新鲜分离小鼠胃Cajal间质细胞样细胞的鉴定及其电生理学特性

将免疫荧光及传统全细胞膜片钳技术应用于新鲜分离的小鼠胃Cajal间质细胞样细胞上,探讨了小鼠胃Cajal间质细胞样细胞形态和电生理学特性。经胶原酶消化得到的Cajal间质细胞样细胞胞体呈短梭形,且自胞体发出多个较短的毛刺状突起。免疫细胞化学结果表明,Cajal间质细胞样细胞胞体和突起酪氨酸激酶受体c-kit表达呈阳性。在传统全细胞记录模式、膜电位钳制在-60mV的条件下,可以记录到自发、节律性内向电流,即起搏电流。钙调蛋白抑制剂W-7 （50μmol／L）明显增强了起搏电流幅度并引发明显的内向钳制电流。当电极内液中EGTA的浓度由0．1mmol／L增加到10mmol/L时,也明显增强了起搏电流幅度并引发明显的内向钳制电流。实验结果提示,新鲜分离的小鼠胃Cajal间质细胞样细胞可以产生自发、自律性内向电流,而这种电流对胞内低钙或钙调蛋白抑制剂敏感。这种具有自发性电活动的Cajal间质细胞样细胞可能就是胃Cajal间质细胞。     

荷叶黄酮化合物对胰脂肪酶抑制作用的研究

荷叶粗粉用60%乙醇回流提取,经石油醚脱脂,再用聚酰胺柱色谱分离得到不同部位的黄酮提取物.通过比较50%乙醇洗脱部位的黄酮提取物和市售减肥药奥利司他(Orlistat)对胰脂肪酶的抑制作用,得到它们的半抑制率IC50分别为0.0076,0.0048 mg/mL.通过Lineweaver-Burk图和Dixon图的特征,表明该抑制剂对胰脂肪酶的抑制呈非竞争性抑制,抑制常数Ki=0.0147 mg/mL,米氏常数Km=42.2 ms/mL.     

AHA1转基因拟南芥的抗铝性生理解析

AHA1基因是植物体内编码质膜H⁺ATPase的一个重要基因,参与植物的生长发育与抗逆胁迫反应.本文以AHA1转基因型及其野生型拟南芥为材料,研究了铝胁迫对拟南芥养分吸收、抗氧化胁迫和有机酸分泌的影响.结果表明：Al降低了拟南芥根系对N、K、Ca和Mg的吸收,但增加了根系对P的吸收,且AHA1转基因型拟南芥比野生型积累更多的P和较少的Al.铝胁迫诱导拟南芥抗氧化酶SOD和POD活性增加,转基因型与野生型之间没有明显差异.Al对拟南芥有机酸分泌具有明显的诱导作用,且AHA1转基因型分泌较多的有机酸.质膜H⁺ATPase的活性抑制剂钒酸盐对拟南芥有机酸分泌具有明显的抑制作用;而Zn²⁺、Mg²⁺可促进Al对拟南芥有机酸分泌的诱导,并部分恢复钒酸盐的抑制效应.说明AHA1基因通过增加拟南芥根系对P的吸收以及有机酸分泌,提高了植物的抗铝性.     

植物源病毒抑制剂的研究进展

天然植物提取的活性物质对植物病毒有明显的抑制作用,已经成为当今植物病毒防治的重点。对植物源病毒抑制的活性物质及作用机理的研究现状进行了综述,并将外来入侵生物用以提取病毒抑制剂的相关生物技术提出了展望。     

O2、ACC和CO2对番木瓜ACC氧化酶活性的影响

研究了番木瓜果皮l-氨基环丙烷-l-羧酸(ACC)氧化酶的部分纯化,底物(O2和ACC)浓度、辅助因子(CO2和Fe2+)和抑制剂(Co2+和α-氨基异丁酸)对体外乙烯产生速率的影响.通过DEAE-Sepharose和Phenyl-Sepharose柱层析后,番木瓜果皮ACC氧化酶被纯化了19.5倍.在乙烯产生中,ACC氧化酶对O2的Km值主要取决于ACC的浓度,随着ACC水平的增加而下降;当O2的浓度增加时,酶对ACC的Km值降低.CO2显著地增加酶的活性以及对O2和ACC的Km值.Fe2+提高酶的活性,Co2+抑制酶的活性;Fe2+能够拮抗Co2+对酶活性的抑制作用.这些动力学资料表明ACC氧化酶遵循一种顺序结合机制,首先与02结合,然后与ACC结合.     

