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101.
目的:建立一种在代谢工程改造的毕赤酵母菌中高效敲除靶标蛋白基因的方法。方法:构建敲除载体,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因为靶基因,以尿嘧啶合成关键酶URA3基因为营养缺陷型筛选标记,第一步重组利用ura3正筛选获得敲除载体在酵母染色体中的定点整合,第二步通过5-氟乳清酸(5-FOA)筛选到表型为ura3-的克隆,ura3基因被剔除的同时,目的基因GM-CSF也随之丢失,实现第二次重组;利用基因组PCR和蛋白电泳进行鉴定。结果:通过两步基因同源重组,敲除了毕赤酵母GJK01的报告蛋白GM-CSF的编码基因388 bp,PCR结果显示该基因已完全丢失,SDS-PAGE分析无GM-CSF表达。结论:仅通过2周时间的筛选、鉴定,在毕赤酵母GJK01中敲除了报告蛋白GM-CSF的编码基因,突变菌株的阳性率达到50%,最终建立了以URA3为筛选标记的两步基因同源重组敲除目的基因的方法。 相似文献
102.
中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是新发现的中性粒细胞抗病原机制,是天然免疫系统的重要组成部分。但病原体在进化中形成了针对NETs的免疫逃逸机制。不同的病原体逃逸NET的机制不同,本文主要介绍3种机制:降解NETs-DNA、表面分子机制和NETosis调控。 相似文献
103.
采用测定肺泡巨噬细胞(AM)趋化性和AM产生中性粒细胞趋化因子的实验技术。观察到糖皮质激素体外直接作用于大鼠AM悬液或大鼠皮下注射7d都可抑制AM的趋化性,并且肺灌洗液中的AM数量明显减少;但注射3d组无上述效应。以糖皮质激素处理AM 16h可使AM产生的中性粒细胞趋化因子强度明显降低。结果表明糖皮质激素可抑制AM的趋化性和抑制AM产生中性粒细胞趋化因子。提示这可能是较长期应用糖皮质激素抑制免疫和炎症反应、降低肺部防御能力的部分机理。 相似文献
104.
利用激光共聚焦扫描显微镜和装有CCD系统的荧光显微镜 ,研究在单脉冲电场作用下经fluo 3/AM标记的鸡胚小脑粒细胞内自由Ca2+浓度 ( [Ca 2+]i)的动态变化过程 .结果表明 :在单个电脉冲作用下 ,细胞内Ca2+浓度立刻升高并达到其最大值 .Ca2+浓度升高的幅度以及升高的速率具有电场强度的依赖性 .当细胞外Ca2+被过量的EGTA络合或细胞膜上的Ca2+通道被La 3+堵塞后 ,细胞内的Ca2+浓度仍然升高 .细胞内不同区域的Ca2+浓度同时升高 ;两极内的Ca2+浓度早于胞体的Ca2+浓度达到最大值并迅速恢复 . 相似文献
105.
通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶跏2基因,构建重纽质粒,采用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)法、Westernblot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率,探索该基因的沉默表达对K562N胞的抑制作用。结果表明,该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒,转染K562细胞后,其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P〈0.05)、细胞凋亡水平上升(P〈0.05)。与对照组相比,其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达,抑制K562细胞的生物学效应,表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。 相似文献
106.
《微生物学免疫学进展》2021,(1)
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种能引起人和动物发生多种疾病的革兰阳性菌(Gram positive bacterium),并且金黄色葡萄球菌免疫逃逸(immune escap)是导致宿主持续性感染以及诱导细胞死亡的主要原因。现就金黄色葡萄球菌阻止自噬溶酶体(lysosome)的形成、阻碍中性粒细胞(neutrophils)的募集、吞噬作用及抑制巨噬细胞(macrophage)的免疫功能等作一概述。 相似文献
107.
吸人糖皮质激素对哮喘患者外周血CD34+细胞、IL-5和嗜酸粒细胞的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨糖皮质激素对支气管哮喘患者外周血CD_(34)~ 细胞、白细胞介素-5(IL-5)和嗜酸粒细胞(EOS)的影响。方法:选择哮喘急性发作期患者30例,常规取血测定CD_(34)~ 细胞、IL—5和EOS;用吸入治疗2周后,再次取血测定外周血EOS计数、IL—5水平及CD_(34)~ 细胞数目。结果:哮喘患者外周血EOS、IL-5及CD_(34)~ 细胞数明显高于正常组(P<0.01)EOS凋亡指数呈显著下降( P<0.01)。经吸入布地奈德治疗2周后,IL-5、EOS及CD_(34)~ 水平均显著降低。EOS凋亡指数呈显著增加,哮喘患者血清IL-5水平与EOS数呈显著正相关(r=0.92,P<0.01),与CD_(34)~ 细胞数亦呈显著正相关(r=0.90,P<0.01)。结论:糖皮质激素可能影响CD_(34) ~ 造血细胞的释放和向外周组织的迁移。 相似文献
108.
脉冲电场对粒细胞内Ca2+浓度影响的动态变化 总被引:2,自引:0,他引:2
利用激光共聚焦扫描显微镜和装有CCD系统的荧光显微镜,研究在单脉冲电场作用下经fluo-3/AM标记的鸡胚小脑粒细胞内自由Ca2+浓度(i)的动态变化过程.结果表明:在单个电脉冲作用下,细胞内Ca2+浓度立刻升高并达到其最大值.Ca2+浓度升高的幅度以及升高的速率具有电场强度的依赖性.当细胞外Ca2+被过量的EGTA络合或细胞膜上的Ca2+通道被La3+堵塞后,细胞内的Ca2+浓度仍然升高.细胞内不同区域的Ca2+浓度同时升高;两极内的Ca2+浓度早于胞体的Ca2+浓度达到最大值并迅速恢复. 相似文献
109.
目的 探讨K562细胞来源的外泌体(EXO)对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)支持造血和成骨分化相关因子表达的影响.方法 利用超速离心法提取K562细胞培养上清中的EXO并进行鉴定.在体外,诱导BMMSCs的成骨分化,根据是否加入EXO分为3组:BMMSCs+PBS、BMMSCs+EXO(25μg/mL)、BMMSCs... 相似文献
110.
磷脂酶A2对中性粒细胞趋化和粘附的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
胰源性14×10 ̄3u磷脂酶A_2(PLA_2)在体外同大鼠中性粒细胞(PMN)培养60min后,细胞对TNF趋化增强,培养10min后上清液中血栓素(TXB_2)含量比正常增高(P<0.01)。前列环素(PGI_2)含量不变。PLA_2激动剂A23187也能显著加强中性粒细胞对TNF的趋化,并伴有TXB_2释放增多(P<0.01)。此外,PLA_2和A23187还显著增强PMN对玻璃珠的粘附活性。使用PLA_2抑制剂二溴苯乙酮(PBPB)和PLA_2多克隆抗体可抑制外源性PLA_2对PMN趋化和粘附的增强作用,但对A23187的调节作用无效。以上结果表明PLA_2激活及其代谢产物可能介导PMN趋化和粘附作用。 相似文献