一种新的具有多肽性质的β-肾上腺素能受体激动剂

从蚯蚓中分离出一种能增强离体豚鼠心耳收缩作用的物质。用分子筛层析,阴离子交换层析及高效液相色谱法进行了纯化,进一步分析表明,它是分子量约为30,000daltons的多肽(称为蚯这多肽制剂),可被肾上腺素能受体阻断剂——心得安对抗,能竞争性抑制~3H标记心得舒与大鼠心肌膜制剂内β-肾上腺素能受体的结合,为一种新的β-肾上腺素能受体激动剂。     

胶孢炭疽菌的菟丝子专化型

本文报道对寄生菟丝子的两个炭疽菌(Colletotrichum Corda)分离系(鲁保一号New-76)的鉴定结果。两分离系按其培养特性、分生孢子和附着孢的形态、大小及产孢细胞、分生孢子盘的特点,应属于胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.],但在对寄主的选择性方面不同于该种的其他分离系,特别是对菟丝子(Cussuta chinensis)具有寄生专化性,故确定为胶孢炭疽菌菟丝子专化型[C.gloeosporioides(Penz.)Sacc.f.sp.cuseutae]。     

小鼠胃 Cajal 间质细胞分离与培养实验方法探讨

目的:尝试优化体外培养Balb/c小鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的实验方法,为深入探索该细胞的生理病理作用机制提供基础。方法:无菌条件下取出小鼠胃组织,使用酶解法消化分离细胞,将细胞悬液接种于含有SCF(干细胞因子)的M199培养基中培养,并进行传代。倒置显微镜下观察不同时间段细胞生长状态,采用ICC特异性标志物c-Kit(酪氨酸激酶受体)进行免疫荧光鉴定。结果:细胞培养24 h后基本已贴壁,呈梭形或三角形,有短突起;72 h后细胞胞体变大,突起伸长;5 d后,细胞之间通过突起彼此相互连接,开始形成网状结构;传代后细胞依然保持其固有特征。免疫荧光鉴定可见细胞c-Kit抗体荧光染色阳性。结论:使用酶解法成功分离细胞,细胞数量较多但不增殖,传代后可见细胞纯度较好,稳定培养3周以上后细胞形态逐渐发生变化并开始凋亡。     

小鼠急慢性结肠炎模型的建立及结肠上皮组织分离方法的探讨

目的:采用葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导小鼠急慢性结肠炎模型,并探讨小鼠结肠上皮组织分离技术的可行性。方法:将40只8周龄C57小鼠随机分为急性和慢性结肠炎模型DSS组和急慢和性结肠炎对照组,每组10只小鼠。急性结肠炎模型:给予C57小鼠3%DSS自由饮水7天,蒸馏水3天;慢性结肠炎模型:给予C57小鼠2.5%DSS水5天,换蒸馏水自由饮水7天,再给予2.5%DSS水5天后换蒸馏水水7天,重复3个循环,共36天,对照组蒸馏水自由饮水。期间每天观察并记录小鼠体重、便隐血、大便性状并评分。造模完成后对结肠组织行苏木素-伊红(HE)染色评价有无组织学炎性损伤。小鼠肠上皮分离采用运用机械涡旋的方法。结果:与对照组相比,小鼠急性结肠炎模型小鼠体重减轻明显(P0.001)、便隐血阳性、大便性状发生改变,结肠长度明显缩短(P0.01)。小鼠慢性结肠炎模型小鼠体重随着DSS和蒸馏水的交替出现下降和上升的变化趋势,HE染色提示急性和慢性小鼠结肠炎模型结肠上皮发生急性和慢性的炎症伤;分离得到的肠上皮组织样本提取总蛋白证实蛋白未发生降解,Actin和GAPDH内参条带清晰。结论:小鼠急性和慢性结肠炎模型的建立成功,本实验采用的小鼠结肠上皮分离方法稳定可行。     

食管癌根治术后肺部感染的病原菌与耐药性分析

目的:探讨食管癌根治术后肺部感染的病原菌及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法:选择2009年1月-2017年12月在我院行食管癌根治术的764例患者作为研究对象,记录患者临床基本资料,采集肺部感染患者深部痰液标本进行细菌培养,并对病原菌进行药物敏感性试验,分析其病原菌分布和耐药性。结果:764例食管癌根治术后患者肺部感染146例,感染率为19.11%;肺部感染患者痰液标本培养获得病原菌185株,其中革兰阴性菌116株,占62.70%,以铜绿假单胞菌和肺炎链球菌最多,分别占18.38%和14.05%;革兰阳性菌40株,占21.62%,以金黄色葡萄球菌最多,占8.65%;真菌29株,占15.68%,以白假丝酵母菌最多,占9.19%。铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、鲍氏不动杆菌、大肠埃希菌对美洛西林的耐药率最高,分别占70.59%、73.08%、86.96%、62.50%,对亚胺培南耐药率最低,分别占5.88%、3.85%、26.09%、12.50%。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌对头孢唑林的耐药率最高,分别占81.25%、63.64%,溶血葡萄球菌对头孢唑林、阿奇霉素、环丙沙星的耐药率最高,均占71.43%,肠球菌对头孢唑林、环丙沙星耐药率最高,均占100.00%;黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肠球菌对万古霉素耐药率最低,均为0.00%。结论:食管癌根治术后肺部感染以革兰阴性菌为主,病原菌主要对美洛西林、头孢唑林、阿奇霉素、环丙沙星产生耐药性,对亚胺培南、万古霉素耐药性较低,临床应合理选用抗菌药物进行治疗。     

