SPOP对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制的研究

探讨人卵巢癌组织中斑点状蛋白(SPOP)的表达及对其卵巢癌细胞生物行为学的影响及相关机制。采用免疫组化技术分别检测正常卵巢组织10例、卵巢癌组织90例的组织芯片中SPOP的表达;体外培养永生化人卵巢癌细胞株OVCAR-3、SKOV3及永生化的人卵巢表皮上皮细胞株HOSE,RT-PCR、WB检测3种细胞株SPOP的表达。用慢病毒稳定转染OVCAR-3、HOSE细胞株,构建过表达、敲低SPOP的细胞株。流式细胞仪检测转染后细胞株的凋亡,CCK8检测转染后细胞株的增殖情况,Transwell小室检测转染后细胞株的迁移侵袭情况。WB检测转染后细胞株PI3K-Akt通路相关蛋白的表达情况。组织学免疫组化评分显示卵巢癌组织染色明显高于正常卵巢组织。细胞学实验显示,成功构建过表达、敲低SPOP的OVCAR-3细胞,过表达组、过表达空载组、敲低组、敲低空载组细胞凋亡及增殖能力无明显差异;各组细胞迁移及侵袭结果与空载组有明显差异,且差异有统计学意义(p0.05)。过表达组细胞P-GSK3β(Ser9)表达水平明显低于敲低组(p0.05),MMP-9表达水平明显高于敲低组(p0.05)。SPOP在卵巢癌组织中表达上升,且具有促进卵巢癌细胞迁移侵袭的作用,其调节机制可能与p-GSK3β(Ser9)通路相关。     

淋巴因子和干扰素

<正> 853728 抗人β-干扰素的合成多肽抗体[英]/Chow,T.P.…∥J.Biol.Chem.-1984,259(19).-12220～12225[译自 DBA,1985,4(2),85-00719]作者制备了与人β-干扰素 N-末端1-21和18-45氨基序列相一致的合成多肽。将此     

甜菜夜蛾SeGluCl剪接变异体的敲除及其对杀虫剂敏感性的影响

【目的】本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,探索甜菜夜蛾Spodoptera exigua谷氨酸门控氯离子通道(glutamate-gated chloride channels, GluCls)基因不同转录变异体编码的SeGluCls对杀虫剂敏感性是否存在差异。【方法】采用RT-PCR和RACE技术获得甜菜夜蛾SeGluCl的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除SeGluCl两个剪接变异体SeGluCl 3a和SeGluCl 3b,并构建甜菜夜蛾敲除品系(3a-KO和3b-KO),生物测定甜菜夜蛾敏感品系WH-S(对照品系)及3a-KO和3b-KO品系的3龄幼虫对阿维菌素、甲维盐和氟虫腈3种杀虫剂敏感性的差异。【结果】获得了甜菜夜蛾SeGluCl全长cDNA序列,并发现其2种剪接变异体(SeGluCl 3a和SeGluCl 3b),SeGluCl 3a(GenBank登录号：OM304353)的开放阅读框(open reading frame, ORF)长1 362 bp,编码454个氨基酸,SeGluCl 3b(Gen...     

依达拉奉治疗急性脑出血的临床疗效及对血浆MMP-9水平的影响

目的:观察依达拉奉治疗急性脑出血的临床疗效和对血浆基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法:60例急性脑出血患者随机分为治疗组和对照组各30例。对照组给予常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用依达拉奉,并在治疗后24h内和14d进行神经功能缺损评分及血浆MMP-9水平测定。结果:治疗组神经功能缺损评分、血浆MMP-9水平较对照组降低(P<0.05、P<0.01)。结论:依达拉奉可改善急性脑出血患者神经功能,可能与降低MMP-9水平有关。     

基因前定点敲入FLAG标签表达的FLAG-SND1蛋白参与胞内应激颗粒的形成

CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease) 基因编辑技术是近年来新兴的一种可以实现基因特异性敲除和敲入的技术。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑系统,将3×FLAG标签定点敲入HeLa细胞SND1基因前方,使细胞内源性表达的SND1蛋白带有3×FLAG标签,并观察SND1与应激颗粒及加工体的定位情况。设计针对SND1基因起始密码子ATG附近的sgRNA,以px459为表达载体,构建出重组真核表达质粒。设计含有3×FLAG及待插入位置上下游150 bp同源臂的序列,经公司合成获得重组质粒。将2个质粒共同转染HeLa细胞,使用嘌呤霉素筛选阳性细胞,挑取单克隆后培养。Western 印迹表明,细胞表达3×FLAG-SND1融合蛋白质。提取细胞基因组DNA进行测序。测序无误获得稳定株后,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,发现与WT细胞相比无显著性差异。同时,使用0.5 mmol/L亚砷酸钠处理,细胞发生氧化应激,eIF2α蛋白磷酸化增加,胞浆中出现应激颗粒,SND1与应激颗粒标志蛋白TIAR存在共定位现象,但不存在与加工体蛋白DCP1α的共定位。     

