GOLPH2的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用

目前发现GOLPH2蛋白与肝癌密切相关,将golph2基因进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到golph2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-TRX内、转化大肠杆菌DH5a,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白GOLPH2,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中GOLPH2蛋白水平.成功地构建了表达TRX-GOLPH2融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-TRX-GOLPH2.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以可溶性的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组GOLPH2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白、73 kD细胞裂解液和血清蛋白质.成功制备了GOLPH2蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.     

新标准“注射用克痛宁”临床应用镇痛效果观察

目的　评估按国家药品生物制品检定所修订的国家标准生产的“注射用克痛宁” (电泳纯和免疫纯 )的临床应用效果及毒副作用。方法　各种中、重度急慢性疼痛患者 92例 ,肌肉注射给药 ,70 μg/次 ,70～ 1 40 μg/天。慢性疼痛病例一般按疗程用药 ,每疗程 5天 ,急性疼痛病例及部分慢性疼痛病例疼痛消失即停药。以病人曾用过的镇痛药疗效作为历史对照。结果　总有效率 96 .7% ,总显效率 82 .6 % ,首支总有效率 93.5 %。对癌痛组的首支有效率稍低 ,为 84 .2 %。一般在肌注后 30～ 6 0 min起效 ;对急性疼痛疗效可持续 6～ 1 0 h,对慢性疼痛大多可持续 1 2 h或 2 4 h以上。对阿片类药物成瘾患者也有良好效果。少数病人出现轻度口干、恶心、头晕等不良反应。结论　新标准“注射用克痛宁”对各种急慢性疼痛均有良好的镇痛效果 ,起效快、镇痛作用强而持久、不成瘾、毒副作用小 ,且具有潜在的戒毒作用。优于原地方标准的“克痛宁”。     

肾细胞癌DNA甲基化标记检测的重复性及其与基因表达改变的相关性

DNA甲基化是影响基因表达的重要因素之一。DNA甲基化芯片已广泛应用于寻找癌症的标志物,但是目前还没有研究对这些标志物的重复性进行评价。另外,DNA甲基化对基因表达的影响也存在争议。在本文中,通过分析肾细胞癌的两套甲基化数据,发现它们的差异甲基化基因的方向高度的一致,证明通过甲基化芯片获得的甲基化标记有很高的重复性。进一步分析甲基化基因对应的表达改变,发现肾细胞癌中高甲基化的基因显著影响表达下调,而低甲基化的基因与表达改变无显著关系。最后,通过功能分析,找到了三个同时发生甲基化和表达改变的通路。针对这些通路研究DNA甲基化抑制剂,可能有助于肾细胞癌的靶向治疗。     

改良CCI 大鼠痛行为学检测与损伤区自发放电活动再观察

目的:应用改良CCI模型研究外周神经损伤后痛觉过敏和自发放电各自特征及相互关系.方法:雄性SD大鼠,随机分为CCI组和Sham组,分别于术前1天和术后1、4、7、9、11、14天测定机械刺激缩足反射阈值和热缩腿反射潜伏期,同时选取术侧机械刺激缩腿反射阈值低于4g或者术侧和健侧热缩腿反射潜伏期差异大于2s的CCI模型大鼠观察术后4-14天损伤区自发放电活动.结果:神经纤维损伤后,机械痛敏和热痛敏随时间表现为逐渐增强,同时在损伤区观察到三类放电模式:整数倍放电阵发放电和周期放电.结论:术后大鼠机械痛阈和热痛阈逐渐降低,机械痛敏的产生和损伤区自发放电活动关系密切,不同的放电模式可能代表不同的传入信息.     

影响口腔鳞状细胞癌患者预后的临床病理因素分析

目的:研究影响口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cellcar cinoma,OSCC)术后患者预后的临床病理因素。方法:回顾性研究55例手术治疗的原发口腔鳞状细胞癌患者与预后相关的因素:年龄、性别、发病部位、颈部淋巴结转移情况、肿瘤细胞分化程度等。结果:平均发病年龄为57.35±12.02岁,牙龈鳞癌的复发转移率最高(45.5%),舌部第二(44%),颊部第三(37.5%),唇癌预后最好(0.0%)。术前颈部淋巴结转移情况、肿瘤细胞分化程度与预后有关。肿瘤细胞的分化程度与术前淋巴结转移无显著相关性。术前有颈部淋巴结转移合并中低分化与预后差相关。结论:口腔鳞状细胞癌的预后与发病部位无显著相关性。肿瘤中低分化及术前有淋巴结转移者易出现术后复发转移。     

直接注射法制作ICR 小鼠肝癌原位移植瘤模型

目的:培养鼠肝癌H22细胞,直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤,为后续实验奠定基础。方法:鼠肝癌H22细胞体外培养,将调整好的对数生长期的肝癌细胞直接注射小鼠肝脏,2周后解剖观察,并进行组织HE染色。结果:所有实验小鼠均可见肿瘤生长,HE染色示肝细胞肝癌。结论:直接注射法制作ICR小鼠肝癌原位移植瘤模型简便易行,值得推广应用。     

