巴西人参皂苷的纯化富集及其体外促雄激素活性研究

目的：探讨巴西人参提取物中齐墩果酸型皂苷类化合物对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞）雄激素合成与分泌的促进作用,并根据细胞试验筛选出活性较强的组分。方法：以AB-8与XAD1600两种大孔吸附树脂分离富集得到的不同组分为试材,分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、酶联免疫吸附法、硝酸还原法、羟胺法、硫代巴比妥酸法检测不同组分在不同浓度下对TM3细胞增殖活率、睾酮（T）含量、二氢睾酮（DHT）含量、环磷酸鸟苷（cGMP）含量、一氧化氮（NO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量的影响。结果：经AB-8大孔吸附树脂分离得到的70%乙醇组分较其他组分具有更强的促进TM3细胞雄激素分泌的活性,再以XAD1600大孔吸附树脂对70%乙醇组分进一步纯化富集,获得的GP-1与GP-2组分均可显著促进TM3细胞T、DHT、cGMP的分泌量（P <0.05,P <0.01）,并提高SOD酶活性（P <0.01）,降低MDA含量（P <0.05,P <0.01）,且GP-2组分效果优于GP-1组分。结论：巴西人参各分离纯化组分可以显著促进TM3细胞雄激素的合成与...     

转录因子二聚化配体3（TFDP3）在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌分子分型的相关性研究

目的:本研究旨在分析总结癌-睾丸抗原TFDP3在乳腺癌中的表达规律,探究TFDP3表达与乳腺癌分型及发病进程关系。方法:通过对不同分型及分期的乳腺癌组织切片进行免疫组化检测,分析TFDP3在其中的表达情况,并结合样本来源患者的临床信息,对TFDP3的表达与乳腺癌分子分型、分期及预后的相关性进行统计分析。同时,通过Western Blot检测了5种乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3、T47D及MCF-10A)中TFDP3的表达情况,并通过细胞免疫荧光实验,检测TFDP3在细胞中的定位。结果:TFDP3在已检测的乳腺癌样本中的表达率为49%。乳腺癌临床分子分型标记物HER2的表达与TFDP3的表达呈正相关,但乳腺癌的分期、临床病理分型以及临床分子分型标记物ER、PR的表达均与肿瘤组织中TFDP3的表达无相关性。结论:TFDP3在各在乳腺癌组织中高表达,其表达量与HER2的表达量呈正性相关。这为研究已TFDP3为靶点的乳腺癌免疫治疗,提供了新的依据。     

基于ChIP-Seq进行肿瘤睾丸抗原XAGE-1b基因表达蛋白的DNA结合位点鉴定

XAGE-1b（X antigen family member 1B）属于XAGE亚家族,是一种肿瘤 睾丸抗原（cancer/testis antigen,CTA）,表达于正常人睾丸组织和多种类型的肿瘤细胞中.本实验室前期研究发现,该基因在涎腺腺样囊性癌高转移细胞系中呈高表达.为了进一步研究XAGE-1b下游调控基因,本实验采用ChIP Seq技术筛查XAGE 1b蛋白质可能存在的DNA结合片段. 结果发现,XAGE-1b下游调控基因富集于细胞分裂（cell division,P-Value＝7.95e-04）、细胞周期调控（cell cycle,P-Value＝5.532e-03）、及癌症相关基因（GESA/MSigDB module_11,P-Value＝2.010e-06）中．同时发现,XAGE-1b下游调控多个基因的表达产物（NCBI/interactions 22827,P-Value＝4.678e-06）能与原癌基因c-Myc的启动子抑制蛋白PUF60发生蛋白质相互作用,并通过qPCR进行了验证．这些研究对阐明XAGE-1b在肿瘤细胞的增殖和转移中的作用有重要意义.     

人新基因hbrp的染色体定位及其对TPK活性的抑制作用（简报）

hbrp(Human BSP-Related Protein)是我们实验室最近在睾丸组织中克隆的一个人与BSP（bovine seminal plasma)蛋白相关的新基因。为了将有关该新基因信息与现有人类基因组转录图相整合,我们应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridizationFISH)法进行了该基因的人染色体基因定位,结果成功地将hbrp基因定位在人19号染色体长臂1区3带上。hbrp基因是在对BSP蛋白功能的研究过程中发现并克隆的,其同源性分析发现,与其序列最相近     

人类生精相关基因TSARG4的cDNA克隆

为了探索精子生成的分子机制 ,从人精子外部致密纤维蛋白相关基因SPAG4(spermantigen 4)和小鼠精母细胞中表达的AK0 0 62 2 5基因出发 ,找到两个人类EST ,BG72 0 5 64和AI70 0 45 4,其中BG72 0 5 64在人睾丸中表达。运用“间隙填充法”填平这两个EST之间的间隙 ,从人睾丸文库中快速克隆了同源于SPAG4和AK0 0 62 2 5基因的人类TSARG4基因 (testisandspermatogenesisrelatedgene 4) (GenBank登录号为AF40 13 5 0 ) ,并用RT PCR对该基因阅读框进行验证。TSARG4基因全长 12 5 2bp ,开放阅读框为 94～ 12 3 3bp ,定位于 2 0q11.2 ,推定编码 3 79个氨基酸 ,预计分子量为 43 0 81.45 ,等电点为 8.61,该基因与小鼠精母细胞基因AK0 0 62 2 5编码的氨基酸序列同源性 74% ,与人类SPAG4基因编码的氨基酸序列同源性 45 %。RT PCR表明人类TSARG4基因在多个组织中均有表达 ,而同源的小鼠AK0 0 62 2 5基因仅在睾丸中表达     

