2DE-MS中膜蛋白质组的研究进展

2-维凝胶电泳(2DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的研究.然而,2DE-MS在膜蛋白质组学研究方面却有其局限性,主要因为:膜蛋白具有低丰度、难溶、等电点时易沉淀、难酶解等特点.然而随着亚细胞分离技术和直接的生化方法富集等技术的发展,低丰度问题得到了极大的改善;增溶剂(尿素,硫脲),新的两性离子和非离子去垢剂,以及有机溶剂等的利用极大地改善了膜蛋白质组的溶解性能;同时,一些新的2DE技术的利用扩大了常规2DE的分离范围.在膜蛋白裂解方面,将酶解法与化学法(CNBr)相结合,另外先进的质谱技术的发展使得膜蛋白质组的研究在最近几年取得了较大的发展.现对2DE-MS途径中,膜的富集、膜蛋白的提取、分离、酶解、鉴定方面的进展进行综述.     

小麦蓝矮病植原体胸苷酸激酶基因(tmk)的分离、原核表达及酶活性分析

[目的]克隆、表达小麦蓝矮病(WBD)植原体胸苷酸激酶基因(tmk),并分析酶活性,进一步研究胸苷酸激酶在植原体感染宿主及繁殖过程中的功能和作用机理,更好地防治植原体病害.[方法]PCR方法扩增tmk基因并进行序列分析,连接pET30a( )表达载体后原核表达,经Ni-NTA柱层析纯化后进行酶催化活性分析.[结果]首次从小麦蓝矮病(WBD)植原体基因组中分离出胸苷酸激酶基因(tmk),该基因包含tmk-1和tmk-2两种,大小分别为630 bp和624 bp,其编码的氨基酸序列均包含3个与结合NTP/NMP相关的保守功能区.表达的融合蛋白TMK-1活性极低,酶活仅16.4 U/mg,而 TMK-2酶活高达112.41 U/mg,且其最适催化条件为32℃、pH 7.3、1.5 mmol/L Mg2 和 1 mmol/L ATP.[结论]分析了胸苷酸激酶活性中心的一级结构序列及其催化活性随条件变化而改变的性质,为深入研究小麦蓝矮病植原体胸苷酸激酶在侵染寄主及其在宿主体内增殖的转录性质奠定基础.     

广东金山温泉沉积物中原核与真核微生物多样性初步分析

[目的]本研究旨在采用不同的PCR引物对广东省恩平市金山温泉的高温水底沉积物微生物多样性进行初步的分析.[方法]采用改进的玻璃珠法抽提温泉沉积物中环境基因组DNA,通过对用4对引物分别扩增得到的原核微生物16S rRNA基因和真核微生物ITS序列的分析,将所得到的数据与国际基因数据库GenBank进行相似性比较并构建系统发育树.[结果]研究发现原核类群G的 14个优势克隆中7个都属于蛭弧菌属(Bdellovibrio).与它们最相似的序列是从海洋中分离到的两个菌株 Bacteriovorax sp. NE1 (EF092445)和Bdellovibrio sp. JS5 (AF084859),相似性分别为96%和99%.原核类群X的4个序列主要属于蓝细菌类群,其中JS-X2与在美国黄石公园温泉发现的Uncultured Cyanobacterium (L35331)有95%的相似性,并且与已经全基因组测序的嗜热蓝细菌聚球藻Thermosynechococcus elongatus BP-1 (47118315)有89%的相似性.真核类群Z有三个类群,分别是Penicillium sp.,Lodderomyces sp.和Gloeotinia sp..其中大部分序列与青霉属相似性在88%～ 90%之间.[结论]所得到的结果显示金山温泉中的微生物多样性十分丰富.     

中国南京地区刺齿虫兆属一新种(弹尾目:长角(虫兆)科)

本文记述刺齿(虫兆)属Homidia 1新种--斑纹刺齿(虫兆)Homidia fascia, sp.nov.(Figs.1～16),该种有些特征可与H. tibetensis Chen & Zhong, 1998 相似,但下唇刚毛L1,第4腹节毛序和腹管毛序可与后者区分.正模♀, 副模13♀♀,江苏南京南唐二陵,1996-Ⅲ-6,存于南京大学生物系.     

