黄鳝骨硫酸软骨素提取纯化的初步研究

在稀碱-酶解提取基础上,辅以超声波破碎从黄鳝（Monopterus albus）骨中提取硫酸软骨素（Chondroitin Sulfate,CHS）。比较了三氯乙酸（TCA）法、Sevag法和等电点法除蛋白的效果,并进行了多糖的乙醇分级沉淀实验;粗品经离子交换树脂（CM22）和透析膜（3500Da）透析进一步分离纯化。研究结果表明酶解后用TCA法除蛋白效果好,再加入除蛋白液2倍体积95％乙醇可使大部分CHS沉淀析出;精制品经鉴定含有硫酸基,CHS含量达92．31％;琼脂糖凝胶电泳和红外吸收光谱结果显示精制品与标准CHS相似,初步确定提取物为CHS类多糖。     

应用PCR—SSCP鉴别我国多斑按蚊复合体成员种（双翅目：蚊科）

测定并分析了我国多斑按蚊复合体5个成员种(多斑按蚊、威氏按蚊、伪威氏按蚊、达罗毗按蚊和塞沃按蚊)核糖体DNA 28S-D3序列,应用PCR-SSCP技术对该复合体成员种进行分子鉴别。结果显示：我国多斑按蚊复合体5个成员种的D3序列长度范围为388-394bp,GC含量为58．12％—59．79％,D3序列在种内保守,在种间存在差异,种间差异最大的是达罗毗按蚊与伪威氏按蚊为6．55％,最小的是达罗毗按蚊与多斑按蚊为2．58％,平均差异率为4．59％。用SSCP分析多斑按蚊复合体5个成员种的28S-D3扩增产物,结果显示电泳条带具种特异性,可用于鉴别各蚊种。     

硫酸软骨素对慢性酒精中毒大鼠脑损伤的保护作用

目的:探讨硫酸软骨素对慢性酒精中毒脑损伤的作用及可能机制.方法:雄性 Wistar 大鼠60只随机分为6组,酒精模型组以剂量为8ml·kg-1·d-150%的酒精每天灌胃一次,纳洛酮药物组给予乙醇半小时后腹腔注射纳洛酮0.08mg·k-1·d-1,硫酸软骨素低、中、高剂量干预组在酒精模型组的基础上分别给予硫酸软骨素50、100、150mg·kg-1·d-1,空白对照组给予等体积的蒸馏水,持续2周;第三周把50%的酒精的剂量递增为12mg·kg-1·d-1,持续灌胃6周.在第八周末实验结束后取血,分离血清,留取脑组织.HE染色观察各组大鼠神经细胞的变化.生化测定各组大鼠血清及脑组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及脂质过氧物终未产物丙二醛(MDA);并测定脑皮质中β-内啡肽含量(β-EP).结果:模型组大鼠大脑皮质和海马区神经元数量明显减少,神经细胞排列紊乱.硫酸软骨素中剂量组大鼠大脑皮质和海马区神经细胞排列层次较清晰.与酒精组相比较,硫酸软骨素中剂量组大鼠血清和脑组织匀浆中MDA含量明显降低(P<0.01),脑皮质中β-内啡肽含量明显降低(P<0.01);GSH-PX含量及SOD活性显著升高(P<0.01).结论:硫酸软骨素对大鼠慢性酒精中毒脑损伤具有保护作用.     

