斯氏按蚊中Toll受体参与抵抗微生物感染和调控肠道菌群稳态

【目的】Toll信号通路是昆虫天然免疫系统的重要组分,其中Toll受体在激活昆虫病原菌侵染免疫应答方面发挥了关键作用。本研究旨在探究斯氏按蚊Anopheles stephensi Toll受体基因在抵抗微生物侵染和维持肠道菌群稳态过程中的功能。【方法】根据冈比亚按蚊Anopheles gambiae Toll受体家族的蛋白氨基酸序列,通过序列同源比对鉴定斯氏按蚊中相应的Toll受体基因;运用荧光定量PCR检测Toll受体基因在未感染病原菌的斯氏按蚊脂肪体中的相对表达量,以及在真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana和革兰氏阴性细菌胡萝卜软腐欧文氏菌Erwinia carotovora subsp. carotovora侵染斯氏按蚊过程中的表达变化;最后,在斯氏按蚊雌成蚊胸部显微注射AsToll1A和AsToll5A的双链RNA进行RNA干扰后,检测RNAi处理的斯氏按蚊受真菌侵染后的存活率、肠道细菌含量变化以及抗菌肽基因表达变化。【结果】在斯氏按蚊中共鉴定到8个Toll受体基因,即AsToll1A, AsToll5A, AsToll6, AsToll7, AsToll8, AsToll9, AsToll10和AsToll11。通过荧光定量PCR检测发现,未感染病原菌的斯氏按蚊雌成蚊脂肪体中AsToll5A表达量最高,AsToll1A表达量次之,其余Toll受体基因表达量极低。在球孢白僵菌和胡萝卜软腐欧文氏菌侵染过程中,与对照(注射PBS)比较,AsToll1A和AsToll5A在斯氏按蚊中的表达量显著升高,其余Toll受体基因表达变化不显著或降低。RNA干扰结果表明,AsToll1A或AsToll5A的表达受到抑制后,斯氏按蚊对球孢白僵菌的抵抗能力显著降低,肠道细菌总量与对照(dsGFP)比较显著增多。而且,抑制AsToll1A后抗菌肽基因DEF1和GAM1的表达受到显著抑制;抑制AsToll5A后仅有GAM1表达量下调。【结论】斯氏按蚊Toll受体在结构和功能上具有高度的保守性,其中AsToll1A和AsToll5A能响应病原真菌和革兰氏阴性细菌侵染并且影响肠道菌稳态。     

《中国微生态学杂志》稿约

说明本文的目的、方法、结果和结论,一般限200～400字。     

大劣按蚊不同时期游离氨基酸的变化

大劣按蚊幼虫期有28种氨基酸,β-丙氨酸含量最高;蛹期有27种氨基酸,雄蛹氨基酸总量比雌蛹高,其中羟脯氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、酪氮酸、β-丙氨酸,精氨酸含量较高;雄蚊有28种、雌蚊有27种氨基酸,雄蚊氨基酸总量比雌蚊高,其中羟脯氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、精氨酸含量较高。结果表明:同一种昆虫,不同时期、雌、雄的氨基酸含量和比例有差异。     

基于rDNA-ITS2序列的中国按蚊属塞蚊亚属部分种类的系统发育研究(双翅目:蚊科)

应用rDNA-ITS2序列,采用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)和最大似然法(ML),以按蚊亚属Anopheles的中华按蚊An.(An.)sinensis和赫坎按蚊An.(An.)hyrcanus为外群,对采自中国的按蚊属Anopheles塞蚊亚属Cellia 21种蚊进行了系统发育分析.结果表明:rDNA-ITS...     

大鼠心脏预处理后产生的内源性保护物质的研究

以外源性腺苷前质硫酸腺嘌呤大鼠心脏预处理和经典缺血预处理建立模型,监测心脏内源性保护物质的变化。方法：采用２５０～３００ｇＳＤ大鼠３２只分成４组,即假手术组（ＳＯ组）、缺血再灌组（Ｉ／Ｒ组）、经典缺血预处理组（ＩＰＣ组）及硫酸腺嘌呤预处理组（ＡＳＰＣ组）。比较各组心肌内源性保护物质的变化。结果：ＩＰＣ组、ＡＳＰＣ组均显示缩小心梗面积、改善心功能的ＩＰＣ效应,同时,肌酸激酶（ＣＫ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、５”核苷酸酶（５’ＮＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性增强以及一氧化氮（ＮＯ）含量增高,热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）ｍＲＮＡ表达增强。结论：ＣＫ、ＣＡＴ、５’ＮＴ、ＳＯＤ、ＮＯ及ＨＳＰ７０是大鼠腺苷性和缺血性心脏预处理后产生的重要的内源性保护物质。     

