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21.
用生物素化重组质粒探针检测产蛋下降综合症病毒核酸 总被引:7,自引:0,他引:7
用EDS-76标准毒株感染鸭胚后,提取病毒核酸,经PstI酶切后,与质粒pT7/T3α-19重组,并转化到大肠杆菌DH5α中,筛选出一个插入片段为318bp的重组质粒,并命名为pTEZP3。用生物素标记该重组质粒后,分别对正常鸭胚尿囊液、各地分离的EDS毒株和禽类易感的几种病毒进行核酸杂交试验,结果该探针对实验中收到的几种EDS分离毒均产生阳性反应,而不与正常鸭胚尿囊液和其它几种禽类病毒交;该探针 相似文献
22.
用中性红标记酵母原生质体初探 总被引:1,自引:0,他引:1
用2%蜗牛酶处理酵母细胞60分钟,啤酒酵母Y29的原生质体形成率为90%,再生率为9.5%;糖化酵母IB的原生质体形成率为86%,再生率为12%。用500ppm中性红染液对Y29菌株的整细胞和原生质体染色15分钟,细胞的着色率为84%,存活率为12%,而原生质体的着色率为75%,再生率为6.4%,经染色后的原生质体体积缩小,在交变电场中排队所需的场强电降低。 相似文献
23.
生物素标记HBV RNA探针的制备及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本文首次采用SP65特殊质粒与人类的乙型肝炎病毒DNA重组,制备了Bio-HBV RNA探针,能特异地与HBV DNA杂交,将该探针与缺口转移方法标记的Bio-HBV DNA探针进行了比较,结果显示出Bio-HBV RNA探针比Bio-HBV DNA探针的敏感性提高10倍,并分别应用两种探针同时检测70例乙肝病人血清中HBV DNA,阳性率各为31.42%、28.57%(P>0.25)。对Bio- 相似文献
24.
PCR和生物素探针对HFRSV的检测和分型的探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
分析比较肾综合征出血热病毒(HFRSV)76/118株和R_(22)株的核苷酸序列,根据引物设计原则及检测分型的目的,设计并合成了3对引物。1对引物取于两毒株间的高同源区段,作为共同引物和外引物;另两对引物取于两毒株间的低同源区段,分别作为野鼠型引物、家鼠型引物和内引物。建立了DNA聚合酶链反应(PCR)和NestPCR方法,并用NcstPCR合成了两种型特异的生物素探针。PCR检测76/118、A_9、陈、R_2、R_225个毒株,用外引物时均扩增出1条约300bp的条带;用内引物的野鼠型引物时,除R_(22)株之外,其余4株均扩增出1条约70bp的条带。斑点杂交试验证实了PCR检测分型的准确性。NestPCR和生物素探针斑点杂交试验可以测出1-10bg的目的cDNA。 相似文献
25.
分别制备了兔抗人M蛋白(B成分)抗血清和兔抗人C成分[1]抗血清。用蛋白A-胶体金作标记物,对经LowicrylK4M低温包埋的人骨骼肌超薄切片中M蛋白和分子量140000的C成分进行免疫电镜定位。发现M蛋白分布于整个M线,而C成分虽然也集中于M线以内,但主要分布于M线内的边缘区域。 相似文献
26.
用生物素标了己了花椰菜CaM。生物素标记的CaM具有与天然CaM相似的Ca2+依赖电泳特性,可激活CaM依赖性磷酸二酯酶,能够检测出50ng的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物CaM结合蛋白的生物素-覆盖法(Biotin-overlay)并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内64kD蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必需设置酶标亲和素处理的对照。用生物素-覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形成过程中的CaM结合蛋白时可检出2,4-D诱导的CaM结合蛋白。 相似文献
27.
利用碘乙酰胺氮氧自由基标记钙调蛋白研究了它与三氟拉嗪(TFP)、酸枣仁皂甙A(JuA)的相互作用。结果表明,每分子CaM分别至少可以结合两分子的TFP及JuA,它们的作用影响了CaM上的Met残基(主要是71,72和76)的环境,使反应自由基运动自由度的旋转相关时间τR值下降。据τR变化的趋势,推测TFP和JuA都是通过疏水作用结合到CaM上的疏水沟区,但两者的结合位点可能不同。 相似文献
28.
本研究用克隆的HCMV AD169株DNA片段,制备了生物素标记的DNA探针,建立了检测临床脐带血、尿标本中HCMV DNA的核酸探针杂交方法。该探针可测出100pg同源DNA,不与人胚肺细胞、Hep-2细胞DNA以及其他疱疹病毒的DNA发生反应。用核酸杂交方法检测了30份脐带血标本,有11例阳性,阳性率为33%。10例孕妇尿标本中,3例阳性,阳性率为30%。检测结果表明:我们建立的生物素标记的HCMV DNA探针的点杂交法,具有高度的特异性、敏感性,比分离病毒法更迅速,可用于HCMV感染的临床标本的病毒核酸检测。 相似文献
29.
为了探究三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)糖原合成激酶-3β(GSK3β)基因对壳色的影响,研究采用RACE技术获得Hc-GSK3β基因cDNA全长1867 bp,其中包含1261 bp的ORF区编码420个氨基酸, ORF中含有一个S_TKc结构域,该结构域序列高度保守。组织差异表达分析发现Hc-GSK3β基因在紫色蚌鳃、斧足、内脏团和边缘膜组织中表达量高于白色蚌的表达量(P<0.05),且在斧足和边缘膜表达差异水平达到极显著(P<0.01),而在紫色蚌闭壳肌组织中表达量显著低于白色蚌(P<0.05)。原位杂交(ISH)实验结果显示在三角帆蚌外套膜的外褶、中褶、內褶、背膜区和腹膜区均有阳性信号产生,且在外褶的信号表达较强烈。该基因经重测序比较,共鉴定出6个SNP位点,其中在C+185A位点的CA基因型在紫色蚌的分布频率显著高于白色三角帆蚌(P<0.05);在紫色蚌中, T+341G位点TT基因型三角帆蚌内壳颜色参数b值显著低于TG基因型(P<0.05)。研究表明, Hc-GSK3β基因参与了三角帆蚌壳色形成,筛选的SNP标记可用于三角帆蚌壳... 相似文献
30.
磁珠法分离特异 mRNA 总被引:2,自引:0,他引:2
以生物素标记的单链 DNA 为探针和 mRNA 液相杂交,再由带抗生物素蛋白的磁珠捕获已杂交的 mRNA,建立了快速、简便捕获特异 mRNA 的方法.磁珠的捕获率为 70.4%,洗脱率为 78.6%,mRNA 的总回收率为 55.2%. 相似文献