印度疟疾媒介库态按蚊卵黄蛋白原基因的克隆与生物信息学分析（英文）

卵黄蛋白原（vitellogenin, Vg)是主要的卵黄蛋白前体, 在雌虫血餐之后在脂肪体内大量合成。卵黄蛋白原的调节元件已经被用于驱动蚊子（与寄生虫发生最大相互作用的场所）中抗寄生基因的组织特异性表达。不过, 迄今为止, 对在印度引起60%~70%疟疾发生的库态按蚊Anopheles culicifacies中的内源启动子尚未进行过分析。本研究通过PCR扩增了包括5′端上游调节区在内的库态按蚊A. culicifacies卵黄蛋白原基因, 并命名为AncuVg (GenBank登录号为JN113091)。它含有一个大约6.2 kb的开放阅读框, 编码2 052个氨基酸, 具有一个16个氨基酸残基的推断的信号肽。也含有一个N_Vitellogenin区和一个VWF型D区, 这两个区在其他昆虫卵黄蛋白原中也保守。估计多肽分子量为238.0 kDa, 含有4个共有的(RXXR/S)切割位点, C端附近有一个GL/ICG基序, 其后是9个半胱氨酸残基和1个位于GL/ICCG基序上游第18个氨基酸残基处的DGXR 基序。在推断的氨基酸序列上发现3个聚丝氨酸区, 其中2个位于氨基端, 1个位于羧基端。根据同义密码子相对使用概率值, 通过有效密码子数, 测定了蚊子卵黄蛋白原基因密码子的偏倚性程度。也预测了库态按蚊A. culicifacies Vg的三维结构。分析了AncuVg基因, 以理解Vg基因的转录调节。对Vg基因5′端上游区进行的系统发育分析表明, 它们聚类于蚊子的3大分枝。也用各种生物信息学工具分析分析了Vg的同源性和特征。     

新一代糖化酶高产菌株的选育及其工业应用

【目的】建立对糖化酶生产菌种黑曲霉随机突变文库进行筛选的方法,以获得糖化酶酶活提高的突变菌株。【方法】以一株可产糖化酶的黑曲霉菌株Aspergillus niger X1为出发菌株,经硫酸二乙酯诱变获得突变文库,采用葡萄糖的结构类似物——2-脱氧葡萄糖进行筛选,并在筛选过程中逐渐提高2-脱氧葡萄糖浓度,定向选育具有2-脱氧葡萄糖抗性、高产糖化酶的突变株。【结果】获得的高产突变菌株DG36摇瓶发酵糖化酶产量比出发菌株A.niger X1提高22.2%–33.8%,经工业水平50 m~3罐发酵测试,突变株DG36发酵128 h糖化酶活可达49094 U/m L,在相同发酵时间内,其酶活较出发菌株A.niger X1提高32.8%,发酵时间缩短16.9%。【结论】本研究开发了一种以2-脱氧葡萄糖为抗性标记选育高产糖化酶突变株的方法,所得突变株DG36遗传性状稳定,与出发菌相比具有菌丝粗壮、产酶期提前、糖化酶活高、发酵时间短、有利于发酵后处理的优点。     

Drosophila heparan sulfate 3-0 sulfotransferase B Null Mutant Is Viable and Exhibits No Defects in Notch Signaling

Heparan sulfate proteoglycans （HSPGs） are critically involved in a variety of biological events. The functions of HSPGs are determined by the nature of the core proteins and modifications of heparan sulfate （HS） glycosaminoglycan （GAG） chains. The distinct O-sulfo- transferases are important for nonrandom modifications at specific positions. Two HS 3-0 sulfotransferase （Hs3st） genes, Hs3st-A and Hs3st-B, were identified in Drosophila. Previous experiments using RNA interference （RNAi） suggested that Hs3st-B was required for Notch signaling. Here, we generated a null mutant of Hs3st-B via ends-out gene targeting and examined its role（s） in development. We found that homozygous Hs3st-B mutants have no neurogenic defects or alterations in the expression of Notch signaling target gene. Thus, our results strongly argue against an essential role for Hs3st-B in Notch signaling. Moreover, we have generated two independent Hs3st-A RNAi lines which worked to deplete Hs3st-A. Importantly, Hs3st-A RNAi combined with Hs3st-B mutant flies did not alter the expression of Notch signaling components, arguing that both Hs3st-A and Hs3st-B were not essential for Notch signaling. The establishment of Hs3st-B mutant and effective Hs3st-A RNAi lines provides essential tools for further studies of the physiological roles of Hs3st-A and Hs3st-B in development and homeostasis.     

