全文获取类型
收费全文 | 14451篇 |
免费 | 1131篇 |
国内免费 | 5590篇 |
专业分类
21172篇 |
出版年
2024年 | 133篇 |
2023年 | 394篇 |
2022年 | 521篇 |
2021年 | 601篇 |
2020年 | 537篇 |
2019年 | 467篇 |
2018年 | 349篇 |
2017年 | 466篇 |
2016年 | 459篇 |
2015年 | 543篇 |
2014年 | 929篇 |
2013年 | 683篇 |
2012年 | 820篇 |
2011年 | 982篇 |
2010年 | 883篇 |
2009年 | 967篇 |
2008年 | 1252篇 |
2007年 | 890篇 |
2006年 | 867篇 |
2005年 | 875篇 |
2004年 | 874篇 |
2003年 | 804篇 |
2002年 | 748篇 |
2001年 | 663篇 |
2000年 | 506篇 |
1999年 | 505篇 |
1998年 | 378篇 |
1997年 | 373篇 |
1996年 | 396篇 |
1995年 | 340篇 |
1994年 | 357篇 |
1993年 | 283篇 |
1992年 | 265篇 |
1991年 | 256篇 |
1990年 | 197篇 |
1989年 | 212篇 |
1988年 | 72篇 |
1987年 | 67篇 |
1986年 | 44篇 |
1985年 | 103篇 |
1984年 | 39篇 |
1983年 | 18篇 |
1982年 | 20篇 |
1981年 | 22篇 |
1980年 | 1篇 |
1955年 | 1篇 |
1950年 | 10篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 0 毫秒
91.
摘要 目的:构建小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系,观察ASPP2敲低对血管生成的影响。方法:针对小鼠ASPP2基因设计了3个不同的shRNA干扰序列(Y18421,Y18422,Y18423)及1个对照序列(GL427NC2),采用双酶切(Age Ⅰ和EcoR Ⅰ)及质粒连接构建重组质粒,使用菌落PCR和测序比对进行鉴定;使用293T细胞将各重组质粒包装慢病毒并测定滴度;将 shASPP2和对照慢病毒质粒转染H22细胞,采用流式细胞术测定转染效率;采用qRT-PCR、Western Blot法观察shASPP2慢病毒对H22细胞ASPP2的干扰效果;采用CCK8法观察ASPP2敲低对H22细胞增殖的影响;采用Western Blot法观察ASPP2敲低对H22细胞及上清VEGF表达和分泌的影响;采用细胞注射法建立小鼠ASPP2敲低H22细胞皮下移植瘤模型,游标卡尺法观察肿瘤体积大小,采用活体激光共聚焦观察肿瘤血管生成情况,采用Western Blot法观察肿瘤组织VEGF的表达。结果:双酶切、菌落PCR和测序鉴定结果表示各重组质粒构建成功;各重组质粒经慢病毒包装后,测定显示Y18421、Y18422、Y18423和GL427NC2慢病毒质粒的滴度分别为3.40×108 TU/mL、4.08×108 TU/mL、5.49×108 TU/mL和1.7×109 TU/mL;Y18421、Y18422、Y18423及GL427NC2慢病毒质粒转染效率分别为:86.2 %、69.6 %、60.8 %和76.9 %。与GL427NC2 H22细胞相比,Y18421 H22细胞的ASPP2 mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.01,P<0.05);Y18421细胞在培养24,48,72 h后增殖速率显著增加(P<0.0001,P<0.001,P<0.01);Y18421细胞及上清的VEGF表达显著升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。与GL427NC2 细胞移植瘤相比,Y18421细胞移植瘤体积明显增大(P<0.05),总血管长度显著增加(P<0.05),VEGF蛋白的表达明显上调(P<0.05)。结论:小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系构建成功,ASPP2敲低可能通过上调VEGF的表达促进小鼠H22细胞移植瘤血管生成。 相似文献
92.
93.
