抗癌胚抗原免疫毒素生物学功能的研究

为了研究免疫毒素发挥生物学作用的全过程,构建了两种不同形式的基于假单胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin A,PE)的抗癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）免疫毒素CEA(Fv)/PE38/KDEL和PE35/CEA(Fv)/KDEL.用流式细胞术经间接免疫荧光法测定免疫毒素的抗原结合活性.免疫毒素的内化(internalization)通过间接免疫荧光标记的方法在激光共聚焦显微镜下进行检测,采用流式细胞术进行免疫毒素内化的定量分析.细胞凋亡采用FITC-annexin V/PI双荧光染色方法进行分析.用噻唑蓝(MTT)法测定免疫毒素的靶细胞杀伤功能.对两种形式的免疫毒素在各个功能阶段的性质进行研究和比较,全面展现了免疫毒素发挥生物学功能的过程及各个生物作用过程之间的相互影响,为详尽的机制研究和免疫毒素的进一步优化改造提供了重要的依据.     

超声联合CEA和CA15-3检测对乳腺癌的诊断价值

目的:研究彩色多普勒超声联合癌胚抗原(CEA)和糖链抗原15-3(CA15-3)检测在乳腺癌诊断中的价值。方法:选取我院2010年2月~2011年1月的98例乳腺肿块患者,患者均行彩色多普勒超声检查,采用化学发光免疫法检测血清CEA、CA-153水平,并结合常规活检和术后诊断进行统计学分析。对比三者联合检测与单一检测的敏感性、准确性。结果:彩色多普勒超声、血清CEA、CA15-3检查及三者联合检查诊断乳腺癌的敏感性、准确性分别为86.11%、30.56%、47.22%、97.22%和88.78%、73.47%、77.55%、94.90%,联合检查的准确性、敏感性高于单一检查,差异有统计学意义(P0.05)。结论:彩色多普勒超声检测方法联合CEA、CA15-3检查可提升乳腺癌诊断的准确性和敏感性,降低漏诊率。     

超声造影技术联合血清CA12-5、CEA、HE-4检查诊断卵巢良恶性肿瘤的临床价值研究

摘要 目的：研究超声造影技术联合血清糖类抗原125（CA12-5）、癌胚抗原（CEA）及人附睾分泌蛋白4（HE-4）检查诊断卵巢良恶性肿瘤的临床价值。方法：将我院从2019年1月～2020年3月收治的83例卵巢肿瘤患者纳入研究。将其按照病理学诊断结果分成恶性组40例与良性组43例,按照是否发生淋巴结转移将恶性组分为转移亚组18例和未转移亚组22例。比较恶性组和良性组各项超声造影指标水平和血清CA12-5、CEA及HE-4水平,比较转移亚组和未转移亚组血清CA12-5、CEA及HE-4水平。通过受试者工作特征（ROC）曲线分析超声造影技术联合血清CA12-5、CEA及HE-4在卵巢良恶性肿瘤中的诊断能效。分析血清CA12-5、CEA及HE-4与卵巢恶性肿瘤患者淋巴结转移的关系。结果：恶性组超声造影增强强度及增强速率均高于良性组,而增强时间短于良性组（P＜0.05）。恶性组血清CA12-5、CEA及HE-4水平均高于良性组（P＜0.05）。超声造影技术联合血清CA12-5、CEA及HE-4诊断卵巢肿瘤良恶性的曲线下面积、灵敏度及特异度分别为0.947、0.96、0.93,高于超声造影技术单独检测或血清CA12-5、CEA及HE-4联合检测。转移亚组患者的血清CA12-5、CEA及HE-4水平均高于未转移亚组患者（P＜0.05）。结论：超声造影技术联合血清CA12-5、CEA及HE-4检查诊断卵巢良恶性肿瘤的价值较高,且联合检测血清CA12-5、CEA及HE-4水平有助于判断淋巴结转移情况,具有较高的临床应用价值。     

Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达

将Ｍｎ－ＳＯＤ与抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因（Ｓｃ－Ｆｖ ｇｅｎｅ）融合,重组到含Ｔ７启动子的表达载体ｐＥＴ－２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＭｎ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,进行高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的２４％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质和迹图谱显示表达物分子量为４５ｋＤ与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为泌型表达有利于纯化。ＲＩＡ测定表     

麻疹病毒沪191-CEA单抗交联物的制备和靶向感染性的初步研究

目的 制备MV191-CEA单抗交联物并评估其对CEA阳性细胞的杀伤作用.方法 通过化学交联剂N-羟基琥珀酰亚胺-间(N-马来酰亚胺基)苯甲酸酯(MBS)、N-琥珀酰亚胺3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)和戊二醛三种方法将抗癌胚抗原(CEA)单抗和麻疹病毒沪191(MV191)交联制备MV191-CEA单抗交联物并研究其感染性.结果 与MV191对照相比,MBS、SPDP、戊二醛交联后,病毒感染性有所下降,分别为59.8％、33.3％和71.5％,但MV191-CEA单抗交联物可感染MV191所不能感染的CEA阳性细胞SW480、A549和LoVo,其中LoVo细胞最敏感,且细胞裂解液中病毒滴度与CEA表达量有相关性,MV191-CEA单抗交联物不能在CEA阴性细胞MRC-5、HL和MCF-7细胞中增殖.结论 MV191-CEA单抗交联物成功地实现了感染性靶向转导.     

