人体β—类珠蛋白基因时空表达与调控

人体β-类珠蛋白基因簇可以说是真核生物基因组中最具有代表性的一个基因家族,它的表达具有严格红系组织特异性和发育时期专一性,是用以研究真核基因表达与调控以及基因表达与细胞分化关系的理想体系。目前,国内外对人体β-类珠蛋白基因时空表达与调控分子机制的研究,引起了极大的关注。本文就几个方面作一简要概述。     

羟基脲(Hydroxyurea)对细胞周期与珠蛋白基因表达的影响(简报)

已有许多证据表明羟基脲能增加镰状细胞贫血及β-地贫病人的胎儿型血红蛋白(HbF)的合成。最近,有人报道羟基脲也能使一些患有β-地贫病人的β-珠蛋白基因表达增加。K562细胞是人红白血病细胞株,它只能表达胚胎型(ε-)与胎儿型(γ-)珠蛋白基因,而不能表达成年型(β-)珠蛋白基因。因此,K562     

与人体β—珠蛋白基因5‘旁侧正调控区（PCR）相结合的调控因子（简报）

Using gel mobility shift assay, three protein factors (Pa, Pb, Pc) binding to the positive control region (PCR) in the 5' flanking sequence of human beta-globin gene were detected in the nuclear extracts from mouse fetal liver at d 18 or d 19 of gestation. Competitive experiment showed that Pb and Pc could bind to GATA-1 motif, therefore could be the members of GATA family. While Pa was a new and developmental stage specific trans-acting factor, we suggested that the factor Pa was related to the activation of beta-globin gene.     

应用荧光原位杂交技术检测人βE珠蛋白基因在转基因小鼠染色体上的整合状态

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法,对小鼠腹腔注射秋水仙素后,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体,将传统的FISH方法加以改进,检测外源基因在转基因小鼠染色体上的整合状态.检测结果表明,外源人βE珠蛋白基因已稳定地整合于小鼠染色体上.FISH能直观地反映外源基因在转基因动物染色体上的整合状态,该方法可对转基因动物及基因转移研究中的外源基因整合后进行染色体定位检测。 Abstract:To determine the integration site of human βE globin gene in the chromosomes of transgenic mice, transgenic mice carrying human βE globin gene were injected intraperitoneally with colchicines, then, bone marrow cells wereisolated and metaphase chromosomes were prepared, the traditional FISH method was improved to detect the integration site of humanβE globin gene in transgenic mice when combined with G-banding. Human t3E globin gene can bedetected in different position of different chromosomes in transgenic mice and FISH signals showed that two mice were heterozygous of human 13E globin gene and one was homozygous. Human t3E globin gene was integrated into thechromosomes of transgenic mice in a random pattern and the results demonstrated that FISH can be used to investigate the integration site of foreign genes in transgenic mice.     

中国人α珠蛋白基因3′HVR多态分布的研究

本文以3’HVR为探针,对来自全国17省市的51名无血缘关系的健康人进行PvuⅡ限制性片段长度的多态分析,发现3’HVR在片段大小的变异范围及基因频率的分布上均有中国人的特点．结果表明,纯合子占15.7％,杂合子占84.3％,102个等位基因共有34个长度不同的等位片段,大小从2．0－70kb之间里连续分布,主要分布在2．0－25kb及4.0－6．0kb,频率分别为0．43和0．34．并与刘国仰、余裕炉等的资料进行综合比较,初步揭示了中国人群中3’HVR的多态特点．     

基因座控制区元件HS2、HS3对β-珠蛋白基因表达的调控

用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报道基因,通过构建不同的真核表达载体,并用脂质体转染法将其转染到K562及MEL细胞中,经流式细胞仪检测、半定量RT-PCR及荧光倒置显微镜下观察荧光表达情况,以研究HS2、HS3、HS2-HS3及近侧元件在瞬时表达中对β-珠蛋白基因启动子驱动下的EGFP表达调控情况.结果显示,3.2kb的HS2元件在K562及MEL细胞中均可增强β-启动子活性,而3kb的HS3仅在MEL细胞中有增强作用,且两者在两种细胞中均无明显协同作用.     

人β球蛋白基因5‘旁侧远端新沉墨子区的功能和鉴定

为探讨β珠蛋白基因５‘旁侧远端及／或δ－β基因间序列调控中所起的作用本文重组含不同长度５’旁侧远端上序列的β基因逆病毒载体并转染Ｈｅｌａ细胞,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ凶迹杂交和ＲＴ－ｃｐＣＲ竞争性定量检测β基因在Ｈｅｌａ细胞中的稳定表达水平,发现在β基因上游约１．８ｋｂ处存在一强默子活性区;进而通过竞争性凝胶阻滞分析主要定位于一长为３１０ｂｐ的ＤＮＡ片段中,从中发现众多调控相关序列;用荧光素酶报告基因瞬     

红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。