Isolation of a cDNA encoding a protease from Perinereis aibuhitensis Grube

The cDNA encoding a protease of Perinereis aibuhitensis Grube （PPA） was cloned. The deduced amino acid sequence analysis showed that the protein had 49% identity to the C-terminal amino acid 169-246 of serine protease of Heterodera glycines. Northern blotting analysis indicated that the cDNA could hybridize with mRNA of approximately 260 bases isolated from the marine earthworm. The cDNA was amplified by polymerase chain reaction and cloned into pMAL-p2 to construct expression vector pMAL-PPA. pMAL-PPA was introduced into Escherichia coli BL21（DE3） and overexpression of PPA fused with maltose binding protein was achieved by isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside induction. The fusion protein was purified by affinity chromatography on an amylose resin column and ion-exchange chromatography on a diethylaminoethyl-Sepharose 4B column. Rabbits were immunized with the purified protein and antiserum was prepared. The antibody could react with a protein of approximately 9 kDa extracted from the marine earthworm as shown by Western blotting analysis. The activity analysis of the recombinant PPA suggested that it was probably a plasminogen activator.     

纤维蛋白胶一药物缓释系统的研究进展

纤维蛋白胶作为一种生物蛋白制剂,除了应用于伤口止血、封闭组织缺损、防止组织粘连之外,也可以作为药物缓释载体。本文就纤维蛋白胶-药物缓释系统的研究及临床应用作以综述。     

抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体的制备

目的:获得人源性抗P-选择蛋白(selectin)特异性抗体,为相关疾病治疗奠定基础。方法:在HEK293细胞中真核分泌表达人P-选择蛋白功能性片段,以此蛋白片段作为抗原,利用本室构建的大容量全合成人源性噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮固相筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的一株单链抗体A1改造成全抗体(IgG1),重组质粒转染H293细胞后,抗体得到表达;表达后在全抗体水平上用ELISA和Western印迹分别验证了A1抗体的特异性,并通过非竞争ELISA方法初步测定这株抗体的亲和力。结果:3轮筛选得到3株特异性噬菌体抗体,其中富集效果最好的单链抗体A1改造成全抗体形式后特异性良好,抗体亲和力Kd=2×10-8 mol/L。结论:筛选得到一株特异性较好的抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体A1,其特异性和亲和力较好,有继续开发的价值。     

D-二聚体和纤维蛋白原水平预测支气管动脉栓塞术治疗支气管扩张大咯血临床疗效及预后的临床价值

目的:探讨D-二聚体和纤维蛋白原水平预测支气管动脉栓塞术治疗支气管扩张大咯血的临床疗效及预后的临床价值。方法:选取50例2011年11月至2016年11月期间于我院治疗的支气管扩张大咯血患者进行研究,所有患者均进行支气管动脉栓塞术治疗,根据临床疗效评价标准结果分为总有效组(n=40)和无效组(n=10),随访1年,根据预后的复发情况分为预后好组(n=38)和预后差组(n=12),分别比较总有效组和无效组、预后好组和预后差组D-二聚体和纤维蛋白原水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析D-二聚体和纤维蛋白原对支气管扩张大咯血患者的预测价值。结果:手术后总有效组和无效组患者D-二聚体、纤维蛋白原水平均高于手术前,且总有效组高于无效组(P0.05)。手术后预后好组和预后差组患者D-二聚体、纤维蛋白原水平均高于手术前,且预后好组高于预后差组(P0.05)。ROC曲线分析显示,D-二聚体和纤维蛋白原对支气管扩张大咯血患者均具有较高的敏感度和特异度,曲线下面积分别为0.725和0.806。结论:采用支气管动脉栓塞术治疗支气管扩张大咯血,疗效及预后比较好的患者D-二聚体和纤维蛋白原水平均较高,并且其敏感度和特异度较高,具有一定的临床预测价值。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清PCT、hs-CRP、D-D和FIB与肺功能和预后的关系研究

目的:探究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血清降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、D-二聚体(D-D)和纤维蛋白原(FIB)与肺功能和预后的关系。方法:选择2017年8月至2019年8月期间我院诊治的88例AECOPD患者作为观察组,根据患者生存情况将患者进一步分为85例存活组和3例死亡组。同时选择同期在我院进行健康体检的50名志愿者作为对照组。检测各组患者的血清PCT、hs-CRP、D-D和FIB水平,采用肺功能检测仪检测第一秒用力呼气容积(FEV1)%、第一秒用力呼气容积占用力肺活量比值(FEV1/FVC)和最大通气量(MVV)肺功能指标,采用Pearson相关性分析进行各指标的相关性分析。结果:与对照组相比,观察组的血清PCT、hs-CRP、D-D和FIB水平均明显升高(P0.05)。与存活组相比,死亡组的血清PCT、hs-CRP、D-D和FIB水平均明显升高(P0.05),FEV1%、FEV1/FVC和MVV指标均明显下降(P0.05)。Pearson相关性分析显示,血清PCT、hs-CRP、D-D和FIB水平均与FEV1%、FEV1/FVC和MVV肺功能指标呈负相关(P0.05)。结论:AECOPD患者肺功能下降和不良预后与血清PCT、hs-CRP、D-D和FIB水平升高密切相关,在AECOPD患者的预后预测中具有一定临床价值。     