应用基因芯片技术检测肝组织的基因表达

为检测正常肝组织中的基因表达状况,采用cDNA microarray技术对正常肝组织中表达的1500个基因进行定量,结果为97个基因较高表达,1010个基因中度表达,380个基因低表达,结果是cDNA microarray技术是大规模检测基因表达的有效方法。     

大鼠肝生长发育过程中蛋白水解酶和ADAMs的变化

用SDS-PAGE、SDS-G-PAGE、Western等方法研究了大鼠肝从胚胎到成体生长发育过程中酸性,中性和碱性蛋白水解酶和ADAMs变化。结果表明：30和32kD酸性蛋白水解酶在开始吃奶和出生后第五周各出现一个活性高峰;75/80kD酸性蛋白水解酶仅在出生后第三周有活性,71和75kD的中性蛋白酶在出生后第三周活性最强：15kD碱性蛋白水解酶在开始吃奶时有活性,75kD的ADAMs在出生前至出生后第20天和出生后第四周到成体的含量呈两次正态分布;40kD的ADAM主要在胚胎肝和吃奶时检测到,但30kDADAMs主要出现在吃饲料以后各个时期,50/47、73和140kDMDC15变化和75kD的ADAM相似,30kD的MDC15仅出现在出生后15-35天的肝脏内,58kD的MDC15主要在出生后7-45天之间,实验表明,营养来源和方式能有效影响肝脏的生理生化过程,揭示营养,肝功能,生长发育的密切关系。     

微生态调节剂整肠生治疗肝硬化腹泻临床观察

肝性腹泻是肝硬化最常见的并发症之一 ,其发病率约为10 %～ 43.86 % [1 ]。腹泻的发作和持续 ,致使消化吸收障碍 ,营养物质的丧失 ,特别是蛋白质与维生素类的缺乏 ,可进一步加重肝脏病损 ;肝脏的病损加重 ,免疫功能下降 ,又常是导致腹泻的根本因素 ,给治疗带来困难。近年来 ,我们应用微生态调节剂整肠生治疗肝硬化性腹泻 32例 ,取得较为满意的临床疗效 ,现总结报告如下。1　材料与方法1.1　诊断依据　有明确肝硬化病史 ,便次增加 3次 /日或次数≥ 5次 /日 ,外观为稀水样黄色便 ,大便常规及培养均阴性。1.2　病例选择　所有病例均为 1997年 5…     

多胺代谢与癌肿的研究

研究多胺与癌肿的关系。这些癌肿包括Raji癌肿细胞 ,急性淋巴细胞白血病 ,妇产科癌肿 (卵巢癌等 ) ,卵巢癌HO— 891 0细胞 ,肺癌以及胃癌等。研究结果 :(1 )Raji癌细胞株及卵巢癌细胞株 (HO— 891 0 )在培养过程中 ,第 2 4～4 8h多胺水平出现高峰 ,它与这两种癌细胞的核酸合成 ,细胞增殖呈现正相关 ;(2 )急性淋巴细胞白血病患者淋巴细胞及红细胞中多胺水平均升高 ,这有助于对这些病的早期诊断及判断预后 ;(3 )妇科癌症 (尤其卵巢癌 ) ,肺癌 ,胃癌等患者尿液中多胺水平明显高于正常 ,所以尿液中多胺对这些癌肿也是一种有效的诊断标记物     

中蜂囊状幼虫病病毒的三维结构

提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)的RNA,通过RT-PCR扩增获得1069bp的DNA片段,将其克隆到pGEM-T Easy载体上.测序分析表明,该段基因序列与意蜂囊状幼虫病病毒(SBV)基因序列的同源性为87.6%,与之对应的氨基酸序列的一致性高达94.6%,说明CSBV是与SBV十分相似而又不相同的病毒.在此基础上,应用冷冻电子显微镜与计算机三维重构方法测得病毒颗粒的三维结构,分辨率为2.5nm,其衣壳按T=1(p=3)的对称二十面体结构排列,表面光滑,有12个五邻体和132个孔洞.研究还发现,病毒内部的核酸是按5-3-2对称的二十面体结构排列,这种排列方式在细小RNA病毒中尚未见报道.