乳腺癌是全球癌症发病率第一的恶性肿瘤,尽管目前的治疗策略取得了巨大进展,但是乳腺癌的复发、转移与耐药仍然是患者死亡的主要原因.因此,探讨乳腺癌的发病机制,开发新的治疗靶点迫在眉睫.三结构域(tripartite motif,TRIM)家族蛋白在乳腺癌的发生和发展过程中发挥关键作用,通过靶向各自相对应的基因影响乳腺癌细胞... 相似文献
94.
95.
摘要 目的:探讨右美托咪定(DEX)对糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能分子机制。方法:将60只8周龄的SPF级C57BL小鼠高脂喂养6周,第7周通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)45 mg/kg/天,1次/天,连续5天,建立2型糖尿病模型,建模后采用随机数字表法分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂2ME2组(2ME2组)、DEX组、DEX+2ME2组(DM组),每组12只。假手术组仅切开皮肤后缝合,其余四组开胸结扎冠状动脉左前降支,缺血60 min后松开结扎线结,再灌注120 min建立缺血再灌注损伤模型。于再灌注120 min时抽取小鼠腹主动脉血,ELISA检测血清肌钙蛋白I(cTnI)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,随后处死小鼠,分离左心室,HE染色观察心肌组织形态结构,Western blot检测HIF-1α、nod样受体蛋白3(NLRP3)的表达量,再灌注24 h时超声心动图评估心功能。结果:与sham组相比,I/R组、2ME2组、DEX组、DM组cTnI、IL-1β,TNF-α浓度明显升高,心肌组织结构紊乱,心肌纤维断裂增加,心肌细胞明显肿胀,炎性细胞浸润增加,心肌组织NLRP3表达量显著增加,每搏量(SV)、射血分数(EF)%、短轴缩短率(FS)%明显下降(P<0.05);与I/R组相比,DEX组、DM组HIF-1α表达量明显增加,NLRP3表达明显降低,cTnI、IL-1β,TNF-α浓度明显下降,心肌组织结构明显改善,炎性细胞浸润明显减少,SV,EF、FS明显升高(P<0.05);与DEX组相比,DM组HIF-1α表达量明显降低,NLRP3表达量明显增加,cTnI、IL-1β、TNF-α浓度明显增加,心肌组织结构紊乱,心肌纤维断裂增加,心肌细胞明显肿胀,炎性细胞浸润增加,SV,EF、FS明显降低(P<0.05)。结论:DEX可能通过上调心肌组织HIF-1α的表达,抑制NLRP3炎性体的激活,减轻心脏炎症反应,改善糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤。 相似文献
96.
摘要 目的:探讨呼气末二氧化碳分压(PetCO2)、C-反应蛋白/白蛋白比值(CRP/Alb)及综合脱机指数(IWI)对重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败的预测价值。方法:选择2020年1月至2022年6月在安徽中医药大学附属六安医院进行机械通气的重型颅脑损伤患者96例作为研究对象,按照撤机结局分为撤机失败组(n=31)和撤机成功组(n=65)。比较两组撤机前PetCO2、CRP/Alb、IWI及临床参数。应用多因素Logistic回归分析重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败的危险因素。应用受试者工作特征(ROC)曲线评价PetCO2、CRP/Alb、IWI对重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败的预测价值。结果:撤机失败组PetCO2、CRP/Alb、急性生理功能和慢性健康状况评分系统II(APACHE II)评分显著高于撤机成功组,机械通气时间长于撤机成功组,IWI、格拉斯哥昏迷评分(GCS)显著低于撤机成功组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,PetCO2≥37.01 mmHg、CRP/Alb≥0.97、IWI≤78.23、GCS≤5.90分、APACHE II评分≥26.17分、机械通气时间≥4.49 d是重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示PetCO2、CRP/Alb、IWI、GCS、APACHE II对重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败均有较高的敏感度、特异度, PetCO2、CRP/Alb、IWI三项联合检测对重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败预测的曲线下面积(AUC)高于PetCO2、CRP/Alb、IWI、GCS、APACHE II单独检测。结论:PetCO2、CRP/Alb及IWI联合评估对重型颅脑损伤机械通气患者撤机失败具有较高的预测价值。 相似文献
97.
