应用RNA原位核酸杂交检测乳腺癌石蜡切片中ER mRNA、PR mRNA表达

目的：制备地高辛标记的寡核苷酸探针,检测乳腺癌石蜡切片中雌激素受体（ER）mRNA、孕激素受体（PR）mRNA表达。方法：应用RNA原位核酸杂交（RISH）和免疫组化（IHC）检测技术,结果：（1）278例乳腺癌石蜡切片ERmRNA,PRmRNA阳性率分别为67．3％和61．5％,阴性率分别为32．7％和38．5％,ERmRNA,PRmRNA双阳性,双阴性分别为54．3％和25．6％,ERmRNA阳性PRmRNA阴性或ERmRNA阴性PRmRNA阳性率为20．1％。（2）RISH法的mRNA、PRmRNA阳性率分别为67．3％和61．5％均高于IHC法ER、PR的48．9％和41．2％（P均＜0．01）。（3）ERmRNA与ER、PRmRNA与PR的阳性和阴性符合率分别为7％和75．95。（4）杂产信号在乳腺癌细胞中的分布可分为,柱状上皮的胞质的上下方,胞质内均匀或近胞膜,核周偏位和核内外分布。（5）ERmRNA与ER、PRmRNA阳性率与组织学级别有关,Ⅱ级组中RV的阳性率为83．5％分别高于Ⅰ组中62．4％和Ⅲ组中54．5％（P＜0．01）,Ⅰ、Ⅱ级组中PRV的阳性率为66．7％,67．3％,均高于Ⅲ组中50．6％（P＜0．05）。结论。结论：地高辛标记的ER、PR寡核苷酸探针和RISH是一种较为理想的检测乳腺癌组织中ERmRNA和PRmRNA的分子检测技术。     

一种基于PCR分析多样性的小鼠肠道微生物宏基因组提取方法

目的建立一种基于PCR分析分子多样性的小鼠肠道菌群宏基因组提取方法。方法比较、综合国内外小鼠肠道菌群宏基因组的提取方法后建立一种新方法,小鼠肠道内容物经丙酮洗涤,差速离心,溶菌酶、SDS裂解,CTAB处理,酚／氯仿抽提后可得到高质量的DNA,通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、细菌通用引物PCR和扩增核糖体限制性酶切片段分析（ARDRA）等检测该方法的实用性。结果该方法获得的小鼠肠道菌群宏基因组DNA大小在23kb左右,A260／A280在1．8—2．0,经细菌通用引物PCR后能得到适用于ARDRA的目的产物。结论该方法经济适用性较强,具备一定的应用价值。     

激光显微切割/质谱联用技术在肾脏疾病诊断中的应用进展

激光显微切割(Laser microdissection,LMD)质谱(Mass spectrometry,MS)联用技术(LMD/MS)已成功应用于肾活检组织甲醛固定石蜡包埋切片的蛋白质组学研究,提高了某些肾脏病的诊断水平,显示出较好的临床应用前景。文中就LMD/MS蛋白质组学技术的原理、方法及该技术在肾淀粉样变性、膜增殖性肾小球肾炎等肾脏疾病的发病机制及诊断分型的应用进展进行综述。     

从石蜡包埋组织中获取高质量基因组DNA的方法改进

从石蜡包埋组织中制备基因组DNA(gDNA)难度大、获取样本量很少.传统方法为二甲苯脱蜡法.为了简化操作,获得更高质量的gDNA,我们采用水浴法替代二甲苯进行脱蜡,亲和层析纯化石蜡包埋肝细胞癌(HCC)组织标本中基因组DNA,以纯化gDNA为模板PCR扩增看家基因.结果显示改良水浴法提取的gDNA质量、数量均显著高于传统二甲苯脱蜡法,PCR产物量也得到显著提高.与传统方法相比,改良水浴法简单、快捷,可以更有效的回收石蜡包埋组织中的gDNA.     

小鼠海马神经元冰冻切片和脑片培养方法的比较

目的:通过冰冻切片和脑片培养方式比较获得更适合脑片实验研究的方法。方法:分别运用急性切片和脑片培养方法,结合全细胞膜片钳技术比较两种脑片处理方法对小鼠海马神经元细胞形态、细胞膜封接难易程度、细胞电生理特性等的差异,获得更适合细胞研究的脑片获取方法。结果:冰冻切片方法切断部分神经纤维,脑片表层出现肿胀或坏死细胞,2-3层细胞可用于膜片钳记录,但不易封接破膜。脑片培养后可使纤维再生,整个脑片细胞形态清晰可见,容易封接破膜,电生理记录波形及基本特性与冰冻切片一致,但脑片培养方法的细胞突触后电流幅度更大、频率更高。结论:脑片培养可修复受损纤维和细胞膜柔韧性,且不改变膜特性,但脑片培养重建了一定数量的细胞间信号连接,使细胞反应性增强,脑片培养方法更适合脑片神经元研究。     

封三“部分植物组织切片显微照片”说明

图1 藓精子器纵切 取材葫芦藓雄枝顶端．做纵切，经特殊多色染色而成，100x。可见雄苞叶、精子器和隔丝。精子器中精子数量众多。     

爱氏苏木精整体染色法在树脂薄切片中的应用

在组织和细胞学研究中,整体染色法是一项很有用的技术。树脂薄切片技术是近20年来发展起来的一门新技术,它通常是先切后染,这样前后几次染色很难均一。对于需要长时间染色的材料就更显麻烦。另外,常用于薄切片中的染色剂甲苯胺蓝—O、亚甲基蓝和大青Ⅱ在用树胶封片制成永久切片后,颜色会逐渐退去,不能长期保存。为了解决这些问题,我们在掌叶大黄的胚胎学研究中,以掌叶大黄(Rheum palmatum)为材料,     

肺组织制片充盈固定法的应用及制片中应注意的技术问题

肺是中空性的实质性器官 ,结构复杂 ,包含有肺的导气部与呼吸部 ;肺、动静脉 ;支气管动、静脉等管道系统。这些系统相互交织 ,关系密切 ,组织结构也随管道的分支而发生规律的变化。组织切片是客观表达上述结构的重要载体。由于肺组织密度小 ,弹性大 ,在取材时发生严重回缩 ,使正常结构发生明显改变 ,故制片时对技术提出特殊的要求。我们在实践中总结出充盈固定法等技术方法 ,取得理想效果 ,介绍如下 :1　取材　用于教学的肺组织 ,可以选择其他动物如兔、狗等进行取材。取材时可以取整叶 ,也可以段为单位规范切取 ,以保持肺内结构体系的相对…