不同组织在石蜡包埋中的方法和体会

在石蜡切片制作过程中,组织包埋是一重要环节,不同组织和病变的包埋则有所不同,包埋位置直接影响切片和对病变的观察,现将我们在工作中的包埋方法和体会介绍如下：     

石蜡切片制作细胞株免疫组化检测的研究

细胞凋亡和增殖与肿瘤的发生发展以及临床治疗有密切的关系。诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的新思想之一,增强诱导肿瘤细胞凋亡基因的表达或抑制凋亡抑制基因的表达为很有前途的治疗手段,因而免疫组化检测基因表达的变化成为筛选抗肿瘤药物的重要手段之一。研究应用免疫组化检测     

低温电镜技术及其在植物（动物）材料研究中的应用

通过一些实例介绍了高压冷冻,冷冻置换和冷冻超薄切片等低温电镜样品制备技术,并且与传统方法对照,说明低温电镜技术的优越性,其中,发菜（Nostoc flagelliforme)营养细胞的冷冻超薄切片（未经化学固定,脱水）所显示的超微结构更客观地反映了生物样品的自然生理状态。此外,应用高压冷冻和冷冻置换的免疫标记电镜技术,首次对发菜营养细胞中的DNA进行定位,明确了核区的位置及范围。     

原位杂交检测大鼠前庭代偿中GAP-43 mRNA水平

用ＤＩＧ标记的ＧＡＰ－４３ｃＤＮＡ为探针,以大鼠海马切片作阳性对照,使用原位杂交方法检测了大鼠迷路损毁５,１２,２０和３０ｄ后前庭核区ＧＡＰ－４３ｍＲＮＡ水平的变化,结果表明,迷路损毁后前庭核区ｍＲＮＡ水平升高,原位杂交的应用,为前庭代偿中轴突发芽,突触重组的神经可塑性研究打下了方法学基础。     

内源乙烯对陈化马铃薯切片交替氧化酶表达的诱导作用

抗氰呼吸是植物线粒体区别于动物线粒体的主要功能特征之一,其本质是一条以交替氧化酶（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｏｘｉｄａｓｅ,ＡＯＸ）为末端氧化酶,被称为“交替途径”的呼吸电子传递链（ＭｃＩｎｔｏｓｈ１９９４）。该呼吸途径经常发生于产热植物开花、果实成熟、切片陈化、低温胁迫、机械损伤以及病原体侵染等一些较特殊的环境条件或生理过程中,并受乙烯等一些效应剂的诱导（Ｓｏｌｏｍｏｓ和Ｌａｔｉｅｓ１９７６,Ｄａｙ等１９７８,Ｇｕｄｅ和ｖａｎｄｅｒＰｌａｓ１９８５,Ｍａｒｉｓｓｅｎ等１９８６,Ｙｉｐ和Ｈｅｗ１９８…     

宁夏枸杞雄性不育花药中胼胝质动态变化特征

胼胝质是以β-1,3键结合的葡聚糖,其形成的壁结构只发生在特定组织。当其提前或延迟降解时,会导致花粉败育,明确胼胝质的沉积动态规律对探究雄性不育机理及利用枸杞雄性不育具有重要意义。本研究以宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)可育系‘宁杞1号’与不育系‘宁杞5号’为实验材料,采用半薄切片技术,并利用苯胺蓝和标记胼胝质的方法和高碘酸-希夫反应(Periodic Acid-Schiff stain, PAS),在光学显微镜下对比观察了不同发育时期的宁夏枸杞可育和不育花药中胼胝质的动态变化特征,分析了胼胝质对不育系花药败育的影响。结果显示,小孢子母细胞时期,可育和不育花药小孢子母细胞外沉积形成厚薄不均的胼胝质壁,荧光反应显示减数分裂形成四分体后,胼胝质壁逐渐增厚。随着花药的进一步发育,可育花药中四分体外胼胝质壁逐渐解体、消失,释放出四个小孢子。而不育花药中四分体外的胼胝质壁不断增厚,并没有出现降解迹象,直至开花,药室中小孢子仍以四分体状态存在,已经变形、解体的四分体外仍包裹着胼胝质壁。胼胝质降解异常是导致宁夏枸杞花粉败育的结构原因。本文进一步对不育系四分体胼胝质壁未发生降解的原因进行了分析,为解析宁夏枸杞雄性不育机理提供理论基础。     

