Secretory expression of E2 main antigen domain of CSFV C strain and the establishment of indirect ELISA assay

The sequence encoding an E2 main antigen glycoprotein of the C strain of classical swine fever virus (CSFV) was highly expressed in the host cell E. coli BL21-CodonPlus (DE3)-RIL using the pGEX-4T-1 expression vector and the soluble recombinant product was purified with Glutathione Sepharose TM<'4B> by centrifugation. The soluble recombinant protein showed good immune reactions and was confirmed by Western blot using anti-CSFV-specific antibodies. Then an indirect ELISA with the purified E2 protein as the coating antigen was established to detect antibody against CSFV. The result revealed that the optimal concentration of coated antigen was 0.6 μg/well and the optimal dilution of serum was 1:80. The positive cut-off value of this ELISA assay was OD<,tested serum>/OD<,negative serum>≥2.1- The E2-ELISA method was evaluated by comparison with the indirect hemagglutination test (IHAT). When a total of 100 field serum samples were tested the sensitivity and specificity were 90.3% and 94.7% respectively. Specificity analysis showed that there were no cross-reactions between BVD serum and the purified E2 protein in the E2-ELISA.     

金抗体替代ELISA中的天然抗体用于溶菌酶检测

目的 酶联免疫吸附测定(ELISA)被广泛用于抗体或抗原的检测,并被视为临床实践中的金标准,可提供相对可靠、灵敏和特异的检测结果.ELISA的本质是抗原与相应抗体之间的特异性相互作用.然而,天然抗体固有的不稳定性是ELISA的一个难以克服的弱点,并可能导致检测结果的重现性差甚至错误的诊断结果.本课题组先前应用构象工程方...     

禽Ⅰ型副粘病毒各种禽源分离株毒力及其相关基因的研究

用测定新城疫病毒(NDV)毒力的经典方法,即鸡胚平均死亡时间(MDT)和脑内接种致病指数(ICPI),对源于鸡、鸽、鹅、珍珠鸡、孔雀、鹌鹑和画眉鸟等7种禽(鸟)源的共14个禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1)广西分离株,分别测定了毒力。同时对分离株F基因的N一端前段和HN基因的e末端片段进行扩增、测序和分析,并绘制系谱树。结果发现,分离株的MDT在36h～75h之间,除1株鸽源毒株gxp22的ICPI值为0外,其余分离株在1．09～1．95之间;除孔雀源的分离株gxpc52在F基因裂解位点附近的氨基酸序列为^112R-RQ-R-R-F^117之外,其它13株均为^112R-R-Q-K-R-F^117,都符合强毒株的特征。所有分离株与国内参考强毒株F48E8和国外参考强毒株HER／33在HN基因e末端终止密码子的位置相同,也符合强毒株的特征。根据F基因核苷酸序列绘制的系谱树发现,近几年来在广西流行的APMV-1毒株的基因型为Ⅶd亚型;根据HN基因核苷酸序列绘制的系谱树表明,广西各种禽源APMV-1分离株可分为2个群。研究的结果表明,根据F基因裂解位点附近的氨基酸序列和HN蛋白翻译的终止密码子的位置判定APMV-1毒力的结果,都与毒株在临床上的致病情况相符。因此,根据F基因和HN基因序列和结构的特征,均可以判定APMV-1临床分离株的体内致病性。     

HPLC法测定花生根中白藜芦醇的含量

本文采用反相高效液相色谱法测定了花生根中白藜芦醇的含量.选用ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(4555)为流动相,流速为0.5 mL/min,紫外检测波长为303nm.结果表明,白藜芦醇峰面积与其浓度之间呈现良好的线性关系,线性回归方程为Y=15879.28X+12350.2,相关系数为0.9996.方法简单,快速,精密度好,回收率为98.8%,相对标准偏差为1.79%.     