电针不同穴位对慢性炎症痛模型大鼠心理行为改变的实验观察

目的:观察电针不同穴位对慢性炎症痛模型大鼠行为学改变的影响,进一步探讨电针对慢性痛所致心理行为改变的调节规律。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针百会组、电针关元组、电针足三里组,每组各8只。除正常组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂(CFA)制备佐剂性关节炎(AA,即慢性炎症痛)大鼠模型,于造模第2天各治疗组捆绑固定后给予电针20 min,正常组及模型组捆绑束缚20 min,隔日一次,共10次。于造模前、造模后、治疗5次、10次分别采用高架十字迷宫检测各组大鼠开放臂进入次数比例(OE%)及开放臂停留时间比例(OT%)的变化。结果:与造模前比较,电针百会穴组大鼠造模后OE%和OT%明显减少(P<0.05,P<0.05),且治疗5次后OT%、治疗10次后OE%与OT%均降低明显(P<0.01,P<0.01,P<0.05),而电针关元组大鼠治疗10次后OE%和OT%则明显升高(P<0.05,P<0.05),电针足三里组大鼠造模后OT%、治疗5次后大鼠OE%与OT%、治疗10次后OT%均明显降低(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.05);与造模刚结束比较,电针百会组大鼠在治疗5次、10次后OE%由升高逐步降低,而OT%由低逐渐升高(P>0.05),电针关元组模型大鼠治疗10次后模型大鼠OE%和OT%均明显升高(P<0.05,P<0.05),电针足三里组模型大鼠治疗10次后OT%升高明显(P<0.05);与治疗5次后比较,电针百会组大鼠在治疗10次后OE%降低、OT%升高(P>0.05),电针关元组与电针足三里组大鼠治疗10次后OE%和OT%均明显升高(P<0.05,P<0.05;P<0.01,P<0.01)。与电针百会组比较,电针关元组与电针足三里组大鼠在治疗10次时OE%均明显升高(P<0.01,P<0.01)。结论:电针不同穴位具有一定抗抑郁和抗焦虑作用,可改善慢性炎症痛所致大鼠焦虑、情绪行为的变化;不同穴位效应不同,关元穴与足三里穴具有综合调节、抗焦虑效应,且具有相对特异性。     

PNAS：Y染色体或可助防止睾丸癌恶化

日本东京大学的研究人员在11月2日的美国《国家科学院院刊》网络版上发表研究成果说。男Y染色体上基因编码合成的一种蛋白质在睾丸细胞增殖过程中起到了”刹车”的作用,这种蛋白质或可延缓皋丸癌恶化进程。     

脊髓IL-6在脊神经结扎模型所引起的热痛敏中的作用

目的：研究脊髓中IL-6在大鼠脊神经结扎（spinal nerve ligation,SNL）所引起的神经病理性痛中的作用。方法：建立大鼠SNL模型,以ELISA法检测脊髓IL-6含量。鞘内分别给予外源性IL-6,以及IL-6的中和抗体以拮抗内源性的IL-6,观察大鼠对热刺激的缩足反应潜伏期（paw withdrawal latencies,PWL）。结果：①SNL手术后3天和7天,脊髓IL-6水平明显上调（P〈0.05）。②手术7天后给予外源性IL-6不能明显引起假手术组的PWL变化,但是与给予生理盐水的假手术组和SNL组相比,给予IL-6的SNL组PWL明显下降（P〈0.05）。③手术7天后给予IL-6的中和抗体不能引起假手术组的PWL改变,但是与给予生理盐水的SNL组相比,给予中和抗体的SNL组PWL明显上升（P〈0.05）。结论：IL-6在脊神经结扎模型所引起的神经病理性痛中发挥促伤害性作用     

鞘内联合给予米诺环素和IL-6的中和抗体对脊神经结扎模型所引起的热痛敏的镇痛作用

目的:研究鞘内联合给予米诺环素和IL-6的中和抗体在大鼠脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)模型所引起的神经病理性痛中的镇痛作用。方法:建立大鼠SNL模型,分别在手术前和手术后鞘内给予米诺环素100μg、在手术后鞘内给予IL-6的中和抗体0.03μg、手术后鞘内联合给予两种药物,观察给药3天各组大鼠热刺激的缩足反应潜伏期(paw withdrawal latencies,PWL)。结果:①SNL手术前后给予米诺环素都可以提高大鼠的PWL(P<0.05),但SNL手术前给药对大鼠PWL的提升明显高于手术后给药(P<0.05)。②手术后给予IL-6的中和抗体可以有效提升SNL组的PWL(P<0.05),但是还是比给予生理盐水的假手术组大鼠的PWL明显减少(P<0.05)。③手术后联合给予两种药物可以明显逆转SNL组的PWL(P<0.05)。④联合给药对大鼠PWL的提高明显高于SNL手术后给予米诺环素组和给予IL-6的中和抗体组(P<0.05),但与手术前给予米诺环素组的PWL相比无明显差异(P>0.05)。结论:鞘内联合给予米诺环素和IL-6的中和抗体对SNL引起的神经病理性痛有明显的镇痛作用。