热应激对大鼠睾丸iNOS和Bcl-2表达的影响

本实验通过建立大鼠单侧隐睾模型,研究热应激对睾丸诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase iNOS）和B细胞淋巴瘤／白血病-2（B cell lymphoma／leukemia-2,Bcl-2）基因表达的影响。42d龄SD雄性健康大鼠12只建立单侧隐睾作为热应激处理的模型,术后第7d处死大鼠留取双侧睾丸,常规组织学切片观察两侧睾丸生精上皮形态,     

Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用

小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制, 利用生物信息学技术, 采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测; 利用融合绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)定位的方法, 通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒, 将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞, 在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位; 用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变; 在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响. 结果表明: ① 生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达, 在细胞质中也有少量表达; 荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核, 在细胞质中也有少量分布; ② Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③ Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用, 这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础.     

小鼠精子形成各阶段转基因效率的研究

在过去的近30年中,转基因技术在哺乳动物基因表达方面研究的应用已经成为实验生物学及应用生物学领域最为显著的进展之一．传统的制作转基因动物方法有显微注射法、逆转录病毒感染法和胚胎干细胞法等,但每种方法都有其缺陷,限制了其在今后转基因动物研究中的广泛应用．对小鼠体内生殖细胞进行外源基因转染,研究精子形成过程中制作转基因小鼠的效率．首先运用睾丸注射法将被脂质体包裹的绿色荧光蛋白表达载体(pIRES2-EGFP)注射到公鼠睾丸及附睾内,然后根据精子形成的不同阶段,分别于注射后7、16、30和42天与发情母鼠合笼,利用PCR和DNA印迹方法对新生小鼠进行基因组DNA检测．在各阶段所得新生小鼠中PCR阳性率分别为6.82%、0、56.86%和42.86%,DNA印迹检测阳性率分别为6.82%、0、47.06%、34.69%．经活体荧光成像系统及荧光显微镜分析,转基因小鼠呈现绿色荧光表达．通过比较精子生成各阶段转基因效率高低,为以后通过用睾丸内注射法转染雄性生殖细胞高效制作转基因动物提供了理论依据．     

镉对小鼠精母细胞凋亡及附睾内精子质量的影响

采用人工水质染毒的方法,利用透射电镜技术及流式细胞术（FCM）,探讨重金属镉对小鼠精巢内生殖细胞凋亡及附睾内成熟精子质量的影响.结果表明：各试验组小鼠生殖细胞处于凋亡时期的数量显著高于对照组,凋亡时期的生殖细胞超微结构呈现出线粒体空泡、核膜内陷、染色质周缘化及核固缩等形态特征,表明镉容易引起小鼠生殖细胞凋亡;各试验组精子早期凋亡的比例显著高于对照组,而活性精子的比例显著低于对照组（P<0.05）,其中高剂量组（0.10 mmol·L^-1）精子成活率（75.1%）显著低于对照组和其他试验组,而早期凋亡率（22.6%）则显著高于对照组;高剂量组睾丸生殖细胞DNA断裂率（18.2%）及附睾精子断裂率（26.5%）均显著高于对照组（3.3%、5.6 %）（P<0.05）.各试验组小鼠睾丸内DNA断裂的生殖细胞数量低于附睾内DNA断裂的精子数量.随着添加剂量的增加,小鼠睾丸内生殖细胞及附睾内精子凋亡率逐渐升高.表明小鼠生殖细胞凋亡及DNA损伤数量与镉剂量具有一定相关性.     

基于ChIP-Seq进行肿瘤/睾丸抗原XAGE-1b的DNA结合位点鉴定

XAGE-1b(X antigen family member 1B)属于XAGE亚家族,是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CTA),表达于正常人睾丸组织和多种类型的肿瘤细胞中.本实验室前期研究发现,该基因在涎腺腺样囊性癌高转移细胞系中呈高表达.为了进一步研究XAGE-1b下游调控基因,本实验采用ChIP-Seq技术筛查XAGE-1b蛋白质可能存在的DNA结合片段.结果发现,XAGE-1b下游调控基因富集于细胞分裂(cell division,P-Value=7.95e-04)、细胞周期调控(cell cycle,P-Value=5.532e-03)、及癌症相关基因(GESA/MSigDB module_11,P-Value=2.010e-06)中.同时发现,XAGE-1b下游调控多个基因的表达产物(NCBI/interactions 22827,P-Value=4.678e-06)能与原癌基因c-Myc的启动子抑制蛋白PUF60发生蛋白质相互作用,并通过qPCR进行了验证.这些研究对阐明XAGE-1b在肿瘤细胞的增殖和转移中的作用有重要意义.