摘要 目的:探究跨膜P24转运蛋白10(TMED10)对骨关节炎中转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的影响。方法:将大鼠软骨细胞分为Control组、IL-1β组、NC-sh+IL-1β组、TMED10-sh+IL-1β组、NC-OE+IL-1β组和TMED10-OE+IL-1β组。Control组和IL-1β组细胞不进行转染处理,NC-sh+IL-1β组、TMED10-sh+IL-1β组、NC-OE+IL-1β组和TMED10-OE+IL-1β组细胞分别转染NC-sh、TMED10-sh、NC-OE和TMED10-OE。转染后,除Control组之外,其他组软骨细胞均用白介素-1β(IL-1β)(10 ng/mL)处理24 h模拟OA软骨细胞的病理微环境。通过MTT法检测细胞增殖,通过TUNEL法检测细胞凋亡。采用前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法建立OA大鼠模型,将OA大鼠分为OA组、OA+NC-sh组和OA+TMED10-sh组(n=12),Sham组(n=12)大鼠进行假手术操作。Sham组和OA组大鼠关节腔内注射40 μL生理盐水,OA+NC-sh组和OA+TMED10-sh组大鼠关节腔内分别注射40 μL的NC-sh和TMED10-sh(滴度为1×109 TU/mL),每周注射1次,共4周。采用番红O/固绿染色法评价膝关节软骨形态,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测软骨细胞和大鼠关节软骨中TMED10的mRNA水平,采用Western blot检测软骨细胞和大鼠关节软骨中TMED10、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Collagen II和MMP-13的蛋白表达水平。结果:与Control组比较,IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 mRNA和TMED10、MMP-13蛋白水平均升高(P<0.05),相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-sh+IL-1β组比较,TMED10-sh+IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平和TMED10、MMP-13的蛋白水平均降低(P<0.05),相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均升高(P<0.05)。与IL-1β组和NC-OE+IL-1β组比较,TMED10-OE+IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平和TMED10、MMP-13的蛋白水平均升高(P<0.05),相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均降低(P<0.05)。与Sham组比较,OA组大鼠的OARSI评分、TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平以及TMED10和MMP-13的蛋白水平均升高(P<0.05),TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II蛋白水平均降低(P<0.05)。与OA组和OA+NC-sh组比较,OA+TMED10-sh组大鼠的OARSI评分、TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平以及TMED10和MMP-13的蛋白水平均降低(P<0.05),TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II蛋白水平均升高(P<0.05)。结论:本研究表明TMED10可能通过抑制TGF-β/Smads信号通路导致软骨细胞丢失和软骨退变,TMED10/TGF-β/Smads信号通路可能是治疗OA的新靶标。 相似文献
98.
摘要 目的:分析血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6(KL-6)与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能。方法:选择我院自2020年1月至2022年12月收治的120例急性呼吸窘迫综合征患者作为研究对象(观察组),根据氧合指数(PaO2/FiO2)分为轻度组、中度组和重度组;另选120例非急性呼吸窘迫综合征患者作为对照组。检测所有患者血清ANGPTL4和KL-6的表达水平,分析血清ANGPTL4和KL-6与APACHE Ⅱ评分、PaO2/FiO2的关系,使用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评价血清ANGPTL4联合KL-6对急性呼吸窘迫综合征预后的评估效能。结果:对比对照组,观察组血清ANGPTL4、KL-6的表达水平均明显升高(P<0.05);血清ANGPTL4、KL-6的表达水平在轻度组、中度组和重度组中差异有统计学意义,且急性呼吸窘迫综合征越严重,升高越明显(P<0.05);经Pearson相关性分析,急性呼吸窘迫综合征患者血清ANGPTL4、KL-6的表达水平与PaO2/FiO2呈负相关,与APACHE Ⅱ评分呈正相关(P<0.05);经ROC曲线分析,血清ANGPTL4联合KL-6预测急性呼吸窘迫综合征患者入院28d内死亡的敏感度为90.14%、特异度为65.74%,AUC为0.900。结论:血清ANGPTL4、KL-6表达水平升高与急性呼吸窘迫综合征严重程度增大密切相关,两者联合在患者预后评估中具有一定价值,可作为判断病情及预后的辅助指标。 相似文献
99.