癌胚抗原(CEA)启动子在肿瘤细胞中的特异表达及介异bak基因诱发凋亡

构建由癌胚抗原 (CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)表达的重组表达质粒pCEA EGFP .用转染细胞后检测荧光的方法对CEA阳性细胞进行简便、直观的检测 ,并结合流式细胞计数对CEA启动子在人结直肠腺癌细胞LS 1 74T、结肠癌细胞SW 4 80、肺腺癌细胞A5 49、人宫颈癌细胞HeLa和人喉癌细胞HEp 2中的活性进行了分析 ,发现其在SW4 80、LS 1 74T、A5 49中活性较强 ,而在HeLa和HEp 2中无活性 .构建由CEA启动子控制凋亡基因bak表达的重组表达质粒pCEA bak ,转染HeLa及SW 4 80细胞 ,用Hoechst332 5 8染色及PI染色 流式细胞计数分析的方法证明 ,pCEA bak转染能够特异性引起SW 4 80细胞的凋亡 .结果表明 ,CEA启动子具有很好的特异性 ,CEA介导bak基因的方法可望用于CEA阳性癌细胞的靶向性基因治疗 .     

四磨汤对宫颈癌化疗患者胃肠功能的保护作用及对血清IL-8、CEA、CA125水平的影响

目的:研究四磨汤对恩度联合力朴素治疗的宫颈癌患者胃肠功能的保护作用及对其血清白细胞介素8(IL-8)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)的影响。方法:选取2015年9月至2016年8月我院收治的88例宫颈癌患者,根据患者入院顺序分为观察组和对照组,每组44例。对照组在放疗基础上加以恩度联合力朴素完成化疗,观察组在对照组治疗基础上加以四磨汤。比较两组患者治疗前后血清IL-8、CEA、CA125水平及外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞比例的变化和胃肠道毒副反应、胃肠道放射性损伤的发生情况。结果:治疗后,两组患者血清IL-8、CEA、CA125水平均较治疗前显著降低(P0.05),且观察组的血清IL-8、CEA、CA125水平较对照组明显降低(P0.05);两组患者CD3~+、CD4~+细胞比例较治疗前显著降低(P0.05),CD8~+细胞比例较治疗前显著升高(P0.05),但观察组的CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞比例细胞比例显著高于对照组(P0.05)。观察组不良反应发生率、早期胃肠道放射性损伤发生率、Ⅱ、Ⅲ级胃肠道放射性损伤率均显著低于对照组(P0.05)。结论:四磨汤用于恩度联合力朴素治疗的宫颈癌患者能有效保护患者胃肠功能,降低患者血清IL-8、CEA、CA125水平,增强患者免疫力。     

艾迪注射液联合化疗对卵巢癌患者血清HE4，CA125，CA19-9，AFP，CEA水平及T细胞亚群的影响

目的:探讨艾迪注射液联合化疗对卵巢癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原19-9(CA19-9)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)及T细胞亚群的影响。方法:选取我院2014年8月至2016年2月收治的78例卵巢癌患者,按照随机数表法将其分为观察组(n=39)和对照组(n=39),对照组患者给予化疗,观察组患者给予艾迪注射液联合化疗,比较两组患者的临床疗效、治疗前后血清HE4、CA125、CA19-9、AFP、CEA水平及T细胞亚群的变化。结果:治疗后,观察组的总有效率(94.87%)显著高于对照组(76.92%)(P0.05)。治疗后,两组患者血清HE4、CA125、CA19-9、AFP、CEA水平均较治疗前明显下降,且观察组显著低于对照组(P0.05)。治疗后,两组患者CD3~+、CD4~+、CD8~+较治疗前均显著降低,且观察组患者CD3~+、CD4~+、CD8~+低于对照组(P0.05)。结论:艾迪注射液联合化疗对卵巢癌治疗效果显著,能有效降低血清HE4、CA125、CA19-9、AFP、CEA水平并改善患者免疫功能。     

ROMA在卵巢上皮性癌早期诊断中的研究进展

卵巢上皮性癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)死亡率居妇科恶性肿瘤首位,早期诊断可明显改善患者预后。人附睾上皮分泌蛋白(human epididymis protein 4,HE4)对早期EOC的检测敏感性高,有助于对EOC高危患者的筛选,与CA125可互补,增加盆腔包块患者中EOC早期诊断力度。HE4与CA125联合检测及结合绝经状态预测盆腔包块患者中卵巢恶性肿瘤的发病风险模型(Risk of Ovarian Malignancy Algorithm,ROMA),能成功预测盆腔包块患者中EOC高风险个体,对卵巢良恶性肿瘤的鉴别预测更为准确且更易被接受,有较大的临床应用价值。     

抗癌胚抗原单链抗体基因的构建及高效表达

采用重组ＰＣＲ技术将已获得的抗癌胚抗原鼠源单克隆抗体Ｅ７Ｂ１０重,轻链可变区基因经（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）３编码的寡核苷酸拼接成单链抗体基因,并在大肠杆菌中高效表达了单链抗体Ｃ端的融合蛋白,其表达量达到菌体总蛋白的２０％,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹图谱显示表达产物分子量为２７ｋＤ,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。