高效液相色谱法测定硫酸特布他林片剂含量

目的:本文对高效液相色谱法测定硫酸特布他林片剂含量进行测定。方法:选取LabAlliance C8保护柱、AgilentEclipse XDB-C8柱,流动相为甲醇-水[10B90(包含28 mmol*L-1的磷酸二氢钾,再利用0.2%的磷酸进行调和,令pH值为4.6)],检测出的波长为280nm,进量样为20μL,柱温为室温即可[1]。结果:方法的线性范围是0.5-200μg·mL-1(其r值为019982),最低检测限是2.0 ng。回收率的范围为98.6%-102.7%,RSD的范围在0.38%-2.4%(n=5)。结论:方法非常方便,结果比较精确,可以用再硫酸特布他林片剂的质量控制中。     

韩国赫坎按蚊复合体3成员种核糖体DNA内转录间隔2区的比较(英文)

本文对韩国中华按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊核糖体DNA (rDNA)内转录间隔 2区 (ITS2 )序列进行了比较研究。用PCR扩增的rDNA ITS2片段直接测序 ,每种蚊测定 3个个体 ,结果显示 :韩国中华按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊的rDNA ITS2序列长度分别为 4 6 8bp、 4 51bp和 4 53bp ,GC含量分别为 4 4 .87%、 4 6 .2 %和 4 5.7% ,3种按蚊序列差异范围为 12 .16 %— 30 .74 %。研究表明 ,rDNA ITS2序列差异可用于韩国中华按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊的分子鉴别。     

基于炎症免疫调节探讨艾拉莫德联合硫酸羟氯喹治疗类风湿关节炎的疗效及作用机制

摘要 目的：基于炎症免疫调节探讨艾拉莫德联合硫酸羟氯喹治疗类风湿关节炎（RA）的疗效及作用机制。方法：选择2021年4月~2023年3月期间武汉科技大学附属天佑医院和武汉市第四医院收治的120例RA患者。根据随机数字表法将患者分为对照组和研究组,每组各为60例。对照组接受硫酸羟氯喹治疗,研究组接受艾拉莫德联合硫酸羟氯喹治疗。对比两组疗效、临床症状缓解时间、炎症因子[肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、干扰素α（IFN-α）、干扰素-γ（IFN-γ）]、视觉疼痛模拟评分（VAS）和简易健康生活质量评分（SF-36）、免疫因子[T淋巴细胞亚群（CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺）、免疫球蛋白（Ig）G、IgM、IgA]。同时观察两组用药安全性。结果：与对照组相比,研究组的临床总有效率更高（P<0.05）。研究组的关节疼痛、关节肿胀、关节晨僵缓解时间均短于对照组（P<0.05）。治疗6个月后,两组TNF-α、IL-6、IFN-γ、IFN-α下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。治疗6个月后,两组CD8⁺升高,且研究组高于对照组;CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺降低,且研究组低于对照组（P<0.05）。治疗6个月后,两组IgG、IgM、IgA下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。治疗6个月后,两组VAS评分下降,且研究组低于对照组;SF-36评分升高,且研究组高于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比未见差异（P>0.05）。结论：艾拉莫德联合硫酸羟氯喹治疗RA,疗效确切,能缩短临床症状缓解时间,缓解关节疼痛和提高患者生活质量,且用药安全、副作用少,其作用机制可能与调节炎症反应、免疫反应有关。     

广东大宝山矿区生态环境退化现状及治理途径探讨

根据对广东大宝山矿区的实地调查、测试和所采集土、水样品的化学分析结果,对该区生态环境退化和向下游排放污染物现状进行报道.矿坑似乎是大宝山矿最重要的污染源地,据有限土壤样品分析结果推算,当其所含无机还原态硫彻底氧化后,平均1t矿坑表土可产出207kg浓硫酸.大部分矿坑表土和排土场废土已经历不同程度的酸化.实验室模拟试验显示:5g强烈酸化的矿坑表土在接力水提条件下可产出超过750mL的酸性“矿水”(pH<3.9).实测数据表明:排入翁江支流的矿水,其酸度大大超过国家规定的排放标准,大多数重金属元素的浓度也超过了国家规定的污水综合排放标准的最高允许值.从技术的角度来看,对大宝山矿区生态环境退化和向下游排放污染物状况的治理,宜采用环境地球化学工程与生物修复技术相结合的综合治理方法.