全文获取类型
收费全文 | 4562篇 |
免费 | 268篇 |
国内免费 | 2168篇 |
出版年
2024年 | 48篇 |
2023年 | 142篇 |
2022年 | 145篇 |
2021年 | 195篇 |
2020年 | 127篇 |
2019年 | 158篇 |
2018年 | 101篇 |
2017年 | 132篇 |
2016年 | 153篇 |
2015年 | 205篇 |
2014年 | 313篇 |
2013年 | 226篇 |
2012年 | 283篇 |
2011年 | 287篇 |
2010年 | 274篇 |
2009年 | 356篇 |
2008年 | 467篇 |
2007年 | 347篇 |
2006年 | 283篇 |
2005年 | 338篇 |
2004年 | 272篇 |
2003年 | 265篇 |
2002年 | 215篇 |
2001年 | 250篇 |
2000年 | 207篇 |
1999年 | 166篇 |
1998年 | 144篇 |
1997年 | 111篇 |
1996年 | 119篇 |
1995年 | 111篇 |
1994年 | 92篇 |
1993年 | 69篇 |
1992年 | 65篇 |
1991年 | 78篇 |
1990年 | 71篇 |
1989年 | 54篇 |
1988年 | 33篇 |
1987年 | 16篇 |
1986年 | 18篇 |
1985年 | 29篇 |
1984年 | 16篇 |
1983年 | 7篇 |
1982年 | 3篇 |
1981年 | 2篇 |
1980年 | 3篇 |
1979年 | 1篇 |
1958年 | 1篇 |
排序方式: 共有6998条查询结果,搜索用时 281 毫秒
961.
双歧杆菌作为表达外源基因的宿主备受关注,成为近年来研究的热点。本文从双歧杆菌表达系统的组成、外源蛋白的表达等角度综述了近期的研究成果,对该系统在口服疫苗和抗肿瘤方面的研究及应用前景进行了展望。 相似文献
962.
中国几种剧毒鹅膏菌的ITS序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
测定了来自中国不同地区的9个剧毒鹅膏菌的核糖体内转录间隔区(ITS)核苷酸序列.以湖南鹅膏为外类群,用ITS序列构建了系统进化树.结果表明:两个不同产地的欧氏鹅膏存在一定的差异,但仍可聚为同一组;欧氏鹅膏与其它几种剧毒鹅膏的亲缘关系较远;两个根据形态特征鉴定为灰花纹鹅膏的标本可能是两个不同的种;欧氏鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种这3个产生白色子实体的种系统演化上不是同源的. 相似文献
963.
964.
酵母表达体系及其在抗体工程中的应用 总被引:6,自引:0,他引:6
酵母是最简单的真核生物,以其为宿主表达异源蛋白具有很大的优越性,近十几年来,各种各样的酵母表达体系陆续发展起来,本文介绍了两种酵母表达系统,并对现有的主要表达体系进行了比较,另外,本文还涉及到酵母在表达抗体或其片段方面的成功应用。 相似文献
965.
为获得鸡源CD40L (chCD40L) 蛋白,以鸡脾细胞制备cDNA并以之为模板扩增chCD40L基因,构建pFastBac-chCD40L供体重组质粒,转化感受态细胞DH10Bac,通过筛选及鉴定获得Bacmid-chCD40L重组质粒,转入真核表达系统sf9昆虫细胞进行蛋白表达与纯化,获得His-chCD40L蛋白。此外,构建pQM01-chCD40L质粒,转染HEK 293T细胞进行蛋白表达与纯化,获得Strep-chCD40L蛋白。亲和层析纯化的chCD40L蛋白浓度为0.01 mg/mL。为检测chCD40L蛋白的生物活性,分离和培养3周龄SPF雏鸡的法氏囊组织原代细胞,将chCD40L加入细胞培养液刺激细胞增殖,通过Western blotting试验、间接免疫荧光试验、流式细胞术检测,发现该蛋白能够与法氏囊B淋巴细胞表面的CD40结合,说明chCD40L具有生物活性。成功获得chCD40L蛋白,为原代B淋巴细胞体外培养及IBDV野毒分离与诊断奠定了基础。 相似文献
966.
967.
采用超快时间分辨荧光光谱装置对光系统Ⅱ核心天线CP43和CP47进行了研究 ,并在 5 14.5nm激光激发下获得了它们的动力学荧光光谱。CP43和CP47的荧光光谱范围分别为 6 40~ 780nm和 6 30~ 775nm ,并且它们分别在约 6 80nm和 6 91nm处有最大峰 ,在这两个峰值处的荧光寿命分别约为 3.5 4ns和 3.2 2ns。通过理论计算认为在CP43和CP47中 ,叶绿素a的荧光发射效率分别约为 38.3%和 40 .6 %。讨论了类胡萝卜素到叶绿素a分子的能量传递 ,认为在CP43和CP47中 ,类胡萝卜素到叶绿素a分子的能量传递时间常数分别为 9.6× 10 11s-1和 1.3× 10 12s-1,能量传递效率分别为 47.5 %和 6 6 .5 % ,并且估计在这两种核心天线中 ,类胡萝卜素分子和叶绿素a分子的外周间距分别约为 0 .110nm和 0 .0 85nm。 相似文献
968.
蛋白激酶D(Protein kinase D,PKD)是一种新的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族和甘油二酯(Diacylglycerol,DAG)受体,参与细胞内多种生理生化过程。为获得高纯度的PKD1的催化结构域(PKD1-cat)用于晶体学结构的研究,将带有GST标签的PKD1-cat基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1中,构建了重组质粒。将重组质粒转化到含穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,转座后获得了含目的基因GST-PKD1-cat的重组Bacmid。重组Bacmid DNA转染Sf9昆虫细胞后,获得重组杆状病毒并扩毒。将毒种以5 PFU/cell的感染复数感染悬浮培养的T.ni昆虫细胞,SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物。结果显示,表达产物在分子量约68 kDa处有一特异条带可与GST单克隆抗体发生反应。经谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析纯化和PreScission Protease切除GST标签后,得到了纯度很高的分子量约42 kDa的目的蛋白PKD1-cat。体外PKD激酶活性实验结果显示,随着PKD1-cat浓度的增加,激酶活性增高。这些结果显示截短的重组PKD1-cat有很高的催化活性和纯度,为采用核磁共振或晶体学方法解析PKD1-cat的三维结构奠定了基础。 相似文献
969.
肠毒素大肠杆菌定居因子抗原基因CFA—1在痢疾杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
通过体外重组的方法,构建了包含asd基因的重组表达质粒pZHY21,与福氏志贺氏菌Fwl101构成了宿主-载体平衡致死系统,Westem印迹结果表明,在没有抗生素条件选择的情况下,稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CFA-I。电镜结果显示,在重组菌株的菌体表面,表达产物能够装配成菌毛。重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后,可以诱生CFA-I的抗体;同时可以检测到分泌型IgA产生,表明重组菌可以诱导相应的粘膜免疫反应。 相似文献
970.