用硫氰酸盐洗脱法直接测定噬菌体抗体的相对亲和力

抗体与相应抗原的结合可以被硫氰酸盐洗脱而解离,抗体的亲和力越高则解离所需要的硫氰酸盐浓度就越大,这一原理在传统的免疫学实验中被用来测定单克隆抗体或多克隆抗体的相对亲和力。如果证明该原理同样适用于噬菌体抗体库技术,则可以建立一种直接测定噬菌体抗体相对亲和力的简便方法。首先将噬菌体抗体与工作浓度的硫氰酸盐共孵育,以证明这一过程并不影响其后的ELISA反应,然后参照硫氰酸盐洗脱法测定完整抗体分子和Fab段相对亲和力的方法,在ELISA实验中以酶标抗M13为二抗检测了5个单克隆噬菌体抗体的相对亲和力,并与相对应的可溶性Fab段的相对亲和力进行了比较。被测抗体中包括3个克隆的抗角蛋白抗体和2个克隆的抗乙型肝炎表面抗原抗体。结果发现,用硫氰酸盐洗脱法测定5个噬菌体抗体所得到的亲和力排序与测定其相应可溶性Fab段所得结果一致,表明硫氰酸盐洗脱法可作为一种简便快速的方法用来直接测定噬菌体抗体的相对亲和力。     

鹿儿岛被毛孢分生孢子胞外黏液蛋白提取与鉴定

【背景】分生孢子表层黏液在虫生真菌与昆虫的互作中扮演着重要角色。鹿儿岛被毛孢是寄主专一、孢子表面具黏液层的虫生真菌,但其胞外黏液成分尚不清楚。【目的】优化鹿儿岛被毛孢分生孢子黏液蛋白的提取方法,对黏液蛋白组分进行质谱鉴定,探究分生孢子胞外黏液的蛋白成分。【方法】用低浓度还原剂二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)对胞外黏液进行温和洗脱并优化提取条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白提取浓度,用碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色法检测孢子细胞膜选择通透性,通过肽段酶解、LC-MS/MS数据采集及蛋白质比对分析鉴定蛋白质。【结果】鹿儿岛被毛孢分生孢子黏液蛋白的最佳提取条件:孢子浓度为5×107 cells/mL,DTT浓度为2 mmol/L,4℃提取24 h;黏液蛋白提取后不影响孢子细胞膜通透性。提取的黏液蛋白共鉴定到蛋白质77个,蛋白丰度排前10的蛋白多为分泌性小分子蛋白,包括未注释的蛋白、几丁质酶、脂酶或是与昆虫体壁降解相关的...     

一种转移非特异性蛋白带的染色方法

考马斯亮蓝是常用的聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳的染料,利用硝酸纤维素膜(NCF)对染料的吸附作用,将低浓度的考马斯亮蓝(0.025%)染色液直接对NCF上的转移蛋白带进行染色,经实验反复验证.它是一种较好的NCF上转移非特异性蛋白带的染色方法.     

野生鲫鱼和五个金鱼代表品种的肌肉蛋白电泳分析

本工作用琼脂糖等电聚焦（Ａｇａｒｏｓｅ－ＩＥＦ）,ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）以及将两者结合起来的双向电泳技术,对野生鲫鱼和５个金鱼品种的亲缘关系进行了种内分化的比较研究。其结果是：（１）鲫鱼和金鱼各品种的肌肉蛋白的大量组分是相似的,验证了金鱼由野生鲫鱼演化而来的推断;（２）在鲫鱼演化到金鱼的过程中,出现了一些新的蛋白成分,但也有些蛋白组分消失了,并且有从野生鲫鱼经过金鲫鱼这个中     

