野猪RBP4基因的克隆、表达及变异初步研究

视黄醇结合蛋白是体内一类将维生素A从肝中转运至靶组织以实现维生素A的细胞内转运代谢的特异的运裁蛋白,在协助维生素A发挥生理功能中起着不可替代的作用.它既是一个影响猪的繁殖性状的候选基因,同时也是一个研究维生素A代谢障碍及肥胖症的候选基因.为了进一步揭示其群体遗传变异,寻找新的遗传标记,本研究对野猪(Sus scrofa ussuricus)RBP4基因进行了克隆、表达和序列分析,并对所发现的点突变进行了基于限制性内切酶Msp Ⅰ的PCR-RFLP分析.序列分析表明野猪与大白猪相比存在着4个SNPs;该基因在野猪的肝脏、肾脏、肺、大肠和肌肉中表达,在心脏、胃、脾、小肠和睾丸中不表达;对14头野猪的酶切多态性分析表明该突变位点是多态位点,并且3种基因型的分布符合Hardy-Weinberg定律.     

彩色多普勒超声检测睾丸微石症合并精索静脉曲张患者睾丸动脉与精索静脉血流动力学的临床分析

目的:采用彩色多普勒超声检测睾丸微石症(TM)合并精索静脉曲张(VC)患者睾丸动脉与精索静脉血流动力学的情况,并分析VC分级与TM分型的关系。方法:选择2014年8月到2016年8月80例TM合并VC患者及80例健康男性分别作为研究组与对照组,均采用彩色多普勒超声检测睾丸动脉收缩期峰值血液速度(PSV)、阻力指数(RI)及精索静脉最高流速(VS-Vmax)、静脉返流时间(TR)、平静呼吸最大内径(DR)、Valsalva试验最大内径(DV)。用Spearman秩相关分析TM分类与VC评分的关系。结果:两组睾丸动脉RI比较无显著差异(P0.05)。研究组PSV明显小于对照组(P0.05),精索静脉DR、DV、VS-Vmax、TR均显著大于对照组(P0.05)。TM分类与VC分级呈正相关(P0.05)。结论:TM合并VC患者睾丸动脉、精索静脉血流动力学均存在不同程度的改变,VC严重程度与睾丸微小结石数量呈正相关。     

睾丸间质干细胞增殖分化及其调控

睾丸间质干细胞（stem Leydig cells, SLCs）是哺乳动物睾丸间质内的一种成体干细胞,可以分化成为成熟的睾丸间质细胞,参与精子发生。目前,仅在人、大鼠和小鼠中成功分离出SLCs,并证实其具有分化成为睾酮分泌细胞的潜能。最新研究发现：PDGFRα、Nestin、Thy-1、CD51和COUP-TFII等可作为SLCs的分子标记,但并不具有特异性。迄今,只在大鼠中建立了SLCs的基本分离培养体系。因此,本文拟从大鼠等SLCs的分子标记、分离培养条件、增殖分化调控以及哺乳动物LCs在精子发生过程中作用的研究进展等作一综述,以期为哺乳动物SLCs研究提供科学参考。     

生殖细胞及性腺移植

生殖细胞和性腺移植研究近年来已取得了突破性进展。这两项技术对于农业、医学及动物繁殖学的研究具有深远的意义和很大的应用价值。本文从同源移植、异源移植、移植技术及其它移植相关问题等方面对生殖细胞和性腺移植进行了简要介绍,并阐述了近年来在这方面所取得的进展。     

人DDX36和小鼠Ddx36基因在成年睾丸组织中的表达研究

果蝇是结构基因组学和功能基因组学研究的最为理想的一种模式生物,采用同源克隆的策略,应用生物信息学分析和实验技术相结合的方法分别从人和小鼠中克隆了同源于果蝇MLE蛋白的新基因DDX36和Ddx36。为进一步研究DDX36和Ddx36基因与精子发生的关系,再应用Northrn blotting,RT-PCR和组织原位杂交技术探讨了DDX36和Ddx36基因的表达情况,结果发现人DDX36和小鼠Ddx36基因在成年睾丸组织中高表达。初步证明DDX36和Ddx36基因在精子发生中亦可能发挥重要作用。     