薄荷中迷迭香酸的分离提取及含量测定

本文对薄荷中的迷迭香酸进行了分离提取及含量测定研究。以水为溶剂,热回流浸提,采用硫酸亚铁比色法对薄荷中的迷迭香酸进行定性分析,用高效液相色谱法进行含量测定,得到薄荷中的迷迭香酸的含量为0．156％。该法准确度高,结果稳定。     

耙齿菌糖蛋白的提取分离、理化性质及抗炎活性

耙齿菌发酵物经水提醇沉得醇沉Ⅰ、醇溶Ⅱ两部分;Ⅰ透析得内液Ⅰ1、外液Ⅰ2。苯酚-硫酸法、Lowry法、间羟基联苯法测Ⅰ的总糖、蛋白质、糖醛酸的含量分别为43．22、21．11、4．32％;除蛋白和氨基酸分析证明Ⅰ为糖蛋白。气相色谱测定Ⅰ的组成糖及摩尔比为Ara：Xyl:Man：Gal：Glu=1：0．5：4．2：1．6：6．1;HPLC测定分子量为60kD;小鼠耳肿胀实验证实Ⅰ具有抗炎活性。     

白菜型油菜种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究

采用热变性、硫酸铵分步盐析及离子交换层析和分子筛层析等方法,从白菜型油菜种子中得到胰蛋白酶抑制剂(BNTI)。SDS-PAGE检测为单一条带,表明纯化的胰蛋白酶抑制剂电泳均一。SDS-PAGE测定其分子量约为14．4kD,等电聚焦测定其等电点约为4．7。BNTI具有较高的热稳定性。本文还考察了温度对溶液中BCH蛋白构象的影响,荧光光谱和测定抑制活力结果表明BNTI中的色氨酸和酪氨酸残基位于疏水部位。     

外来有害植物种群扩散的综合测定方法

在外来有害植物试点调查的基础上,结合外来有害植物的特点,介绍了外来有害植物种群测定的样地选择和设置方法.对外来有害植物入侵生境条件、有性繁殖能力、无性繁殖能力及入侵现状评价、种群扩散测定的内容和计算方法进行了概括.并根据以上资料,计算了外来有害植物综合分析指数,分析外来有害植物入侵现状以及发展趋势,为综合治理外来有害植物提供参考资料.     

大孔型NaCS-PDMDAAC微胶囊固定化细胞在摇床和鼓泡塔中的培养研究

NaCS-PDMDAAC生物微胶囊囊膜较为致密,影响胶囊内外物质的交换,从而影响胶囊内细胞的生长。利用淀粉酶对致孔剂淀粉的降解作用制备了一种大孔型的纤维素硫酸钠_聚二甲基二烯丙基氯化铵（NaCS-PDMDAAC）生物微胶囊,实验表明胶囊的孔径和通透性能都有了很大的提高。将酵母和大肠杆菌作为模型细胞包埋于胶囊中分别通过摇瓶和鼓泡塔半连续培养,在鼓泡塔中胶囊内细胞的密度要高于摇床,表明氧气的传递是胶囊内好氧细胞生长的限制因素,大孔胶囊由于囊膜孔径变大,氧气的传递更为快速,在鼓泡塔中大孔型胶囊内的最大细胞密度比常规胶囊要高出20%～110%。由于对氧气的需求量的不同,大肠杆菌菌浓提高的程度要高于酵母。     

植酸酶phyAm基因结构延伸突变改善酶的热稳定性

将来源于黑曲霉N25的植酸酶基因phyA^m重组于大肠杆菌表达载体pET30b(+),以重组表达载体pET30b-F-phyA^m为模板经PCR扩增获得结构延伸突变植酸酶基因phyA^e（在植酸酶基因C端增加了来源于pET-30b-F-phyA^m载体上13氨基酸残基）。含突变基因的重组表达载体pPIC9k-phyA^e在GS115酵母中表达。纯化的突变酶PP-NP-e与野生型酶PP-NP-m8相比：PP-NPAe的最适反应温度上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高21%,比活力略有提高。最适反应pH为5.6,有效pH范围pH4.6到pH6.6。比未突变酶扩大了0.4单位。