我国D2-43病毒株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性(英文)

观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA ,然后以不同剂量通过肌肉多点注射途径免疫Balb c鼠 ,获得的鼠血清可与登革D2 4 3感染的C6 36抗原片起特异的抗原抗体反应 .结果表明 ,含登革 2型病毒PrM E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb c鼠中可诱导登革 2型病毒特异抗体的产生 ,但抗体水平较低 .     

登革病毒感染的免疫与免疫病理的研究进展

登革病毒感染是世界上热带与亚热带地区一个严重的公众卫生健康问题,本文综述了登革病毒感染后机体免疫的改变,并从抗体、Ｔ细胞激活及细胞因子过量释放方面探讨了登革出血热（ＤＨＦ）／登革休克综合征（ＤＳＳ）的发病机理。     

抗登革病毒NS1单抗的制备及检测NS1方法的建立

制备抗登革病毒NS1蛋白单克隆抗体,建立检测NS1的ELISA方法。表达1~4型登革病毒NS1蛋白,将1型NS1蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。经ELISA、Western blotting、间接免疫荧光筛选和鉴定单克隆抗体,进行纯化和HRP标记。通过鉴定每两株单抗之间是否存在竞争作用,选择非竞争单抗组合并建立NS1捕获法ELISA。结果获得7株高滴度抗NS1单抗,捕获法ELISA可以检出10ng/mL NS1。原核表达登革病毒NS1蛋白制备的单抗可以和天然病毒抗原反应,NS1捕获法ELISA可以用于登革病毒感染检测。     

登革病毒感染后ECV304细胞骨架actin变化的研究

登革病毒属于黄病毒属 ,它以蚊虫为传播媒介 ,引起登革热 (DF)或死亡率较高的登革出血热 (DHF)。DHF主要特点是血管通透性增加引起血浆渗漏 ,继发休克。DHF发生机理尚不明了。临床研究提示 :登革病毒感染后 ,血管内皮细胞 (VEC)无明显器质性变化 ,推测血管渗透性增加可能与VEC功能失调有关。由于细胞骨架系统与VEC功能及微血管的完整性密切相关 ,所以实验以血管内皮细胞株ECV30 4为细胞模型 ,研究登革病毒感染与细胞骨架微丝变化的关系 ;并通过药物干扰微丝的聚合与解聚 ,探讨微丝在DHF发病过程中的可能作用。实验用 2型登革病毒…     

PCR-RFLP技术用于中国登革2型病毒株基因型快速分型

利用RT-PCR的方法,对中国5株登革2型病毒的prM-E基因进行扩增,选择合适的限制性内切酶将扩增产物特异地切割成若干长度不同的片段,经5％聚丙烯酰胺凝胶电泳后,对获得的银染带型进行分析。结果表明FJ-10株和FJ-11株属同一基因型,D2-43株和D2-44株属同一基因型,D2-04株与上述4株基因型不同,这与核苷酸测序分析结果完全一致。在此基础上建立PCR-RFLP技术用于登革2型病毒基因型快速分型,具有省时、操作简单、不需使用同位素等特点,为登革热疫区实验室和临床诊断提供了一种快速有效的分子生物学方法。     

登革病毒2型E蛋白基因真核表达和DNA免疫的研究

将编码登革病毒2型(DV2)氨基末端80％的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2 AG强启动子下游,构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCXN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律,结果显示三次免疫后2周已有抗体产生,15周时仍维持较高的水平;血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1:640;流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4~+、CD8~+T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比,CD4~+淋巴细胞水平略有上升。CD8~+细胞水平有较大升高(p<0.01);动物保护性实验结果显示,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时,其保护率为60％。以上结果表明:pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答,尤其是MHC-I限制性杀伤性CD8~+T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此,DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。     

登革四价疫苗研究进展

登革病毒感染引起的登革热和登革出血热是重要的蚊媒病毒病。近20年来,在全球范围内登革出血热的发病率和病死率急剧上升,但目前仍缺乏安全有效的疫苗。着重介绍目前已经或正在进入临床研究阶段的四价登革减毒活疫苗,以及灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗和DNA疫苗的研究进展。     

登革病毒3'UTRΔ30系列疫苗的研究进展

登革病毒引发的登革热等疾病每年在全球范围内造成了相当大的经济、医疗、社会负担,严重威胁到人类生命健康。在目前研究的各种登革病毒疫苗中,采用反向遗传技术制得的3'UTRΔ30系列减毒活疫苗由于其免疫原性好,效价高,成本低等特点,在临床试验中展现出良好保护作用,研究推进快。能对四种血清型登革病毒都产生均衡免疫保护的3'UTRΔ30四联疫苗已处于III期临床试验阶段,效力强,不良反应少,待随访期结束后有望上市,是当今最有前景的登革减毒灭活疫苗之一。为更深入了解3'UTRΔ30系列疫苗,现主要从起源、制备方法、临床研究等方面进行介绍。     

PTEN 通过下调自噬活性抑制登革病毒2型感染

为探讨PTEN、细胞自噬与登革病毒2型（DENV-2）感染之间的关系及可能机制,本研究将DENV-2以不同感染复数（MOI）和不同持续时间感染人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,蛋白免疫印迹法检测PTEN表达及指示细胞自噬的LC3型别转换情况;进一步构建pLenti-PTEN和pLenti-shPTEN表达质粒,包装成慢病毒,感染 HUVEC以建立稳定表达细胞系,并检测 PTEN过表达及敲低对自噬标记尤其是LC3Ⅱ／LC3Ⅰ比值、DENV-2 capsid蛋白和mRNA水平及子代病毒颗粒感染性的影响。结果显示,PTEN下调可抑制细胞自噬水平,继而降低DENV-2 capsid蛋白表达和子代病毒颗粒释放,提示 DENV-2感染 HUVEC发生的PTEN蛋白表达下调很可能是宿主细胞本身的一种针对DENV-2感染的保护性反应。