幽门螺杆菌感染胃组织基因芯片生物信息学分析

为探讨幽门螺杆菌感染胃组织后差异基因变化,深入分析参与疾病发生、发展的分子机制。从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库下载幽门螺杆菌感染胃组织基因芯片数据(GSE5081),根据胃粘膜组织是否受损分组,分别比较幽门螺杆菌感染者与阴性对照组,获得差异基因并进行功能分析包括GO分析、信号通路分析,基因相互作用及基因共表达,得到重要核心基因,并通过实时定量PCR方法进行验证。结果表明:得到参与幽门螺杆菌感染后上调的44个主要基因,主要涉及的GO分析及信号通路包括免疫反应、炎症反应、抗原提呈、细胞因子通路、因子受体关联,细胞粘附分子等。研究发现核心基因CXCR4,CCL20,JAK3,TNFAIP2,PLEK,HLA-DMA,PTPRC,CXCL13,BCL2A1,并通过实时定量PCR的方法进行部分验证,CXCR4,CXCL5,CXCL2在幽门螺杆菌感染后的胃黏膜组织表达高于对照组。幽门螺杆菌感染后胃粘膜组织引起免疫反应,炎症反应,抗原提呈,因子受体关联,细胞粘附分子通路的激活。同时发现一些主要的趋化因子相关基因CXCR4,CXCL5,CXCL2,CCL20,CXCL1等,涉及增殖,炎症,免疫,凋亡基因JAK3,TNFAIP2,PLEK,HLA-DMA,PTPRC,BCL2A1等的表达上调,并实时定量PCR验证部分相关基因的表达。这些结果为从分子网络机制层面上认识幽门螺杆菌感染提供分析思路及基础。     

Helicobacter pylori 26695 基因组尺度代谢研究进展

代谢网络在代谢功能研究、生物代谢过程控制、疾病诊断分析和药物靶标设计等方面具有重要理论和实践意义。生物信息学研究利用序列同源、结构模拟、对接等手段与生化实验有效结合促进了生物体代谢网络的进一步完善。本文作者在构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori 26695,H.pylori 26695）代谢网络的工作基础上综合了近年来研究者对H.pylori 26695代谢通路关键酶的研究成果,并结合基因组信息,综述了H.pylori 26695特异性的重要代谢通路。本文从基因组水平阐明代谢通路与基因的关系,并详细分析了关键酶对H.pylori 26695生理的重要作用,最后探讨了重构一个连续、完整的代谢网络面临的困难及其在药物靶标设计方面的研究前景。     

体外拮抗幽门螺杆菌的人嗜酸乳杆菌菌株的选育

目的 探讨人嗜酸乳杆菌对幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,ＨＰ）毒力株的体外拮抗作用,筛选出对ＨＰ毒力株有明显拮抗作用的嗜酸乳杆菌菌株。方法 从健康人胃肠道中分离出５２株嗜酸乳杆菌可疑株,通过其培养特性,生理特性,生化反应及代谢产物测定等进行鉴定,获得２６株嗜酸乳杆菌。同时,从临床患者胃活检标本中分离出２３株ＨＰ菌株,用ＰＣＲ方法筛选出ｃａｇＡ阳性ＨＰ毒力株,然后,采用打孔法进行嗜酸乳杆菌培养上清拮抗ＨＰ毒力株的实验,以１％的乳酸作对照。结果 筛选出４株对ＨＰ毒力株有明显拮抗作用的嗜酸乳杆菌,这种拮抗作用不依赖嗜酸乳杆菌分泌的乳酸。结论 人嗜酸乳杆菌在体外对ＨＰ毒力株具有明显拮抗作用。该研究为应用微生态疗法治疗ＨＰ感染提供了理论基础。     

金标免疫渗滤法与常规ELISA法对比检测抗幽门螺杆菌抗体的研究

用ＤＩＧＦＡ单盲检测各类胃病患者血清ＨＰ特异性抗体,结果表明其敏感性为９７９％,特异性为９１５％,诊断效率达９４７％,ｙｏｕｄｅｎ’ｓ指数为０８９。通过本法与常规ＥＬＩＳＡ比较,发现两法前四种诊断指标均无明显差异,但ＤＩＧＦＡ简易、快速,无需任何设备,数分钟内即可得出正确结论,因此适合于基层医院查病、胃镜检查前过筛及流行病学调查应用     