创伤性颅脑损伤患者血清Trx1、FGL2水平与GCS评分及预后的关系研究

摘要 目的：研究创伤性颅脑损伤（TBI）患者血清硫氧还蛋白1（Trx1）、纤维蛋白原样蛋白2（FGL2）水平与格拉斯哥昏迷指数（GCS）评分及预后的关系。方法：将从2017年2月～2019年2月广州中医药大学第一附属医院收治的120例TBI患者纳入研究。将其按照入院即刻GCS评分分成轻度组（13～15分）46例,中度组（9～12分）38例,重度组（3～8分）36例。另取同期于广州中医药大学第一附属医院进行体检的健康志愿者40例作为对照组。比较各组人员血清Trx1以及FGL2水平,并作相关性分析。此外,将重度组患者按照预后结果的不同分成死亡组以及存活组。比较两组血清Trx1以及FGL2水平,以受试者工作特征（ROC）曲线分析血清Trx1以及FGL2对重度TBI患者预后的预测价值。结果：轻度组、中度组及重度组患者的血清Trx1水平均低于对照组,且重度组低于中度组,中度组又低于轻度组（P＜0.05）;轻度组、中度组及重度组患者的血清FGL2水平均高于对照组,且重度组高于中度组,中度组又高于轻度组（P＜0.05）。经Pearson相关性分析可得：TBI患者血清Trx1水平与GCS评分呈正相关关系（r/P=0.554/0.001）,而血清FGL2水平与GCS评分呈负相关关系（P＜0.05）。死亡组患者血清Trx1水平低于存活组（P＜0.05）,而FGL2水平高于存活组（P＜0.05）。经ROC曲线分析发现：血清Trx1联合FGL2预测重度TBI患者预后的曲线下面积、敏感度以及特异度均高于上述两项指标单独检测。结论：Trx1以及FGL2在TBI患者血清中存在明显的异常表达,且与GCS评分相关,可能作为临床TBI诊断、病情判断以及预后评估的辅助生物学标志物。     

2010-2019年北京地区腹泻患儿中人腺病毒41型Fiber基因分子特征和进化分析

人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一.为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增Fiber全基因,使用多种生物信息学软件进行系统发生、遗传进化、种群演变和选择压力等分析.结果显示HAdV-41本地毒株存在1644碱基(547氨基酸)和1689碱基(562氨基酸)两种长度的Fiber基因,截短的15个氨基酸位于Fiber蛋白纤维轴区.Mann-Whitney U秩和检验提示检测到感染短Fiber基因的HAdV-41的患儿年龄更小(P=0.036).同源性分析结果显示Fiber基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均大于97％,主要分为四个进化分支(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),其中Ⅰ和Ⅲ是主要的流行分支,分支Ⅰ主要在国内流行,而分支Ⅲ全球均有流行.HAdV-41共祖起源可追溯到1856年,平均进化速率每年为6.81×105碱基替换/位点,10年间理论有效种群一直比较平稳呈缓慢下降趋势.压力选择分析表明,一个正向和三个负向选择位点均位于Fiber蛋白的纤维轴区.上述结果表明2010-2019年间不同进化分支的HAdV-41在北京地区流行,进化速率稳定.Fiber蛋白轴区存在两种不同类型的氨基酸缺失.     

多孔自凝固磷酸钙/纤维蛋白1∶1比例血管化的分析研究

目的:观察复合纤维蛋白的多孔自凝固磷酸钙的理学性能及体内血管化情况,探讨其各组份对材料生物学特性的影响,为其临床应用提供实验数据.方法:1)采用凝固时间测定和电镜观察材料表面和断面等方法对复合支架材料构造和理学性能进行分析;2)将24只新西兰白兔随机分为3组,每组8只,分别在每只实验兔腰背筋膜下植入1:1、CPC两种比例材料各一枚.术后2、4、8周进行取材,对材料及其周围组织进行组织学观察、微血管情况定量分析.结果:1)CPC/FG复合支架材料以1∶1(g/ml)混合后,与单纯的CPC相比,初凝时间延长,而终凝时间没有明显的统计学差异;电镜观察发现多孔自凝固磷酸钙复合了纤维蛋白胶之后,纤维蛋白胶分布均匀贯穿多孔自凝固磷酸钙晶体之间,并将其紧密相连;2)术后2周材料外周可见幼稚的微血管.1∶1组高于CPC组(P＜0.05).4周微血管密度达到高峰,相对于2周时有明显差异.1∶1组高于CPC组(P＜0.05).8周时微血管密度相对4周没有显著差异.各组微血管密度与4周时没有明显变化(P＞0.05).结论:复合支架材料具有合适的凝固时间和较好的结构,纤维蛋白胶及其降解产物影响复合材料在体内的微血管密度,使复合材料血管化能力提高,其可作为细胞载体和骨缺损修复支架材料应用于临床和实验中.     

想方设法激发中学生学习英语的兴趣

提到英语学习,总有学生认为是枯燥乏味的;谈到学习英语的诀窍,即使是老师也大都只能告诉你要多读多背.长此以往,学生便对英语学习失去了兴趣,而上英语课时学生也只培养了记笔记和听写的被动习惯。我们知道"兴趣是最好的老师",如果连兴趣都没有了,那么谈何学习的动力呢?作为一名英语老师,我在教学中想方设法要激发学生的英语学习兴趣.     

B细胞利用机械能判别与抗原的亲和力

高亲和力抗体的产生是依赖于B细胞从抗原呈递细胞表面提取抗原的能力。B细胞首先与抗原呈递细胞(APC)相结合,其膜上的B细胞受体(BCR)与APC膜上的抗原结合形成免疫突触。随后B细胞从APC的膜上获取了抗原,并对其进行加工,呈递给辅助性T细胞。然而,B细胞是如何从抗原呈递细胞膜上获取抗原的,其机制目前尚不清楚。研究人员利用具有流