定量比格犬血浆中去甲文拉法辛LC-MS/MS方法的建立及比格犬血浆中富马酸去甲文拉法辛药代动力学研究

目的:建立一种快速灵敏的液质联用方法定量比格犬血浆中去甲文拉法辛,并进行比格犬体内富马酸去甲文拉法辛药代动力学研究,同时与琥珀酸去甲文拉法辛比格犬体内药代参数进行对比。方法:样品处理采用叔丁基甲醚进行液液萃取,液相分离采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),以乙腈-乙酸铵缓冲液(1 mmol/L)(体积比80∶20)进行等度洗脱。采用单次给药和多次给药试验进行比格犬体内药代动力学研究。结果:此方法具有良好的线性、精密度、准确度,定量下限(0.5 ng/mL)高于文献报道。液液萃取的样品提取方法简便,液质联用分析时间相对较短(3 min)。结论:此方法可成功地应用于比格犬血浆中去甲文拉法辛定量分析。比格犬体内富马酸去甲文拉法辛的药代参数(单次给药和多次给药试验)与对照品琥珀酸去甲文拉法辛没有明显的统计学差异。     

地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶基因克隆与表达特性

目的建立高产量和高活力的地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶基因表达体系。方法采用PCR技术克隆获得目的基因,将其连入表达质粒pET-32 a构建原核表达重组质粒,经测序鉴定后,转化BL21大肠埃希菌,不同温度下IPTG诱导表达融合蛋白,测定酶活;进一步对该基因和编码蛋白进行同源性比较和酶学性质分析。结果碱性蛋白酶基因序列全长1 149 bp,编码382个氨基酸,同源性为99%,融合蛋白分子质量为62 kD,蛋白酶酶活为29 000 U/mL,并且在25℃时是以可溶蛋白形式表达,37℃时部分蛋白以包涵体形式存在。结论此种表达体系可以成功表达具有生物活性的碱性蛋白酶,诱导温度对蛋白酶存在形式具有较大影响。     

秸秆浸提液漂浮栽培对不结球白菜产量及相关品质特性的影响

以1/4园试营养液为对照,以腐熟发酵的农业秸秆(苋菜和番茄植株残体)浸提液模拟富含N、P的水体进行不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)的漂浮栽培,对茎叶的单株鲜质量和干质量及叶片的VC、可溶性蛋白质、蔗糖、果糖、葡萄糖含量及可溶性糖总含量进行了比较分析。结果表明:在24 d的栽培周期内,随生长时间的延长,处理组和对照组茎叶的单株鲜质量和干质量均呈增加趋势,但从第10天开始,处理组茎叶的单株鲜质量和干质量均显著低于对照组。栽培初期叶片VC含量均最高且处理组叶片VC含量显著低于对照组;从第10天开始,叶片VC含量降低,但处理组叶片VC含量与对照组无显著差异。处理组与对照组叶片可溶性蛋白质含量均呈波动的变化趋势,但总体差异不显著。处理组叶片蔗糖含量总体上与对照组差异不显著,仅在第24天显著低于对照组。处理组叶片的果糖含量均高于对照组,特别是在第24天为对照组的1.81倍,差异显著。叶片葡萄糖含量均呈先升高后降低的趋势,可溶性糖总含量则呈波动的变化趋势,对照组叶片葡萄糖含量和可溶性糖总含量总体上高于处理组,但差异不显著。研究结果显示:用秸秆浸提液漂浮栽培,虽然不结球白菜的生长量(即产量)有所减少,但相关的品质指标变化不大,对果糖合成和积累还有一定的促进作用,因而,此种秸秆浸提液可用于栽培商品不结球白菜。     

人乳头状瘤病毒DNA检测在宫颈病变筛查中的应用研究

目的：探讨高危型人乳头状瘤病毒（HR-HPV）DNA检测方法在宫颈病变筛查中的应用意义。方法：580例妇女同时进行薄层液基细胞学（TCT）、第2代杂交捕获法（HC Ⅱ）和阴道镜下宫颈组织活检,并以病理组织学检查结果作为确诊标准进行对比分析。结果：①580例受检者中病理诊断为炎症207例（35.69%）,CIN Ⅰ 224例（38.62%）,CIN Ⅱ 96例（16.55%）,CIN Ⅲ 38例（6.55%）,浸润癌15例（2.58%）;②TCT检测异常者中炎症52例（25.12%）,CIN Ⅰ 177例（79.02%）,CIN Ⅱ 85例（88.54%）,CIN Ⅲ36例（94.74%）,浸润癌15例（100%）,其中CIN Ⅱ和CIN Ⅲ组间差异无统计学意义（P〉0.05）,但显著高于炎症组和CIN Ⅰ组,低于湿润癌组（P〈0.01或0.05）;③HPV DNA检测阳性者中炎症66例（31.88%）,CIN Ⅰ 152例（67.86%）,CIN Ⅱ 83例（86.46%）,CINIII 35例（92.11%）,浸润癌组15例（100%）,除CIN Ⅱ和CIN Ⅲ组间差异无显著性外（P〉0.05）,其余各组间差异均有统计学意义（P〈0.05或0.01）,且HPV-DNA检测阳性组CIN和浸润癌发病率明显高于阴性组（P〈0.01）;④30岁以下高危险型HPV感染率（65.53%）显著高于30岁以上34.47%感染率（P〈0.01）;⑤联合应用TCT、HPV-DNA检测诊断宫颈癌及癌前病变的敏感度和特异度分别为96.14%和69.28%,高于TCT或HPV-DNA的单独检测。结论：宫颈高危险型HPV感染是CIN及宫颈癌的主要发病因素,并与病变严重程度密切相关,而HPV-DNA和TCT联合应用可提高宫颈癌及癌前病变的检出率。     

姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!非常感谢您上次的建议。我们用您说的方法重新尝试了2种不同的胞内表达蛋白,电泳后发现渗透冲击法能有效的把蛋白释放到上清中。虽然目前效率还没有达到100%(目测可能有50%-60%左右的目的蛋白释放到上清中),但相对之前始终没有蛋白的情况已经好了很多。现在我还有2个细节问题想请教一下:1.这种方法的效率能达到90%以上么?如果可以,我们实验的效率能否通过增加低渗液(水)的体积来进一步提高?     

bFGF/BMP/ 胶原膜加速颌骨骨折愈合的大体及X 线观察

目的:了解胶原膜作为生长因子缓释材料治疗颌骨骨折的应用前景。方法:将100μg的rhBMP-2用1ml的bFGF溶液完全溶解;用移液器移出40μl的该溶液,滴加到面积为0.5cm×1cm的胶原膜组织块中,冻干后制成生长因子缓释系统;在12只新西兰大白兔两侧制成人工下颌骨骨折模型,左侧置放bFGF/BMP/胶原膜;右侧均为空白对照;术后2、4、12周行临床大体观察及X线片观察。结果:实验组骨折愈合速度明显快于对照组。术后2周,X线结果显示bFGF/BMP/胶原膜组骨折断端边缘模糊。对照组骨折线明显。术后4周,X线结果显示bFGF/BMP/胶原膜骨折线基本不可见,骨折对位良好,断端边缘基本消失,骨折无错位。对照组骨折下缘可见纤维性骨痂形成,骨折线模糊。术后12周,各组X线结果无差异,骨折部位接近正常骨组织。结论:bFGF/BMP/胶原膜能加速骨折愈合,提高骨折愈合效果。     

简易血栓吸除器

简易血栓吸除器,由Genesis医疗国际集团所生产。它使用了一个漏斗形的导液管,以吸除透析病人的透析管中的血液凝块,减少因血液凝块流人到身体的其它地方而造成的病人死亡。     

产碱性纤维素酶嗜碱芽孢杆菌AH-8的研究

从贵州、云南、海南、安徽、四川、辽宁等地采集碱性土样,分离筛选到1株能稳定的产生碱性纤维素酶的嗜碱性芽孢杆菌AH-8。研究表明,该菌株最适产酶温度为37℃,最适发酵时间为36 h;采用均匀设计法对其发酵培养基进行优化,优化培养基配方(%):淀粉3.0,胰蛋白胨1.5,牛肉膏1.5,葡萄糖0.3,KH2PO40.1,初始pH 10.0。在优化培养基条件下,其产酶量提高了120%。碱性纤维素酶最适反应温度为60℃;最适反应pH 10.0;0.01%Co2 对酶活力有一定激活作用。     

菜心中SDS-PAGE向负极泳动的富含苯丙氨酸的蛋白的发现

在提取乙醇酸氧化酶同工酶的过程中, 发现了一种在SDS变性下向负极泳动的富含苯丙氨酸的碱性蛋白.在3次重复实验中, 均可以从SDS-PAGE后的负极缓冲液中获得这种蛋白, 其碱性与酸性氨基酸残基的比例分别高达1.46、1.28和0.89,而苯丙氨酸含量分别高达为60.00%、65.62%和62.30%.其余氨基酸残基的含量则和普通蛋白的相近似.由于该富含苯丙氨酸的碱性蛋白是水溶性的, 碱性氨基酸残基应主要分布在蛋白的表面,而苯丙氨酸则组成一个强疏水内核.     

Cu2+污染土壤接种AM真菌对紫云英生长的影响

通过5个土壤Cu²⁺水平(0,20,50,100,150mgkg-1)的盆栽试验,研究了不同土壤Cu²⁺水平接种AM真菌对紫云英生长的影响。结果表明:(1)随着土壤Cu²⁺水平升高,紫云英生物量下降,与未接种相比,接种AM真菌明显提高了紫云英的生物量,接种G.intraradices对紫云英生物量的提高比接种G.mosseae更为明显,两者间呈显著性差异。(2)随着土壤Cu²⁺水平升高,紫云英根段浸染率下降,菌丝琥珀酸脱氢酶、碱性磷酸酶活性也下降。(3)在相同土壤Cu²⁺水平接种不同的AM真菌,紫云英根段浸染率有显著差异,接种G.intraradices的紫云英根段浸染率显著高于接种G.mosseae的处理,其菌丝琥珀酸脱氢酶活性及碱性磷酸酶活性也显著高于接种G.mosseae的处理。(4)接种G.intraradices能显著抑制Cu²⁺从紫云英地下部分向地上部分的运转,降低Cu2+的毒害,接种G.mosseae相对促进了Cu²⁺的运转。以上结果显示,Cu²⁺污染土壤中接种G.intraradices对紫云英生长具有促进作用。