幽门螺杆菌根除失败后两种四联方案根除率的疗效对比

目的:对比两种不同的四联疗法对幽门螺杆菌根除失败后的根除率,选择可以有效弥补传统三联疗法的幽门螺杆菌根除失败措施的四联疗法。方法:选择2010年8月到2012年8月期间在我院住院治疗的幽门螺杆菌根除失败后患者90例作为研究对象。随机分为实验组和对照组,实验组的患者采取序贯疗法,对照组的患者采取标准四联疗法。对比两组的根除率以及临床疗效。结果:实验组患者的根除率为86.7%,对照组患者根除率为51.0%;实验组患者的临床总有效率为95.6%,对照组的临床有效率为77.8%;实验组的不良反应的总发生率为4.4%,对照组不良反应总发生率为20.0%。两组比较差异明显,P均0.05,具有统计学意义。结论:序贯疗法对幽门螺杆菌根除失败后的根除率以及疗效高于标准四联疗法。     

四种石斛兰种胚发育进程研究

以玫瑰石斛、尖刀唇石斛、短棒石斛、兜唇石斛种子为材料,进行种胚非共生萌发研究,并对其种子形态和胚的发育进程进行了显微观察。结果表明:处于球形胚阶段的石斛兰种子,种胚吸胀后突破种皮,发育至吸收毛和芽生长点出现后,种胚形成原球体;种子萌芽后胚尚未成熟,只进入心形胚阶段。呈纺锤形种子的种皮两端形状不同,一端存在结点,呈弯曲状的尖形,另一端种皮呈收拢的圆口形。4种石斛兰种子,玫瑰石斛种子最长,为两端狭长的纺锤形;兜唇石斛种子最短,呈两端稍细的纺锤形。玫瑰石斛、短棒石斛、尖刀唇石斛种子胚培养需要5～10 d萌发;兜唇石斛种子和胚皆偏小,萌发需要30 d。石斛兰种胚和种皮吸水膨胀后,种胚向种皮的一端移动、脱出或种胚撕裂种皮中央后突破而出,形成裸胚。玫瑰石斛种子撕裂种皮后主要从种皮中央突破;短棒石斛、尖刀唇石斛、兜唇石斛部分种胚从种皮一端脱出,部分种胚则从中央撑破种皮脱出。充分膨胀、变绿后萌芽的裸胚,存在极性,顶部芽生长点萌动,下部出现成群散射状吸收毛。     

幽门螺旋杆菌阳性胃癌组织microRNA-1290、microRNA-134表达与肿瘤增殖基因、侵袭基因和预后的关系分析

摘要 目的：探讨幽门螺旋杆菌（Hp）阳性胃癌组织中微小核糖核酸-1290（miR-1290)、微小核糖核酸-134（miR-134）的表达及其与肿瘤增殖基因、侵袭基因和预后的关系。方法： 选取2016年1月至2017年1月重庆大学附属三峡医院收治的126例胃癌患者为研究对象，根据Hp检测结果分为Hp阳性胃癌组（n=84）和Hp阴性胃癌组（n=42），另同期60例慢性胃炎患者为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组组织中miR-1290、miR-134、增殖基因[磷脂酰肌醇3催化亚基A（PIK3CA）、C-myc癌基因（c-myc）]和侵袭基因[碱性螺旋环-螺旋转录因子(Twist)、N钙黏素（N-cad）]的表达。Pearson相关分析Hp阳性胃癌组织miR-1290、miR-134与肿瘤增殖PIK3CA、c-myc和侵袭基因Twist、N-cad表达的相关性，比较不同临床病理特征Hp阳性胃癌患者miR-1290、miR-134表达差异。Kaplan-Meier生存曲线评估miR-1290、miR-134表达与Hp阳性胃癌患者生存预后的关系。结果：Hp阳性胃癌组患者癌组织miR-1290表达高于Hp阴性胃癌组癌组织及对照组胃粘膜组织，miR-134表达低于Hp阴性胃癌组癌组织及对照组胃粘膜组织，差异有统计学意义(P<0.05)。Hp阳性胃癌组织中miR-1290表达与增殖基因PIK3CA、c-myc和侵袭基因Twist、N-cad mRNA表达呈正相关性（r=0.620～0.725，均P<0.05），miR-134与增殖基因PIK3CA、c-myc和侵袭基因Twist、N-cad mRNA表达呈显著负相关性（r=-0.670～-0.784，均P<0.05）。不同肿瘤TNM分期、浸润深度及淋巴结转移Hp阳性胃癌患者癌组织中miR-1290、miR-134表达比较，差异具有统计学意义(P均<0.05) 。Hp阳性胃癌组患者中，miR-1290高表达组和低表达组5年总体生存率分别为48.78%（20/41），75.61%（31/41）。miR-1290高表达组患者累积生存率明显低于miR-1290低表达组(Log rank χ²=6.366，P= 0.012)。miR-134低表达组和高表达组患者5年总体生存率分别为42.86%（18/42），82.50%（33/40）。miR-134低表达组累积生存率显著低于miR-134高表达组(Log rank χ²=10.640，P=0.001)。结论：Hp阳性胃癌组织miR-1290表达增加，miR-134表达降低，两者可能通过促进肿瘤增殖和侵袭基因的表达，导致肿瘤恶性进展及不良预后。     