利用巢式PCR技术和人类基因组草图搜索法快速获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG2

从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (BE6 44 5 42 )入手 ,设计了基因特异性引物和载体特异性引物进行巢式PCR扩增 ,结合人类基因组草图搜索法 ,从睾丸cDNA文库中快速分离出人类睾丸凋亡相关基因TSARG2的 5′末端而获得全长cDNA ,GenBank登录号为AY0 40 2 0 4(保密期为 1年 ) ,同时应用生物信息学的方法克隆了该基因在小鼠中的同源基因 ,GenBank登录号为AF395 0 83。TSARG2基因的cDNA全长为 12 33bp ,包含 6个外显子 ,基因组跨越 115kb ,编码由 30 5个氨基酸组成的、分子量为 34 75 1的蛋白质 ,与已知蛋白质无明显同源性。查询最新的人类基因组工作草图 ,该基因定位在染色体 4q33～ 34 .1。     

血管内皮生长因子蛋白在大鼠睾丸和附睾的表达和定位研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)在雄性生殖系精子发生发育和成熟过程中的调控作用,应用免疫组化、Periodic acid-Schiff(PAS)染色及蛋白质免疫印迹技术,检测VEGF蛋白在成年大鼠睾丸和附睾的表达和定位情况。Western-blots显示,在大鼠睾丸和附睾内均有VEGF蛋白(约45kD)的表达;免疫组化显示,睾丸内VEGF见于圆形和长形精子细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,免疫阳性产物位于细胞质内。精子细胞的VEGF表达伴随精子细胞顶体发育的全过程,精子残余体呈强阳性。附睾内VEGF表达于附睾管上皮,且有区域和细胞特异性。附睾起始段的所有上皮主细胞内都有VEGF阳性颗粒;头、体、尾各段的VEGF阳性细胞多数与含PAS阳性颗粒的细胞重合,证明为亮细胞;近端附睾的管腔内可见精子头部呈VEGF阳性染色。睾丸、附睾间质血管内皮为VEGF阴性。上述结果表明,VEGF蛋白可由生殖细胞和附睾管上皮细胞直接产生,它可能以自分泌和/或旁分泌的形式共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞和血管内皮,直接或间接影响精子的发生、发育和成熟过程,特别是精子顶体的形成过程,并可能与精子在附睾内的成熟有关。     

小鼠睾丸凋亡基因MSRG-11的人类同源基因SPATA17的克隆

利用生物信息学方法结合实验手段克隆了一个在睾丸组织中特异高表达的小鼠生精细胞凋亡相关基因Spata17的人类同源基因SPATA17（GenBank登录号为AY963797）。应用生物信息学分析显示该基因定位在染色体1q41,包含11个外显子,内含子和外显子交界区均符合gt—ag规则;该基因开放阅读框为1083bp编码一个由361个氨基酸组成的、分子量为43．49kD、等电点为9．71、含有三个保守IQ功能域的蛋白;对SPATA17编码蛋白质进行生物信息学分析,无跨膜区,无信号肽序列,推测为一非分泌性蛋白。多组织和Northern blot结果显示该基因只在睾丸组织中特异高表达,转录本大小为2．0kb。总之,研究表明SPATA17在睾丸组织生精细胞凋亡起重要作用。     

邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯对睾丸的毒性作用及机制

邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）是目前使用最广泛的增塑剂之一,DEHP具有毒性,长期暴露会对机体的多个系统产生损害,特别是对雄性生殖系统的毒性作用更为明显。DEHP通过诱导氧化应激、调控细胞自噬,促进生精细胞和睾丸间质细胞凋亡、抑制睾酮合成、破坏血-睾屏障、诱导睾丸支持细胞铁死亡以及影响子代雄性的表观遗传等,造成生殖器官的病理损伤。本文就DEHP对睾丸的毒性作用及机制进行综述,拟为男性生殖障碍的防治研究提供新思路。     

高温对珍贵绢丝昆虫——天蚕睾丸生长发育的影响

研究结果表明,高温对天蚕(Antheraea yamamai)睾丸生长发育有明显影响.3、4龄幼虫睾丸大小在20～29℃范围内随温度提高而增大,32℃下则略有下降;5龄幼虫睾丸大小在20～26℃范围内随温度提高而减小,其中以20℃下的睾丸极显著为大,在29℃和32℃下幼虫难以生存,睾丸几乎不可能发育.在茧蛹期,不论在刚结茧还是在化蛹第1天和第6天经受32℃高温持续处理,睾丸大小增长、精子发生明显受阻,睾丸中可溶性蛋白含量和精子形成数量明显下降.成虫期第1天受32℃高温处理时精子活力明显减弱.建议在天蚕制种前,结茧至成虫期茧蛹和雄蛾保护时切勿经受32℃高温冲击.此外就3、4龄和5龄幼虫饲育的适宜温度作了探讨.