基因工程抗体研究进展

基因工程抗体研究进展刘喜富,黄华梁（中国科学院遗传研究所北京１００１０１）自１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ等创立了杂交瘤技术以来,单克隆抗体已广泛应用于临床疾病的诊断,治疗和预防以及基础理论研究等多个领域,取得了令人鼓舞的结果。但由于鼠单克隆抗体对人体具有免疫原性,不能重复使用,影响疗效,而且生产单抗的成本较高,难以普及使用,围绕如何降低鼠源单克隆抗体的免疫原性以及在大肠杆菌中表达抗体基因的问题, 基因工程抗体技术得以产生和发展。     

具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1二硫键稳定Diabody的制备

目的：对天然噬菌体抗体库进行筛选并对抗体进行体外亲和力成熟,获得高亲和力人源性抗PD-L1抗体,然后对该抗体进行二硫键稳定改造,获得具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1的二硫键稳定Diabody。方法：首先以PD-L1重组蛋白为抗原在天然噬菌体Fab抗体库中筛选Fab抗体,其次分析结合能力较好的抗PD-L1的Fab抗体可变区基因中的热点,通过对轻链、重链CDR3区的7处热点随机突变构建噬菌体抗体突变库,从中筛选出亲和力得到提高的抗体。最后在抗体骨架区引入两个二硫键,构建二硫键稳定的抗PD-L1的ds-Diabody,并在毕赤酵母GS115中进行表达。结果：该方法筛选获得了6株特异性抗PD-L1噬菌体Fab抗体,对结合能力较好的其中一株抗体CDR3区的热点进行随机突变,成功构建库容为1.14×10⁸ CFU/mL的噬菌体抗体突变库,并从中筛选出亲和力提高约6倍的噬菌体抗体突变株。对该抗体骨架区进行二硫键引入,成功构建与表达二硫键稳定的ds-Diabody。结论：构建的ds-Diabody比Fab抗体与PD-L1结合亲和力高、稳定性好,为药物开发、肿瘤治疗等研究P...     

十字花科蔬菜柱头选择性受精特性初步研究

在我国,十字花科蔬菜作物在生产中占有非常重要的地位。目前,十字花科蔬菜主要采用自交不亲和系和雄性不育系生产一代杂种种子,其中自交不亲和系已在白菜、甘蓝等蔬菜的杂种生产中得到广泛应用,而雄性不育系还只是限于一部分十字花科蔬菜的杂种生产〔１〕。对于自交不亲和系,一般都是采用蕾期剥蕾授粉来繁殖亲本系统。蕾期授粉费工费时,种子繁殖量有限,加之多代自交,自交不亲和系存在退化现象〔２〕。雄性不育系的选育受不育源限制,且年限长、工作量大,组合选配往往受不育系材料的限制,而转育较多的不育材料需花费较长的时间〔２…     

蕲蛇酶对80例高粘血症的纤维蛋白原浓度作用的研究

目的　通过蕲蛇酶对 80例高粘血症患者的治疗 ,研究其对纤维蛋白原的影响 ,试图寻找防栓抗栓的理想药物。方法　采用蕲蛇酶注射液 0 .75 u静脉滴注 ,每天 1次 ,连用 1 4天 ,观察治疗前后临床症状、甲襞微循环 ( NFM)、血液流变学及脂代谢的变化。结果　该药除具有缓解临床症状 ,改善 NFM,降低血粘度、红细胞压积、血小板吸附率及改变脂代谢紊乱等作用外 ,还能有效地降低血浆纤维蛋白原含量。结论　蕲蛇酶注射液对防治血栓形成具有重要意义。     

猪链球菌2型的纤连蛋白/血纤维蛋白原结合蛋白基因的序列分析

目的 为确定猪链球菌2型(SS2)江苏分离株9801是否具有纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因(fbps)。方法 根据已发表的SS2 fbps序列,设计并合成1对引物,以SS2江苏分离株的基因组为模板,采用聚合酶链反应(PER)方法扩增fbps,克隆于pMD-T18载体。测定阳性质粒插入序列。利用DNAstar软件,比较所测序列与不同来源SS2的fbps和FBPS与链球菌属其他种同源蛋白的同源性。结果 扩增的fbps为1 938 bp,江苏分离株与猪源致病性SS2荷兰分离株的fbps序列有5个碱基不同,与ATCCA3765株有3个碱基不同,同源性均达99．99％以上。推导的氨基酸序列比较,分别有4个和2个氨基酸不同,同源性均为99％以上。纤连蛋白结合蛋白(FBPS)无前导序列,无锚定序列,与链球菌属其他种的同源Fn结合蛋白的同源性为68．8％～76．0％。结论 FBPS是一种无锚的黏附素。     

