2种微小RNA实时定量PCR检测方法的比较

目的:对目前最常用的检测微小RNA(miRNA)的茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法进行比较。方法:分别用茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法检测人乳腺癌细胞MCF-7中U6和23种miRNA的表达,利用定量PCR分析软件和琼脂糖凝胶电泳方法,将2种方法在引物设计难度、特异性与灵敏度,以及检测通量方面进行比较。结果:茎环法的特异性和灵敏度比PAP法高,但引物设计难度大,检测通量低;PAP法引物设计难度较低,检测通量较高,但特异性和灵敏度较差。结论:茎环法实时定量PCR适于有针对性地检测小规模miRNA,而PAP法则适于大规模miRNA筛选实验。     

利用靶定基质蛋白基因m的小干扰RNA抑制2009甲型H1N1流感病毒的复制

目的:设计、构建并筛选针对流感病毒基质蛋白基因m的小干扰RNA(siRNA),检测其对2009甲型H1N1流感病毒复制的抑制效果。方法:设计3条针对流感病毒m基因的siRNA,并克隆到短发夹型(shRNA)siRNA表达载体pSilencer2.1-U6-hygro上;经测序证明构建成功后,将表达3种siRNA的质粒和阴性对照质粒psiRNA-control分别转染MDCK细胞,用潮霉素筛选稳定表达细胞株,用H1N1流感病毒感染细胞,通过Real-time PCR和Western印迹检测干扰效果。结果:构建了3个针对流感病毒m基因的siRNA表达质粒,3种siRNA均使m基因的mRNA水平降低,其中M1-306的抑制效率达60%;3种siRNA均使流感病毒NA蛋白的表达量降低,M2-25、M1-105的抑制效率明显,M1-306略低。结论:针对m基因的siRNA可以有效抑制流感病毒在MDCK细胞中的复制。     

普伐他汀对泡沫细胞内胆固醇酯的影响及与小凹蛋白-1的关系

本文旨在观察普伐他汀对鼠源巨噬细胞性泡沫细胞内胆固醇酯含量的影响,探讨此作用与小凹蛋白一l的关系。采用体外培养的鼠源性巨噬细胞株作为研究对象,加入氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,OX-LDL）使其形成泡沫细胞,运用高效液相色谱测定细胞内胆固醇酯的改变,同时运用Western blot检测细胞中小凹蛋白-1的表达,并观察普伐他汀对细胞内胆固醇酯和小凹蛋白-1影响的量效和时效关系。结果显示：普伐他汀可明显降低泡沫细胞内的胆固醇酯与总胆固醇的比值,且在一定范围内呈剂量依赖性和时间依赖性。在泡沫细胞中加入普伐他汀后能够促进小凹蛋白-1的表达,呈剂量依赖性和时间依赖性。上述结果提示普伐他汀通过降低细胞内胆固醇酯的含量,减轻细胞泡沫化程度。普伐他汀的这一作用可能与促进小凹蛋白-1表达上调有关。     

氯通道:在心脏中起何作用?

在心脏中发现氯通道已有十余年,目前已知氯通道是一类成员较多的离子通道超家族。心肌氯通道的作用可能是多重的,由于阻断氯通道或Cl^-替代对心肌的电特性产生明显影响,而心肌氯通道的种类和分布又存在明显的种属差异,提示心肌氯通道的主要作用可能在于调控阳离子通道,或为阳离子通道的正常活动提供一个合适的离子环境。因此,研究氯通道与阳离子通道之间的关系可能有重要的生理和病理生理学意义。     

核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响

将合成的核受体相关因子1（nuclear receptor-related factor 1,Nurr1）特异性短发夹寡核苷酸（small-hairpin RNA,shRNA）序列插入真核表达载体pSilen Circle（pSC）,构建Nurr1基因特异性shRNA真核表达载体,转染体外培养多巴胺能神经前体细胞系MN9D,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其对MN9D细胞内源Nurr1的干扰作用及其对酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）表达的影响,并在倒置显微镜下观察MN9D细胞神经突起生长的情况,探讨Nurr1 shRNA表达载体对多巴胺能细胞表型标记物删和以神经突起延长为特征的细胞成熟的影响。结果表明,脂质体组细胞和转染阴性对照质粒的MN9D细胞内Nurr1、TH的表达正常,而转染Nurr1 shRNA真核表达载体（pSC-N1和pSC-N2）的MN9D细胞内Nurr1和TH的mRNA水平明显降低,Nurr1 mRNA的下降率分别为62．3％和45．6％,TH mRNA的下降率分别为76.3％和62．6％。同时Nurr1和TH蛋白的表达亦明显下调,Nurr1蛋白的下降率分别为57．4％和72．0％,TH蛋白的下降率分别为79．1％和70．1％。另外,转染Nurr1 shRNA真核表达质粒的MN9D细胞神经突起延长有所减少,但是与正常细胞无明显差异。结果提示：Nurr1 shRNA真核表达载体能显著下调MN9D细胞内源Nurr1和TH mRNA和蛋白的表达,同时可能对MN9D细胞的神经突起延长有一定的抑制作用。Nurr1 shRNA表达载体的成功构建为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。     

不同发育时期追施氮肥对冬小麦旗叶中光合酶活性的影响

小麦开花后,随着旗叶的衰老,旗叶中1,5-二磷酸核酮糖羧化酶（RuBPC）、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）和乙醇酸氧化酶（GO）活性呈下降趋势。随着追施氮肥时期的推迟,光合酶活性呈增加趋势,这意味着氮肥追施时间后移有利于提高小麦光合速率。在旗叶衰老后期,大穗型品种小麦旗叶中光合酶活性略高于多穗型品种小麦。     

小蠹虫对针叶类寄主树木的选择危害机制

小蠹虫对寄主植物的选择是一个非常复杂的过程,也是近年来小蠹虫生态学研究的一个热门话题。文章对国内外小蠹虫寄主搜寻、寄主识别,以及适宜寄主选择等机制等方面的最新研究成果进行了系统报道。     

白桦雌花发育过程中内源激素动态变化

以酶联免疫吸附法（ELISA）测定七年生白桦嫁接幼树雌花发育过程中脱落酸（ABA）、吲哚乙酸（IAA）、玉米核苷素（ZR）及赤霉素（GA）的含量结果表明：ABA的含量先升后降,高浓度2R分别与低浓度的IAA、GA协同作用可促进白桦雌花分化。     

植物中microRNA的合成及在发育和抗逆中的作用

介绍了植物microRNA（miRNA）的结构、合成、作用机制及其在植物生长发育和逆境胁迫中作用的研究进展。     

枸杞负泥虫的发育起点温度和有效积温

根据室内饲养观察结果估测,枸杞负泥虫LemadecempunctataGebler各虫态的发育起点温度分别为卵期(7.8±2.2)℃,若虫期(7.6±2.1)℃,预蛹期(8.1±0.9)℃,蛹期(9.3±3.0)℃,产卵前期(8.2±3.2)℃;有效积温分别为卵期88.4日·度,若虫期138.3日·度,预蛹期71.3日·度,蛹期65.9日·度,产卵前期126.8日·度;全世代的发育起点温度为(7.7±1.9)℃,有效积温为526.8日·度。根据有效积温法则推算,枸杞负泥虫在宁夏地区年发生理论代数为3.81(代),与实际观察结果基本吻合。