昆虫肠道微生物分离培养策略及研究进展

昆虫肠道作为一种特殊生境,生存着多种多样的共生微生物,并且肠道内的很多微生物与自然界其他生境的微生物种类显著不同。基于对纯培养微生物的研究,科学家们发现,肠道微生物与昆虫营养、生长发育及免疫等功能密切相关。因此,分离培养是发现微生物新种类、新基因和新功能的基础。然而,自然界可培养的微生物大约只占总数的1%。为了能够对更多的微生物进行分离和培养,近二十年来,微生物学家们发展了诸多新的培养技术和策略并利用它们从昆虫肠道分离出了很多新的难培养微生物。这些新的微生物种类极大地丰富了我们对肠道共生微生物生理作用与功能的认识。以此为基础,本文综述了昆虫肠道微生物分离培养的策略及研究进展,并对未来该领域的发展进行了展望。     

猪丁型冠状病毒HB-BD株的分离与鉴定

猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新的引起仔猪腹泻的冠状病毒,目前国内对PDCoV分离的研究较少。为从腹泻仔猪粪便及肠道内容物中分离鉴定PDCoV,本研究将RT-PCR检测为PDCoV病原阳性的腹泻样本,接种到ST细胞,进行病毒的分离传代。通过观察其细胞病变,RT-PCR和间接免疫荧光方法检测鉴定,并对分离株的S、M、N基因进行测序鉴定及序列分析。结果成功分离得到了PDCoV HB-BD株。经序列同源性分析发现,HB-BD分离株S、M和N基因与近年来国内外的流行毒株同源性很高,核苷酸同源性分别为95.8%～99.1%、98.6%～99.4%和97.8%～99.4%。进化树分析表明HB-BD分离株与中国毒株亲缘关系比其他国家近,处于同一分支。结果证实从腹泻仔猪的肠道内容物中分离并鉴定得到了一株猪丁型冠状病毒,本研究为后续分离株的致病性及生物学特性研究奠定了基础。     

开颅术后颅内感染的病原菌分布特征及耐药性分析

目的分析行开颅手术患者术后颅内感染的病原菌分布及耐药性。方法回顾性分析2013年6月-2017年6月在我院神经外科行开颅手术的328例患者临床资料,统计术后颅内感染发生率,并对颅内感染患者的脑脊液进行病原学分析。结果开颅术后颅内感染的发生率为9.15%(30/328);30例颅内感染脑脊液标本中共分离出47株病原菌,其中革兰阳性菌占65.96%(31/47),革兰阴性菌占34.04%(16/47);革兰阳性菌对青霉素、红霉素完全耐药,对万古霉素敏感;对苯唑西林的耐药率达90%以上,对磺胺甲恶唑/甲氨苄啶的耐药率为70%~85%,对利福平的耐药率为50%~65%,对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率均在50%以下。革兰阴性菌对环丙沙星、氨曲南完全耐药,对亚胺培南敏感;对阿米卡星、头孢他啶的耐药率达80%以上,对头孢吡肟的耐药率为60%~75%,对头孢曲松、妥布霉素及庆大霉素的耐药率均在60%以下;其中肺炎克雷伯菌对美罗培南敏感,而鲍曼不动杆菌对美罗培南仍有耐药性,耐药率为16.67%。结论开颅术后颅内感染的病原菌以革兰阳性菌为主,并具有多重耐药特点,临床上应加强颅内感染的病原菌监测,同时结合药敏分析结果,合理使用抗菌药物。     

多频次腹透相关性腹膜炎的临床特点及菌谱分析

目的探讨多频次腹透相关性腹膜炎的临床特点、病原分布及耐药情况。方法回顾性分析2013年1月-2017年7月间因腹透相关性腹膜炎入院的腹膜透析患者,入院次数≥2者列为多频次组,仅1次入院者列为单次组。结果多频次组23例,发生腹膜炎54例次,单次组18例,发生腹膜炎18例次。两组间性别、腹透龄、血压、血肌酐、血尿素氮、血钾、血钙、血磷及病原分布差异无统计学意义(P0.05)。与单次组相比,多频次组患者的年龄普遍较大、原发病多为糖尿病肾病,而血红蛋白及血清白蛋白水平偏低(P0.05)。主要致病菌为革兰阴性菌,以大肠埃希菌居多,对氨曲南、头孢唑啉、头孢曲松的耐药率最高,对哌拉西林/他唑巴坦及亚胺培南敏感;革兰阳性菌以表皮葡萄球菌为主,对氨苄青霉素、苯唑西林及克林霉素耐药,对万古霉素和莫西沙星敏感。结论腹透相关性腹膜炎的反复出现与患者年龄大、有糖尿病、贫血及低白蛋白血症病史相关。     

杂色曲霉素的分离,纯化及鉴定

将两株杂色曲霉菌分别接种于4kg玉米豆粉固体产毒培养基,28℃静置培养35d。以甲醇-4％ KC1(9:1)混合液及甲醇-三氯甲烷混合液浸提杂色曲霉素(sterigmatocy stin,简称ST),再用三氯甲烷萃取,经硅胶柱层析法初步纯化。在甲醇、乙腈、乙醚、丙酮等溶剂中多次重结晶,最后得到2271.6mg淡黄色针状结晶。经过熔点测定、元素分析、四种光谱学鉴定、薄层层析及高效液相色谱鉴定,确认该晶体为ST。纯度在99.9％以上。