利用冰冻切片机快速制作木质茎显微切片技术

植物的木质茎,因次生维管组织含量多,细胞壁木质化程度高,质地较硬,徒手切片和石蜡切片均难以获得满意的切片效果。冰冻切片机可对一定硬度的组织进行切片,是制件植物木质茎的制片的有效工具之一。【方法】利用冰冻切片机可在不经化学固定,对一些质地均匀,含水量较高的木质茎直接切片;而对木质坚硬、含水量较少的茎,经过FAA等固定剂固定后,OCT包埋,(-30)～(-25)℃切片,用0.1%甲苯胺蓝染色液染色。【结果】木质茎的冰冻切片结构完整,图像清晰、色彩丰富。【结论】冰冻切片机可用于木质茎的显微切片制作,再结合甲苯胺蓝染色,具有简便、高效、易操作的优点。     

向川安瘿蜂虫瘿和无虫瘿枝条组织结构的比较

向川安瘿蜂(Andricus mukaigawae)属膜翅目(Hymenoptera)瘿蜂科(Cynipidae),在白栎(Quercus fabri)枝条上形成虫瘿。本文通过向川安瘿蜂虫瘿和无虫瘿枝条的石蜡切片,使用番红-固绿染色,比较向川安瘿蜂虫瘿与无虫瘿枝条的组织结构差异。结果表明,向川安瘿蜂虫瘿由表皮层、保护层、营养层和虫室组成。其中,保护层分为两层,外层是薄壁组织,内层分布许多散生的维管束,石细胞成群分布;营养层由具较大细胞核的营养细胞组成。无虫瘿枝条由周皮、皮层、次生韧皮部、维管形成层、次生木质部和髓组成。另外,向川安瘿蜂虫瘿和无虫瘿枝条的木质化程度存在差异,虫瘿的保护层存在大量的维管束,木质化程度较高,而无虫瘿枝条的木质化部分主要集中在次生木质部。本文为进一步研究向川安瘿蜂虫瘿次生代谢产物的分布提供了组织学基础。     

草鱼出血病病毒人工感染稀有(鱼句)鲫出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察

用电子显微镜观察了稀有(鱼句)鲫出血病(Hemorrhage of Gobiocypris rarus)鱼的病理切片及对照鱼的超薄切片。在对照鱼的鳃、肠道、肾脏、脾脏、肌肉和肝脏中没有见到任何病毒颗粒。在病鱼鳃血管内皮细胞质中观察到聚集的直径70nm左右的GCHV颗粒,说明鳃是GCHV侵袭的主要器官之一,并讨论了鳃对GCHV敏感在GCHV传播中的意义。还在病鱼肠道,肾脏中观察到成片的病毒颗粒,它们也是GCHV侵袭的主要组织。在病鱼脾脏的电子密度低的细胞质中观察到散在的病毒颗粒。很少见到病毒聚集体,脾脏中的病毒可能是脾脏的吞噬细胞吞噬而来。作者认为在病鱼组织中观察到的大小不同的病毒颗粒是处于不同成熟阶段的GCHV。     

从石蜡包埋和甲醛浸泡组织中提取DNA进行PCR扩增的研究

如何从石蜡包埋组织中高质量的提取DNA从而进行分子生物学特别是基因工程方面的科研工作,目前在国内尚未见报道。我们采用二甲苯或水浴法对2块胃癌石蜡包埋组织进行脱蜡,并提取、纯化了DNA,进行PCR扩增,获得了成功。另外对用甲醛浸泡的组织其DNA的受损程度与上述进行了比较,现报告如下。