CSPGs在大鼠脊髓损伤后的表达及其与GFAP的关系

目的:观察脊髓损伤后CSPGs的表达及其与GFAP的关系。方法:成年雄性SD大鼠25只,随机分为对照组和损伤组,损伤组分脊髓挤压损伤后0h、72h、1w、4w组,运用免疫荧光双重染色方法观察CSPGs与GFAP的表达。结果:挤压伤后损伤部位的CSPGs和GFAP的表达均增高,但二者的变化趋势并不一样。其中CSPGs从损伤后表达开始增高,此后一直增加,并在1w至4w时逐渐稳定,主要分布逐渐集中于损伤部位;星形胶质细胞的免疫反应也逐渐增加,其分布逐渐集中于损伤区域的边缘,逐渐形成胶质瘢痕界膜。损伤1w至4w,损伤区域内几乎没有了星形胶质细胞表达,但仍留有大量的CSPGs。结论:早期抑制星形胶质细胞分泌CSPGs,可以防止在损伤部位沉积大量的CSPGs,从而减小其对再生纤维的抑制作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯衍生物及过硫酸氢钾复合物粉体外抑制Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒的研究

【目的】为了将表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)的2种衍生物和过硫酸氢钾复合物粉(compound potassium peroxymonosulfate powder, KMPS)运用于体外细胞实验中,以评估这3种药物对I型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)的抑制和杀灭效果。【方法】利用MUSE法和CCK-8法评估表没食子儿茶素没食子酸酯棕榈酸酯(epigallocatechin gallate palmitate,EGCG-P)、乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯(peracetylated epigallocatechin gallate, Ac EGCG)和过硫酸氢钾复合物粉3种药物对细胞的安全浓度,利用体外细胞感染病毒模型,使用不同浓度测试物处理病毒或细胞后感染病毒,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, q RT-PCR)法分析不同测试物对病毒的抑制和杀灭效果。使用不同浓度测试物处理细胞后,利用q RT...     

硫酸卡那霉素对成年大鼠的耳毒性效应

本研究旨在观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)对成年大鼠的耳毒性效应。6～7周龄的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为2组:实验组,每天腹腔注射KM(500mg/kg)2周;对照组,注射等量生理盐水2周。通过检测脑干听觉诱发电位(auditory brainstem response,ABR)观察大鼠听力改变。ABR检测结束后,分离出耳蜗进行基底膜铺片、耳蜗冰冻切片,观察耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)的密度和耳蜗形态学改变。结果显示,注射KM2周后,大鼠在各频率的听觉阈值均有明显升高,其上升幅度超过60dB;随着时间推移,KM组SGCs密度逐渐降低,Corti器结构尚存,但外毛细胞及内毛细胞均有不同程度的缺失,以外毛细胞为甚;内毛细胞缺失与SGCs的密度下降相平行。以上结果表明,6～7周龄大鼠经过KM作用2周后,听力会明显下降,达到重度耳聋甚至全聋。KM的耳毒性作用与SGCs和内外毛细胞的损伤密切相关。     

低色素出芽短梗霉菌株的诱变筛选

通过紫外线和硫酸二乙酯(DES)诱变,获得一株黑色素分泌少的短梗霉变异菌株G-58。G-58菌落和发酵液颜色白色。经5次传代发酵表明该菌株稳定。     

斯氏按蚊生长发育中唾液腺配子体激活因子的变化

为探讨斯氏按蚊生长发育过程中唾液腺抽提物配子体激活因子的消长,应用体外雄配子体出丝观察方法比较羽化后未吸血及吸血组雌性斯氏按蚊唾液腺抽提物中配子体激活因子对柏氏疟原虫雄配子体出丝诱导活性的动态变化。羽化后未吸血组按蚊唾液腺配子体激活因子活性与按蚊生长、发育呈同步变化。羽化后当日至羽化后第6 d,吸血组按蚊唾液腺抽提物的GAF活性变化与未吸血组相似,吸血后该组GAF活性下降,羽化后14 d恢复到吸血前水平。吸血后斯氏按蚊唾液腺配子体激活因子活性的降低与蚊卵发育可能相关。