人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶凝聚纤维蛋白原及释放血纤肽的不同机制

人纤维蛋白原经人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶作用后,释放出血纤纤肽A和血纤肽B,二者可用高效液相色谱法分离鉴定。人凝血酶首先释放出血纤肽A,浙江蝮蛇毒类凝血酶则先释放出血纤肽B,甚至在纤维蛋白凝聚之前,血纤肽B的释放量早已达到极值,即使凝块形成后,血纤肽A与血纤肽B之比仍为1:3。人凝血酶在钙离子存在下,作用于纤维蛋白原时,其凝聚时间缩短,血纤肽A释放量不变,血纤肽B释放量则增高。在同样条件下,浙江蝮蛇毒类凝血酶作用时,血纤肽A释放量无明显变化,血纤肽B释放量却降低近1/3。无论是人凝血酶还是浙江蝮蛇毒类凝血酶,当与纤维蛋白原在2M尿素存在下反应时,均无可见凝块形成,但在37℃下用350nm光吸收监测其聚合过程仍可见光吸收上升,溶液呈乳白色。本文首次报道用电子显微镜观察比较了人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶作用人纤维蛋白原后所形成的凝块结构。前者形成的结构致密,纤维长而细;后者形成的结构松散,较透明,纤维短而粗,这种结构更易为体内纤溶系统所降解。     

猪心组织型纤溶酶原激活剂的纯化鉴定

本文介绍了一种简便易行的纯化组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的方法。新鲜猪心组织经丙酮脱脂脱水,制成干粉,再经醋酸钾缓冲液提取。提取液经阳离子交换柱、肝素柱亲和层析及凝胶柱层析分离纯化。经SDS凝胶电泳分析证明纯化的t-PA只在分子量为67000道尔顿位置出现一条染色带。同时把该蛋白带转移到纤维蛋白板上,也在同一位置出现溶解带。     

GPRP—scu—PA（144—411）的基因构建及其性质研究

本文将人工合成的编码ＧＰＲＰ四伏的寡核甙酸序列连接 ｓｃｕ－ＰＡｃＤＮＡ的５’端,并将它重组克隆到表达载体ｐＫＫＫ２３３－２中,在大肠杆菌中得到５％表达量。表达产物经亲和层析得到纯化,并测得其Ｋｍ为４０μｍｏｌ／Ｌ。体外纤咬继ＬＵＫ的２－３倍,对纤维蛋白的亲和性比ＬＵＫ提高了６倍,并且对纤维蛋白原的亲和力很低。     

免疫胶体金标记显示波形纤维与核孔复合体的结合

中间纤维与细胞核的关系是一个亟待解决的重要问题。本文采用火鸡红细胞作为研究材料,首先用细胞分级抽提结合免疫印迹反应显示火鸡红细胞中间纤维蛋白为波形纤维蛋白。然后,我们采用细胞分级抽提结合包埋前免疫胶体金标记的方法显示胞质中间纤维被抗波形纤维蛋白抗体-蛋白A-胶体金特异标记。同时,我们显示结合于核孔复合体上的胞质纤维被抗波形纤维蛋白抗体-蛋白A-胶体金所特异标记。本文结果表明,结合于核孔复合体上的胞质纤维是波形纤维,并且提示波形纤维可能通过与Nup 180的结合附着在核孔复合体上,为进一步探讨中间纤维与核孔运输的关系提供了初步实验证据。     

蝮蛇抗栓酶治疗银屑病产生耐受性原因探讨

目的通过治疗银屑病５０例临床观察,探讨部分病例未能治愈与机体对蝮蛇抗栓酶产生耐受性原因分析。方法用蝮蛇杭栓酶０．７５ＩＵ加入生理盐水中静滴,治疗前、后及各疗程间监测血小板计数与血浆纤维蛋白原变化。结果药效消失后,血小板计数与血浆纤维蛋白原增高超过治疗前水平。结论该类药物治疗其他血栓性疾病可将血小板计数与血浆纤维蛋白原增高作为药效消失及耐受性产生的一项指标。