免疫固定电泳在诊断多发性骨髓瘤中的作用

目的 探讨分析免疫固定电泳在诊断多发性骨髓瘤（MML）中的作用。方法 以2014年10月至2016年10月丽水市人民医院收治的110例需进行免疫固定电泳检测的患者为研究对象,对其进行血清M蛋白和浓缩尿中M蛋白的检测,筛选出两种检测均显阳性的患者,并将检测结果与临床资料相比较,对比血清M蛋白和浓缩尿中M蛋白的检测阳性与多发性骨髓瘤之间的关系。结果 110例需进行免疫固定电泳检测的患者中,经临床资料分析,有34例患者为多发性骨髓瘤。这34例患者血清M蛋白的检测显阳性,临床诊断符合率为100.00%;25例患者浓缩尿中M蛋白的检测显阳性,临床诊断符合率为73.53%。血清检验的临床符合率较尿液检验更好,差异具有统计学意义（P＜0.05）;34例血清M蛋白的检测显阳性的患者中,IgG型21例（61.76%）,IgA型8例（23.53%）,IgM型3例（8.82%）,γ轻链型2例（5.88%）。结论 MML患者采用血清及尿液免疫固定电泳检测,血清M蛋白检测阳性率较浓缩尿中M蛋白的检测阳性率要高,血清及尿液进行的免疫固定电泳检测对MML的诊断、检测及预后判断具有重要的提示作用,临床工作者可以根据电泳图谱对MML进行分型,并制定个体化的治疗方案。     

交替洗脱法筛选高亲和力噬菌体肽

以人胰岛素为靶蛋白从七肽展示库中筛选高亲和力噬菌体肽,在洗脱阶段采用酸性洗脱液和高浓度靶蛋白溶液进行4次交替洗脱,选择性回收高亲和力噬菌体肽。测定滴度计算回收率,ELISA法分别测定噬菌体洗脱液整体亲和力和噬菌体单克隆的结合特性并计算亲合率。洗脱步骤采用4次交替洗脱后,第二轮第4次噬菌体的回收率比第一轮增长了1800倍,高亲和力噬菌体在洗脱液中所占比例也迅速提高,第二轮第4次洗脱液中达75％,在第三轮的各次洗脱液中几乎均达100％。建立了一种快速筛选高亲和力噬菌体肽的方法,改进后的筛选方法能使高亲和力噬菌体肽的筛选工作更为简便且效果显著。     

蓝马鸡,褐马鸡及其杂种蛋白质聚焦电泳观察

本文比较了在笼养情况下,蓝马鸡、褐马鸡及杂种的形态和红细胞内的血红蛋白（Ｈｂ）、乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶（ＬＤＨ和ＭＤＨ）,血浆中的淀粉酶和酯酶（Ａｍｙ和Ｅｓ）的聚焦电泳图谱。结果指出ＬＤＨ、ＭＤＨ和Ｅｓ同工酶在三种鸟之间差别不明显;而Ｈｂ和Ａｍｙ表现出较显著的差异;杂种不管在电泳图谱方面,还是在形态方面都介于蓝马鸡和揭马鸡之间。     

低锌和缺锌对玉米生长发育的影响

以玉米沈单10号为材料,用溶液培养的方法研究了缺锌、低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响,进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大,并对其POD、SOD、CAT同工酶谱及蛋白质表达进行了分析、结果表明：一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重,且地上部分比地下部分更敏感。低锌和缺锌处理时3种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异,尤其在一定量低锌浓度时,有些同工酶的表达增强或被特异性诱导,而另一些酶的合成受阻;低锌和缺锌处理都诱导出了新的蛋白组分,也缺失了部分蛋白组分,且低锌比缺锌时缺失的蛋白组分更多。这些变化可能与玉米生长发育及受害密切相关。     

微小生物细胞的介电研究方法

简要介绍了在交流电场下生物细胞的几种新近发展的研究方法,在描述其各自的特点和原理的同时,对其有效性做出了比较和评价。     

人脑胶质细胞瘤核染色质非组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

用不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了人脑胶质细胞瘤与正常脑细胞核NHCP电泳图谱。从二者的NHCP电泳结果表明,脑胶质细胞瘤增加了一条表观分子量为3万的蛋白区带;表观分子量为1.75万～6.5万的蛋白区带染色明显加深。染色质紫外吸收光谱也有明显差异。总之,脑胶质细胞瘤核NHCP发生质与量的变化。