人多潜能胚胎生殖细胞的分离和培养

多潜能胚胎性干细胞来源有两条途经,从植入前的早期胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)分离出来的称胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES);从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离得到的称胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EG)。这两种干细胞在小鼠嵌合体实验中,都证明具有参与生殖系传递的能力。这类干细胞在体外保持     

鱼类生殖细胞

鱼类和其他大多数动物一样,胚胎发育产生两大细胞系,一个是生殖细胞系或种质系,另一个是体细胞系.生殖细胞系和体细胞系的分离发生在胚胎发育的早期,其标志是形成生殖细胞系的祖细胞,即原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs).PGC形成后从其"出生地"进行"长途跋涉"迁移到性原基,成为性原细胞,即卵原细胞和精原细胞;随后在经过配子生成的一系列发育过程后,最终产生成熟的配子——卵子和精子.生殖细胞发育的每个步骤都可能都可能影响生物个体的生殖能力或育性.巨大的生物学意义及其令人振奋的研究进展,使"生殖细胞"日益成为科学研究的热点,且作为特别议题出现在Science杂志2007年4月20日第5823期的封面上.近10年见证了对生殖细胞的认知的长足进步,这些都得益于对青鳉和斑马鱼等模式生物的研究.生殖细胞已能被准确地标记且分离以进行体外培养及移植,这为濒临绝种的动物借助近缘物种进行生殖繁衍提供了技术基础,譬如最近就有人成功地"借鲑鱼之腹"获得了虹鳟后代.另外,单倍体细胞体外培养已获成功,如最近有研究人员获得了青鳉鱼单倍体胚胎干细胞,而且把这种细胞的核移植到正常的卵子中,其能像正常精子授精一样发育并产生可育的子代.这种鱼其实最初是由嵌合卵发育而成,也就是由正常减数分裂生成的单倍体卵母细胞核和植入的体外培养的有丝分裂单倍体细胞核组成的卵.这种繁殖技术也被称作半克隆技术.这条首次获得的半克隆青鳉鱼被命名为"霍莉"(Holly).总之,本文将从基础研究和繁殖技术两方面,就生物界对鱼类生殖细胞研究和操作现状及未来研究方向进行小结与探讨.     

背角无齿蚌生殖细胞及钩介幼虫的扫描电镜观察

本文报告背角无齿蚌的精子、卵子、钩介幼虫的扫描电镜观察。精子头部呈椭圆形，由顶体帽、顶体后区、核区和颈部组成，尾细长呈线状，卵子圆形，有许多卵闰，在生殖腺中有各种不同发育程度的卵细胞，钩介幼虫在育儿囊（外鳃）中发育，有一系列变态过程，表明卵子是分期分批排出，钩介幼虫也是分批发育和成熟的。     

影响鸡原始生殖细胞分离克隆因素的研究（简报）

具有多向分化潜能的胚胎干细胞有两种来源：一是来自于早期胚胎内细胞团的胚胎干细胞(Em．bryonic Stem Cells,ESCs),另一种是来自于胚胎生殖腺原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)的胚胎生殖细胞(Embryonic Germ Cells,EGCs)。     

硬骨鱼中vasa基因的研究

vasa基因编码一个DEAD-box家族的ATP依赖性RNA解旋酶,最早在果蝇中发现.在绝大多数的脊椎动物和非脊椎动物中,vasa基因的杂交信号仅在生殖细胞系中特异性表达,因此它可以作为一种分子标签,广泛用于性腺发生、配子发生、原生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的起源、迁移、分化等方面的研究.综述了国内外有关硬骨鱼类vasa基因结构,表达与功能等方面的研究报道,并对其应用前景作了展望.     

鸡原始生殖细胞转染条件优化

为获得鸡原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的最佳转染效率,本研究比较不同质粒用量和不同细胞数在3种转染试剂(Lipofectamine 2000、3000和LTX&Plus Reagent)中PGCs的转染效率,利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting technology,FACS)辅助优化Lipofectamine 3000转染试剂,经FACS进一步分选获得带绿色荧光蛋白(GFP)的PGCs,继续培养3周后,移植回注到受体鸡胚中,移植3.5 d后分离性腺拍照观察。结果显示,转染试剂Lipofectamine 3000的转染效率最高,质粒、Lipofectamine 3000转染试剂和PGCs细胞数的配比为3μg:4μL:0.5×10⁴个,转染5h转染效率最高,达到23.4%,与现有的研究结果相比提高了2倍以上。移植回注PGCs到受体鸡胚中,荧光显微镜观察到鸡胚性腺中有GFP阳性细胞。本研究综合考虑转染试剂、质粒用量和细胞数量的影响因素以优化PGCs的转染条件,为高...     

百合生殖细胞和精细胞的大量制备及其蛋白组成的比较

新鲜的或低温贮存的兰州百合（Ｌｉｌｉｕｍ ｄａｖｉｄｉｉ Ｄｕｃｈ）。花粉，在ＢＫＳ１５中萌发，分别收集萌发５ｈ和３０ｈ的花粉管，采用低渗冲击胀破和ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度纯化等方法，获得批量纯化的生殖细胞和精细胞。用１０％三氯乙酸和丙酮沉淀制备生殖细胞和精细胞的蛋白质，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对两种细胞蛋白质进行比较。结果表明，二者在蛋白质组成成分上没有明显差异；但在蛋白质的含量上有两种成分差异显著，即     

培养原始生殖细胞的新方法

为探讨原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)在体外长期增殖、生长并长期保持分化潜能的新方法,我们将PGCs分别与睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)和同源生殖嵴成纤维细胞共培养。结果与SCs共培养的PGCs集落明显多于同源生殖嵴成纤维细胞共培养PGCs集落,传代次数也显著多于同源生殖嵴成纤维细胞．目前与SCs共培养的PGCs已成功传代培养至了第51代。因此我们认为PGCs与SCs共培养,可有效提高原始生殖细胞在体外的增殖能力并可长期维持干细胞的特性。     

体细胞核重编程中表观遗传学的研究进展

促使体细胞核重编程的方法很多,除了传统的体细胞核移植方法外,科学家们努力寻求从法律、道德、伦理等方面更易被人们接受的新方法.近年来多能干细胞与体细胞融合、多能细胞的抽提物与体细胞共孵育以及将编码多潜能因子的基因导入体细胞中等方法都能使体细胞核发生重新编程,将已分化的体细胞转变为一种全能的胚胎状态.主要论述了生殖细胞及早期胚胎、体细胞核移植和其他形式的体细胞核重编程的表观遗传学的改变,对表观遗传学的深入研究将有助于我们进一步了解体细胞核重编程的机制,从而不断完善各种技术促进供体核的重新编程,使其更好地应用于基础研究和生产实践.