团头鲂nanos3基因的克隆鉴定

为了标记团头鲂(Megalobrama amblycephala)的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells, PGCs), 首次克隆并鉴定了团头鲂nanos3基因(mananos3)。mananos3全长1027 bp, 包括48 bp 5′UTR (5′untranslated Region), 490 bp 3′UTR和489 bp开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。该基因编码162个氨基酸。通过序列比对发现Mananos3蛋白和其他物种Nanos蛋白一样, 存在一个保守的RNA结合功能域, 该功能域包含一个锌指基序(Motif)。系统发育树结果显示, Mananos3与鲤(Cyprinus carpio)的Nanos3最为相近。半定量和定量PCR结果表明, mananos3具有较高的母源表达, 并在胚胎发育早期高量表达, 而在1000细胞期之后表达量逐渐降低。在成体组织中, mananos3仅在卵巢中检测到表达。mananos3和斑马鱼(Danio rerio) nanos3 (zfnanos3)的3′UTR均可以介导绿色荧光蛋白特异标记团头鲂和斑马鱼胚胎发育早期的PGCs, 但是mananos3的3′UTR能够更特异地标记团头鲂的PGCs。通过比对mananos3和zfnanos3的3′UTR发现, mananos3 的3′UTR中有一个非经典的miR430识别位点(GCACTA)。通过对该位点的突变研究证实其有利于nanos3在非PGCs组织中的降解。综上所述, 团头鲂mananos3的3′UTR序列中的非经典miR430识别位点(GCACTA)可能与介导报告基因在PGCs中特异表达相关。     

Cilia containing 9 ＋ 2 structures grown from immortalized cells

Cilia depend on their highly differentiated structure, a 9 ＋ 2 arrangement, to remove particles from the lung and to transport reproductive cells. Immortalized cells could potentially be of great use in cilia research. Immortalization of cells with cilia structure containing the 9 ＋ 2 arrangement might be able to generate cell lines with such cilia structure. How- ever, whether immortalized cells can retain such a highly differentiated structure remains unclear. Here we demonstrate that （1） using Ela gene transfection, tracheal cells are immortalized; （2） interestingly, in a gel culture the immortalized cells form spherical aggregations within which a lumen is developed; and （3） surprisingly, inside the aggregation, cilia containing a 9 ＋ 2 arrangement grow from the cell＇s apical pole and protrude into the lumen. These results may influence future research in many areas such as understanding the mechanisms of cilia differentiation, cilia generation in other existing cell lines, cilia disorders, generation of other highly differentiated structures besides cilia using the gel culture, immortalization of other ciliated cells with the Ela gene, development of cilia motile function, and establishment of a research model to provide uniform ciliated cells.     

建立鸡EPGCs单细胞克隆株初探

目的探索鸡EPGCs单细胞克隆建立细胞系的可能性,并对其生物学特性进行鉴定。方法采取19期和28期的鸡EPGCs,体外培养传至第4代的细胞聚合体,用胰酶消化将细胞分散成单细胞悬液,将单个细胞接种至96孔板,每个孔内接种1个细胞,生长出的细胞集落用胶原酶消化传代,细胞化学法和免疫荧光法检测多向分化细胞的表面标志物;常规染色体核型检查。结果接种的288个单细胞中有9个扩增,其中7个传至第2代,2个传至第4代,克隆形成率为3.1%。扩增出的2~4代单细胞克隆能稳定增殖不分化,具有正常二倍性染色体核型、碱性磷酸酶阳性、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-1等特征性细胞表面标志物呈阳性;离体情况下具有形成类胚体和类上皮样细胞的能力。结论建立鸡EPGCs单细胞克隆细胞系是可行的,其生物学特性稳定。     

禽类多能干细胞的研究与应用

禽类多能干细胞是一种未分化的细胞,来源于X期未孵化的胚盘细胞或5.5 d性腺的原始生殖细胞,具有自我更新能力,并能分化为所有类型细胞,包括生殖系.禽类多能干细胞最重要的应用就是在体外对其基因组进行特异性修饰,用来制备转基因禽类.禽类多能干细胞的培养已取得显著进步,随着对其多能性分子基础等研究的深入,禽类多能干细胞也将得到充分运用.综述了禽类多能干细胞的培养方法、生物学特性及其应用进展.     

人工分离花粉生殖细胞的细胞生物学研究

采用压片法从三科七种植物的成熟花粉粒中分离出生殖细胞。干涉差显微术和视频增差显微术观察表明,分离的生殖细胞有完整结构和清晰的图象,并呈现由纺锤形到球形的各种形态;细胞形态的变化与培养基渗透压、微管稳定剂等因素有关。首次获得了生殖细胞的扫描电镜的立体形象。细胞壁化学成分的检测否定细胞壁的存在,微管蛋白的免疫荧光鉴定显示了微管系统的空间分布,生活力的荧光测定证实分离的细胞是生活的。讨论了分离生殖细胞研究的前景。     

被子植物生殖细胞的细胞壁

本文综述了国内外有关被子植物生殖细胞壁的资料,概述了它的形成、发育、性质和功能;在这些方面,生殖细胞壁的特征因植物种类而异。     

百合生殖细胞和精细胞的大量制备及其蛋白组成的比较

新鲜的或低温贮存的兰州百合(Lilium davidii Duch.)花粉,在BKS15中萌发,分别收集萌发5h和30h的花粉管,采用低渗冲击胀破和percoll密度梯度离心纯化等方法,获得批量纯化的生殖细胞和精细胞。用10%三氯乙酸和丙酮沉淀制备生殖细胞和精细胞的蛋白质,用SDS-PAGE对两种细胞蛋白质进行比较。结果表明,二者在蛋白质组成成分上没有明显差异;但在蛋白质的含量上有两种成分差异显著,即:精细胞中的40KD蛋白多于生殖细胞;而98KD蛋白又少于生殖细胞。对40KD和98KD蛋白质的可能生理功能进行了讨论。     

秋水仙胺（colcemid）诱发雄性小鼠生殖细胞减数分裂延迟和非整倍…

Colcemid (COM) was tested for induction of meiotic delay and aneuploidies in meiotic metaphase II (MMII) of male(101/E 1 XC 3 H/E 1)F 1 mice post single intraperitoneum (i.p.) injection. The dose of 1 mg/kg of COM was used and sampled at 2, 6, 10, 14 and 18 h after COM treatment. The number of MMII and MMI were the highest at 2 and 6 h repectively, and decreased rapidly with lengthening of COM treatment and reached the lowest at 14 h; then increased. However, the ratio of MMII to MMI was always significantly higher than in solvent control at every sample interval. Under our experimental conditions, COM did not show aneugenicity in male mouse germ cells. The possible mechanisms by which COM caused meiotic delay and reasons that COM did not induce aneuploidy in MMII were discussed.     

多种被子植物花粉生殖细胞大量分离技术的比较研究

从11种植物的成熟花粉粒中分离出大量生活的生殖细胞。比较了四种分离方法(一步渗透压冲击法、二步渗透压冲击法、低酶法和花粉原生质体释放法)在不同植物中的效果。归纳出三类植物适于采用三种分离方法。研究了影响分离效果的若干重要因素。对5种植物的分离生殖细胞进行了纯化。经鉴定,纯化的细胞群体中80%以上的细胞是生活的。