球形芽孢杆菌Mtx1蛋白和苏云金杆菌Cyt1Aa晶体蛋白的协同作用

采用常规的生物测定方法确定了纯化的球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)的缺失信号肽的97kDa营养期杀蚊毒素(Mosquitocidal toxin 1,Mtx1)蛋白和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)27.3kDa的Cyt1Aa晶体蛋白对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)幼虫的杀虫活性。结果表明Mtx1和Cyt1Aa不同比例的混合物对致倦库蚊的毒力比单独毒素蛋白高,经统计分析表明两毒素蛋白对目标蚊幼虫具有明显的协同作用。在LC98处理浓度下,Mtx1和Cyt1Aa按3∶1混合的混合物LT50值比单独Mtx1的提前了6.36h。表明Cyt1Aa和Mtx1对致倦库蚊具有协同毒杀作用,提高对目标蚊虫的毒力、缩短半致死时间。该结果为深入研究Mtx1和Cyt1Aa的杀蚊作用方式奠定了基础,同时为其在蚊虫防治中的应用提供了新的思路和方法。     

儿童幽门螺杆菌及CagA阳性感染的临床研究

目的探讨非侵入性检查方法对儿童幽门螺杆菌(H.pylori)的诊断及治疗价值。方法对2004年10月至2005年12月在梅县人民医院门诊及住院154例慢性反复腹痛患儿进行粪便幽门螺杆菌抗原(HPSA)血清(H.pylori)抗体(HP-Ab)及产细胞毒素相关蛋白(CagA)、H.pylori检查测验,并对CagA阳性患者于短程三联抗H.pylori干预治疗。结果154例患儿中H.pylori阳性33.8%(52/154),CagA阳性61.5%(32/52)。H.pylori阳性及CagA阳性者以上腹疼痛,恶心呕吐多于H.pylori阴性患者,但它们之间差异无显著性,P>0.05;H.pylori阳性及CagA阳性与H.pylori阴性者病程上差异无显著性,P>0.05。对CagA阳性干预治疗后4周临床症状消失达90.6%(29/32),HPSA转阴率为87.5(28/32),结论H.pylori阳性及CagA阳性与否不能以临床表现作为判断标准,H.pylori及CagA的检测可作为对儿童特别是幼儿诊断H.pylori感染及治疗后复查,简便,患儿易接受,特别适用基层的一种非侵入性检测方法。     

模拟胃酸条件下的幽门螺杆菌CAT特异性抗体活性研究

幽门螺杆菌是常见的感染性病原菌,人类多种疾病发生与此菌感染有关。预防和治疗菌体感染及引发的相关疾病仍是现代医学面临的课题。实验利用原核表达的幽门螺杆菌过氧化氢酶(1~380 aa)免疫家兔,获得效价为1∶6 000的特异性抗血清,经硫酸铵沉淀法得到初步纯化的抗体。在体外模拟胃酸环境下(pH3.4)将抗体进行水解。SDS-PAGE结果显示,抗体的重链能被水解。水解后的抗体产物经ELISA方法检测,仍然具有与抗原特异性结合的能力。实验结论证实,在体外环境下特异性幽门螺杆菌抗体保护作用不会被胃蛋白酶的水解而破坏,提示口服特异性抗体预防和治疗幽门螺杆菌感染可能是一条可行的途径。