(6)抗休克和治疗MODS等对症处理。结果7例病人就诊时全部有伤口出血难止,全身严重出血倾向,其中1例头颅CT检查发现有脑出血,2例出现了休克、急性肾功能衰竭。全部患者进行血液学检查试管法凝血时间均明显延长,普通试管里血液未能凝固;PT、APTT和TT均延长,纤维蛋白原明显减少,基本检测不出,3P阳性和D-二聚体增加,呈脱纤维蛋白原血症状态。脑出血患者因无手术指征,保守治疗病情稳定后自动出院,1例急性肾功能衰竭患者因无法人工肾治疗而自动出院(后证实死亡)。其余5例痊愈出院。结论提示该蛇咬伤可引起患者体内凝血系统被激活而继发纤溶亢进完全脱纤维蛋白状态的DIC样血液学改变,如不及时治疗,可引起严重合并症,甚至死亡。     

肽转运载体的分子特征及其分布

动物体内的肽转运载体目前发现的至少有五种,其中研究最为广泛的是：PepT1和PepT2。PepT1和PepT2都是依质子的寡肽转运载体(POT)家族的成员。PepT1是低亲和力／高容量的肽载体,PepT2高亲和力／低容量的肽载体。PepT1主要在消化道中表达,在肾脏中也有微弱的表达;PepT2主要在肾脏中表达。这些肽载体的分子结构特征主要有：(1)有12个假想的穿膜区,在9区和10区之间有一大的胞外环,且所有穿膜区内的序列都高度保守,胞外环上的序列保守的很少;(2)被编码的蛋白上有多个N-糖基化和蛋白激酶的识别位点,它们可能参与肽转运的调控;(3)PepT1上的His-57和PepT2上的His-87是最关键的组氨酸残基,它们可能是转运蛋白发挥吸收功能时最关键的结合位点;(4)不同动物肽转运蛋白的氨基酸范围在707到729之间,且不同动物相同器官肽转运载体的同源性高(大约80％),同种动物不同器官肽转运载体的同源性低(大约50％)。了解肽载体的分子特征和组织分布,可以更好地理解肽吸收的分子机制并有利于肽类药物的研发。     

蛇毒类凝血酶calobin在毕赤酵母中的表达

蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物。参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中表达,得到了分子量约为32kD的重组calobin蛋白,经甲醇诱导培养,表达产物可获得3.5g/L的高表达量。重组蛋白经过阴离子交换柱Q-Sepharose Fast Flow和分子筛Sephacryl-S-100凝胶过滤层析等纯化步骤进行了初步纯化。纯化后的重组calobin可以在纤维蛋白原平板上形成水解圈,经SDS-PAGE实验显示,重组蛋白能水解纤维蛋白原的Aα链,产生一条约40kD左右的降解带。在实验中未能发现重组calobin对纤维蛋白原的凝固作用。