沉默MDR1基因增强急性早幼粒白血病耐药细胞HT9药物敏感性

该研究利用短发卡RNA（small hairpinin RNA,shRNA）表达载体沉默HT9急性早幼粒白血病耐药细胞MDRl基因表达,以提高细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。通过设计合成编码shRNA的DNA模板序列,定向克隆到pSilencer2．1－u6neo质粒,成功构建1个P－gP蛋白基因特异的shRNA表达载体,稳定电转染HT9细胞,实时荧光定量PCR分析MDRlmRYAg表达,Westem blot检测细胞P—gp蛋白表达,流式细胞术检测P—gP蛋白外排泵功能,MTT法检测细胞对药物敏感性。结果显示,成功构建了shRNA表达载体pSilencer2-1-U6neo—MDRl,转染HT9细胞后,PCR检测重组质粒整合到HT9／sh－2－1－1细胞基因组DNA,获得稳定遗传;HT9／sh－2－1—1细胞MDRlmRNA表达降低了78．84％（P〈0．01）,P—gP蛋白表达降低了48．27％（P〈0．05）,细胞内Rh0123相对荧光强度由（10．8±0．58）％升高至（73．56±1．37m;转染细胞对三尖杉酯碱、阿霉素敏感性明显增强,IC50分别由（2．06±0．15）gmol／L降至（0．57±0．01）gmol／L、（4．04±017）gmol／L降至（1．56±0．05）μtmol／L。提示shRNA干扰表达载体pSilencer2．1－U6neo—MDRl能够稳定、持久地抑制MDRI基因表达,并能有效增强HT9细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。     

三尖杉属(科)植物的双黄酮成分及其化学分类的研究

本文采用薄层层析和提取、分离、光谱分析等方法分析研究了三尖杉属植物叶的双黄酮类化合物,根据获得的化学分析结果,我们同意：(1)将三尖杉属分为二个组：篦子三尖杉组Sect．1 Pectinaea,只包括蓖子三尖杉一种;三尖杉组Sect．2 Cephalotaxus,包括本属所有其它种。(2)支持三尖杉科只包括三尖杉属1属,不支持将红豆杉科中的穗花杉属(Amentotaxus)归入三尖杉科的主张。(3) 认为三尖杉科与南洋杉科、松科、杉科和柏科的亲缘关系较远,而与红豆杉科及罗汉松科的亲缘关系密切。     

三尖杉培养细胞中抗癌活性成分的研究

从三尖杉（ＣｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓｆｏｒｔｕｎｅｉＨｏｏｋ．ｆ．）茎和叶片作外植体在ＭＳ附加ＫＴ ０．１ ｍ ｇ／Ｌ、ＮＡＡ ３ ｍ ｇ／Ｌ培养基上诱导出的愈伤组织,建立了三尖杉悬浮培养细胞系,研究了光、ｐＨ 值、激素、碳源和添加物等因子对悬浮细胞生长的影响。结果表明： ｐＨ ５．８ 及低浓度的糖和ＮＡＡ适于细胞生长,糖含量超过４０ ｇ／Ｌ则不利于细胞生长,ＮＡＡ 大于３ ｍ ｇ／Ｌ抑制细胞生长。蔗糖或葡萄糖作碳源,二者无明显区别。添加水解蛋白或氨基酸不适合细胞生长。白光对细胞生长有明显的抑制作用。建立了灵敏、快速高效液相色谱测定方法,测得离体培养细胞含有三尖杉碱及抗癌酯类生物碱：三尖杉酯碱、异三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱。细胞悬浮培养中合成生物碱的能力明显高于固体培养,前者有效生物碱的含量和细胞增长速率均比后者高１ 倍以上。悬浮培养细胞中各生物碱组分比率为：２２％ 三尖杉碱,６％ 氧桥三尖杉碱,８％ 三尖杉酯碱,２３％ 高三尖杉酯碱,４１％ 异三尖杉酯碱。用气相色谱－质谱联用技术,除测得上述生物碱外,还检测到细胞培养物中含有去氧三尖杉酯碱、麦角甾醇、豆甾醇和谷甾醇等化合物     