摘要 目的:探讨蓬松蛋白(DVL)DNA甲基化对骨质疏松(OP)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化及Wnt通路的影响。方法:分离、培养OP患者的BMSCs,成骨诱导培养BMSCs 0、7、14、21天,观察BMSCs细胞形态变化,检测碱性磷酸酶(ALP)染色及活性,检测茜素红染色及钙结节形成,荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)及免疫印迹检测远端缺失同源盒5(Dlx5)、核心结合蛋白因子2(Runx2)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、Ⅰ型胶原蛋白(Colla Ⅰ)表达。检测DVL1、Wnt、糖原合成酶激酶3(GSK3)、β连环蛋白(β-catenin)表达及DVL DNA甲基化水平。在成骨诱导培养基中加入甲基转移酶抑制剂5-Aza,将BMSCs分为对照组(Control组)、甲基转移酶抑制剂组(5-Aza组)、甲基转移酶抑制剂+si-NC组(5-Aza+si-NC组)、甲基转移酶抑制剂+si-Wnt组(5-Aza+si-Wnt组),依次进行ALP活性测定,茜素红染色及钙结节形成测定。RT-PCR检测Dlx5、Runx2、OSX、Colla 1水平,免疫印迹检测Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ、DVL1、Wnt、GSK3、β-catenin的蛋白表达量,并检测DVL DNA甲基化水平。结果:成骨诱导后BMSCs具有强的ALP活性和矿化结节生成能力,且随着培养时间的增长,BMSCs细胞ALP活性和矿化结节生成能力增强,Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ mRNA水平和Wnt、GSK3、β-catenin、DVL1表达升高,DVL DNA甲基化水平降低(P<0.05)。5-Aza组较Control组ALP染色加深,活性增强,钙结节形成增多(P<0.05),Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ mRNA及蛋白表达、Wnt、GSK3、β-catenin、DVL1表达升高,DVL DNA甲基化水平降低(P<0.05)。5-Aza+si-Wnt组较5-Aza+si-NC组ALP染色变浅,活性降低,钙结节形成减少(P<0.05),Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ mRNA及蛋白表达、Wnt、GSK3、β-catenin、DVL1表达降低,DVL DNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论:DVL DNA甲基化可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制OP患者BMSCs成骨分化。 相似文献
100.
摘要 目的:探讨血清分形趋化因子(FKN)、活化蛋白C(APC)与老年社区获得性肺炎(CAP)患者病情和预后不良的关系。方法:选取2020年1月~2023年1月潍坊市人民医院收治的314例老年CAP患者为CAP组,根据病情程度分为低危组104例、中危组123例、高危组87例,根据入院30d生存状况分为死亡组65例和存活组249例,另选取同期100名体检健康老年人为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清FKN、APC水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FKN、APC水平对老年CAP患者预后不良的预测价值。通过多因素Logistic回归分析老年CAP患者预后不良的影响因素。结果:与对照组比较,CAP组血清FKN水平升高,APC水平降低(P<0.05)。低危组、中危组、高危组老年CAP患者血清FKN水平依次升高,APC水平依次降低(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,病情高危、机械通气和C反应蛋白(CRP)、FKN升高为老年CAP患者预后不良的独立危险因素,APC升高为其独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,FKN、APC水平单独和联合预测老年CAP患者预后不良的曲线下面积分别为0.783、0.789、0.870,二者联合对老年CAP患者预后不良的预测价值大于各指标单独预测。结论:血清FKN水平升高和APC水平降低参与着老年CAP患者病情进展,血清FKN联合APC能较好地预测老年CAP患者预后不良。 相似文献