多胺对宁夏枸杞愈伤组织器官发生和体细胞胚发生的影响

利用已建立的宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)愈伤组织器官发生和体细胞胚发生体系,对多胺在其离体形态发生中的作用进行研究.通过检测内源多胺含量发现,在所研究的三种多胺中,Put是器官发生途径的主要多胺,而在体细胞胚发生途径Spd含量占优势.Put含量变化在两条途径中相似在愈伤组织分化的早期迅速积累不久又下降,随着芽原基和球形胚的形成含量又进一步上升.器官发生中Spd最高含量仅在培养的第一天出现;而从诱导愈伤组织发生体细胞胚的第一天后,Spd含量才开始上升,到第十天时达到最高值.三种外源多胺的添加均能有效地促进两条离体分化途径的形态建成Spd(100μmol/L)能显著增加不定芽数,而体细胞胚发生中Spd(10μmol/L)或Put(100μmol/L)的单独处理能最好地促进体细胞胚形成和进一步发育成苗;尽管Spm在离体形态发生中含量较低,但添加外源Spm也促进了不定芽形成和体细胞胚形成然后成苗.多胺生物合成抑制剂CHA处理阻碍不定芽形成和体细胞胚的进一步发育;但是MGBG对器官发生途径中的形态建成没有影响,却降低体细胞胚的发生频率及再生苗数.添加Spd(50μmol/L)能部分逆转CHA、MGBG的抑制效应.以上结果表明,多胺对宁夏枸杞器官发生和体细胞胚发生途径的离体形态建成有一定影响.     

绢丝昆虫蛋白酶抑制剂研究进展

主要论述了绢丝昆虫体液蛋白酶抑制剂和茧丝蛋白酶抑制剂的分子生物学,遗传规律以及生理意义等,并展望绢丝昆虫蛋白酶抑剂的潜在应用前景。     

重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用

将基因工程菌株E.coliBL21(DE3) pET22b-mETIa高密度发酵,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli中得到较高水平表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白.测得rETIa对t-PA突变体(NTA)的抑制平衡常数K_i为8.72×10^－8 mol/L.据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose 4B亲和层析柱.直接一步纯化NTA复性液,纯化的NTA纯度达90 %以上,收率为96.2 %,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3) U/μg.     

他克林和双他克林抗星形孢菌素致凋亡作用的比较

用星形孢菌素（STS）诱导NG108-15细胞和HeLa细胞凋亡,观察他克林和双他克林是否具有抗凋亡作用.相差显微镜和Hoechst 33342染色观察细胞及胞核形态;噻唑蓝(MTT)测定分析细胞损伤状况;DNA提取及琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯带;蛋白质印迹分析Bcl-2和Bax的表达水平.结果表明,经0.1 mmol/L他克林预处理后,由STS诱导的NG108-15细胞凋亡受到明显抑制.双他克林预处理无保护作用.蛋白质印迹分析表明他克林可显著抑制Bax的表达,同时还可促进Bcl-2的表达.他克林和双他克林预处理对STS诱导的HeLa细胞损伤无明显的保护作用.结论为：a.他克林对STS诱导的神经细胞损伤有显著的保护作用,但这种保护作用与其AChE抑制作用似乎没有明显关联.b.他克林对STS损伤的保护作用有细胞选择性.     

前列腺素抑制剂消炎痛抑制糖尿病痛过敏大鼠隐神经中Aδ和C单位的传入活动

实验观察了前列腺素（prostaglandins,PGs)合成限速酶－非选择性环氧合酶（cyclo-oxygenase,COX)抑制剂消炎痛和外源性前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2)对糖尿病痛过敏大鼠隐神经中Aδ单位和C单位传入活动的影响,结果发现,糖尿病痛过敏大鼠Aδ单位和C单位的传导速度和它们的机械阈值显著降低,少数Aδ单位（4／24）和C单位（2／18）具有自发活动,腹腔注射消炎痛后能明显缓解糖尿病痛过敏大鼠的机械性痛过敏,并抑制自发放电,在消炎痛阻断内源性PGs合成后,外源性PGE2能使糖尿病痛过敏组和对照组大鼠Aδ单位和C单位的机械阈值显著降低,并诱发糖尿病痛过敏组大鼠3个Aδ单位（3／24）和1个C单位（1／18）,以及对照组大鼠2胪Aδ单位（2／13）产生传入活动,结果提示,在患糖尿病性神经病时,PG的合成和释放增多,这些PGs敏化或和激活Aδ单位和C单位,诱发糖尿病大鼠产生痛过敏和触诱发痛。