氧化脂质及对大鼠心肌肌质网Ca~（2＋）－ATPase磷酸化微区运动状态的影响

用ＴＢＡ法测定了三尖杉酯碱的膜脂氧化效应;用纳秒荧光偏振技术研究了氧化膜脂对ＤＰＨ标记大鼠心肌肌质网膜脂、ＡＮＭ标记心肌肌质网Ｃａ２＋－ＡＴＰａ功能及磷酸化微区运动状态的影响。随膜脂中氧化磷脂的增加,肌质网膜脂双层的微粘度增加,磷脂分子摆动角减小：ＤＰＨ的荧光强度减弱,荧光寿命缩短。Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性降低。ＡＮＭ标记Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ磷酸化微区的ｒ（ｔ）曲线半衰期减至６８±４ｎｓｅｃ。结果提示,膜脂中氧化磷脂的含量影响膜脂双层的流动性及Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性和磷酸化微区的微细结构。     

三尖杉科的核形态学研究

4种三尖杉科植物的核形态结构的研究结果如下:它们的间期核均为复杂染色中心型,分裂前期 染色体属于中间型,体细胞分裂中期染色体的核型为:(1)三尖杉Cephalotaxus fortuni Hook．F.,K2n= 24=21m+1M+2sm(2SAT),核型不对称性属于2A型,着丝点端化值(T.C.％)为53．99;(2)高山三尖 杉C.alpina(Li)L.K.Fu,K2n=24=19m+3M+2sm(2SAT),核型不对称性属于2A型,T.C.％值为 53.93;(3)海南粗榧(西双版纳粗榧)C.mannii Hook.f., K2n=24=22m(1SAT)+2sm(2SAT),核型不 对称性属于2A型,T.C.％值为54.47;(4)篦子三尖杉C.oliveri Mast.,K2n＝24＝22m+2sm(2SAT), 核型不对称性属于2B型,T.C.％值为53.53。4种三尖杉的染色体结构都是1～22号染色体为m染色 体,23和24号染色体为sm染色体并具随体,其随体较大而稳定。它们的核形态结构较为相似,从核型 参数上看似乎三尖杉和高山三尖杉的亲缘关系最近,种间的中期染色体结构也有一些细微差异。除三尖杉C．fortunei仅有染色体数目的报道外,这4个种的核形态研究为首次报道。     

三尖杉科的花粉形态及其外壁超微结构研究

本文描述了在光学显微镜,扫描电子显微镜和透射电子显微镜下观察到三尖杉科花粉特征,并对三尖杉属种间的花粉特征进行了对比。据此,笔者支持在三尖杉属内建立篦子三尖杉组Ｓｅｃｔ．Ｐｅｃｔｉｎａｔａｅ Ｌ．Ｋ．Ｆｕ和三尖杉组Ｓｅｃｔ．Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ的意见。根据花粉形态特征,本文讨论了三尖杉科的范围和分类位置,同时对比了三尖杉科和红豆杉科花粉的异同。花粉形态特征说明两科之间有密切的亲缘关系,三尖杉科     

两种新的激活γ珠蛋白基因的中药：—盐酸山莨菪碱（654—2）和三尖…

检测了３７种中药对Ｋ５６２细胞生长及血红蛋白合成的影响,发 现盐酸山莨菪碱（６５４－２）和三尖杉酯碱可以使Ｋ５６２细胞的血红蛋白细胞增加３倍,细胞平均血红蛋白含量增加４倍,γ珠蛋白ｍＲＮＡ的表达分别增加５０％和４０％,电泳结果显示ＨｂＦ和γ珠蛋白肽链。     

三尖杉的资源利用与开发

本文概述三尖杉的资源现状、药用价值及资源利用,并对资源的开发前景作一些探讨。