重组人白细胞介素—3真核表达质粒直接注射小鼠骨骼肌的体内表…

将含有人白细胞介素－３基因ｃＤ－ＮＡ的真核表达质粒直接注射小鼠骨骼肌,观察ｈＩＬ－３基因在小鼠肌肉及体内的分泌表达情况。原位分子杂交及免疫组化结果显示注射重组质粒后,第１４天重组质粒全部进入到骨骼肌细胞内并有ＩＬ－３的表达。     

急性冠状动脉综合症患者血浆溶血磷脂酸及基质金属蛋白酶-9水平的检测及意义

目的：探讨急性冠状动脉综合症（acute coronary syndromes,ACS）患者血浆溶血磷脂酸（lysophatidic acid,LPA）及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP．9）水平的变化,探讨其在ACS中可能的临床意义。方法：入选100例ACS患者,根据病情将其分为怠性心肌梗死（AMI）组50例,不稳定型心绞痛（UAP）组50例,并入选40例健康者作为对照组,分别用无机磷定量法和酶联免疫吸附测定法测定血浆LPA、MMP-9水平。结果：AMI组血浆LPA、MMP-9水平显著高于UAP组（LPA：3．29±0．42vs2．67±0．37;MMP-9：481．7±86．5VS237．85±65．34,P〈0．01）并且两组均显著高于对照组（LPA：1．82±0．31;MMP-9：87．42±23．85P〈0．01）;LPA与MMP-9水平呈正相关（r=O．224,P〈0．05）。结论：UIA与MMP-9可能是提示不稳定斑块的形成、破裂,进而导致急性冠状动脉综合征的危险信号。     

IL-10基因启动子-627位点多态性与过敏性哮喘

目的：探讨白细胞介素-10（IL-10）启动子-627C／A基因多态性和等位基因频率与过敏性哮喘血清IgE、IL-10浓度以及病情严重程度的相互关系。方法：从哮喘病人DNA文库中选择青岛地区过敏性哮喘病人518例和健康志愿者501例,采用PCR—RFLP方法对IL．10基因启动子．627位点多态性进行观察,比较两组基因型和等位基因的分布频率,同时测定血清中总IgE、IL-10浓度和肺功能检查（FEV1、FVC、FEV1／FVC）。结果：轻度和中一重度哮喘组AA、CA和CC基因型所占比例分别为38．1％、46．0％、15．9％和45．6％、46．2％和8．2％（P=0．0168,X2=8．232,df=2）。A等位基因与哮喘病轻的严重程度有明显相关性（P〈0．05）。AA基因型哮喘病人血清的IgE浓度显著升高（P〈0．01）,但其血清IL-10浓度比CC基因型携带者明显降低（P〈0．01）。结论：IL-10基因启动子-627位点多态性与过敏性哮喘的发生有一定的相关性,等位基因A是哮喘患病的风险基因,而等位基因C则是哮喘病的保护基因。     

离子交换柱层析法纯化重组人IL—4

用离子交换层析法一步纯化重组人白细胞介素４,该方法简易易行,对样品不产生稀释作用;所得产品具有高纯度（≥９５％）,高生物学活性（≥ＭＵ／ｍｇ）和低毒性（内毒素含量≤０．５ＺＵ／Ｌ）的特点,可满足实验室工作的需要,当与凝胶过滤法结合使用时,所得产品纯度可达９８％,生物学活性进一步提高。     

反义c—fos和c—jun抑制IL—1诱导阿片肽分泌

白细胞介素（ＩＬ－１）及阿片肽作为神经调质参与了神经细胞兴奋性毒性作用,以大鼠大脑皮层神经细胞为研究对象,探讨了ＩＬ－１、阿片肽和ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达产物之间的关系,结果表明,ＩＬ－１β能诱导大脑皮层神经细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍＲＮＡ瞬时短暂表达,１５ｍｉｎ增高,３０ｍｉｎ达高峰,ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ ２ｈ回至基线水平,ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ ８ｈ回至基线水平;联合应用ｃ－ｆｏｓ,ｃ－