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111.
采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)302bp的cDNA片段,经补齐和提纯后插入pUC19质粒,获得的重组体pUN进行序列测定。将pUN的目的基因亚克隆进体外转录载体pSPORTI多克隆位点的EooRI和PstI切点之间,所得重组体pSN线性化后由T_7RNA多聚酶及SP6RNA多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物RT-PCR,证实SP6引导的是正义RNA,T7合成的是反义RNA,其大小分别力429bp和362bp。并证实所得RNA力HCV5'NCRcDNA转录而来。获得的HCV5'NCRcDNA和RNA在常规逆转录和PCR步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,HCV5'NCR体外转录载体的构建可用于制各RNA探针和反义RNA,改进后还可作为定量PCR的竞争性模板。 相似文献
112.
银杉遗传多样性的RAPD分析 总被引:44,自引:0,他引:44
用随机扩增多态 DNA(RAPD)标记方法对银杉(Chthaya argyrophylla)75个个体(采自湖南和四川)进行了遗传多样性检测. 21个 10 mer -的寡核苷酸引物共检测106个位点,其中多态位点34个,占32%.相对于其它裸子植物,银杉的遗传变异水平偏低.湖南居群和四川居群的多态位点百分率分别为 18%和 25%,两居群间的遗传变异量占总变异量的 7. 99%,这一数值高于裸子植物居群间遗传差异的平均值(6.8%).同时,发现遗传变异水平的高低与生境的复杂程度有一定的相关性.由于点突变和随机遗传漂变,银杉的部分亚居群间有较强烈的分化,亚居群间的遗传差异最高可达 16. 23%.此外,提出了度量遗传多样性水平的分化指数概念及其计算方法,并指出低水平的遗传多样性可能是银杉濒危的原因之一. 相似文献
113.
114.
以Wistar大鼠肝为材料,确立了一个简便的纯化鼠肝DNA甲基化酶的程序,包括:细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、DEAE-SephadexA-50柱层析及SephadexG-150凝胶过滤。用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测,纯化后的酶已达电泳均一,且酶的比活力提高112倍。以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得其天然酶的分子量为365kD,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶有两种亚基,大亚基为95kD,小亚基为85kD,推测该酶由两个大亚基和两个小亚基组成。 相似文献
115.
中国大陆若干群体的黑果蝇的线粒体DNA多态性研究 总被引:13,自引:2,他引:11
本文研究了果蝇D.virilis种群D.virilis线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)的多态性。用9种限制性内切酶XbaⅠ,EcoRⅠ,PstⅠ,HindⅢ,BglⅡ,SacⅠ,ScaⅠ,EcoRV和PuvⅡ,对青岛、南京、上海、宁波与泉州5个D.virilis群体的mtDNA进行了限制性片段长度多态性(restrictionfragmentslengthpolymorphism,RFLP)的研究。在5群体中,发现5种不同的酶切图谱,它们彼此之间的遗传差异π为0.46%-1.76%,群体内遗传差异πij为0.00%-0.33%,群体间的差异dxy,为0.00%-0.82%。分布于中国大陆的D.virilis的群体间遗传差异在总遗传差异中所占比例γst值为24.62%。我们发现,D.virilis的栖息环境对mtDNA的遗传变异有十分明显的影响,而不同地理纬度的群体之间其遗传距离并无倾群(cline)表现。 相似文献
116.
正常人各年龄组染色体着丝粒点(Cd)研究 总被引:5,自引:2,他引:3
翁亚光 王应雄 张湘蜀 吴春英 郑增淳WENG Ya-Guang WANG Ying-Xiong ZHANG Xiang-Shu WU Chun-Ying ZHENG Zeng-Chun 《遗传》1995,17(3):3-6
本文运用本室改良的Cd-NOR银染技术对80例4个年龄组的正常中国人的Cd变化进行了较系统的研究, 结果表明:(1)正常人随年龄增加,Cd消失的频率、Cd变异及Cd-NOR融合频率也相应增加,特别是Ⅲ、Ⅳ组(中、老年组)增加的频率尤为显著;(2)首次对Cd消失的过程提出了独特的观点,即Cd消失首先表现为Cd变小, 随着变小程度的加大,最终导致Cd消失;(3)在本研究中首次观察到单个Cd的现象,作者认为是细胞分裂中期染色体着丝一分为二的延迟现象。各年龄组间单Cd出现频率无统计学差异,同一年龄组中,2号染色体和1号染色体上单Cd出现频率显著高于理论值;(4)随年龄增高,Cd各项观察值的增高在男性与女性间未见明显的差异。
Abstract:The Cd variation of human chromosome in four groups of different age has been investigated.The result shows that the frequencies of Cd disappearing,size variation and Cd-NOR fusion increased with the age rising,especially in the group of aged people.We suggest that the variation of Cd shows the size changes first,and then disappears completely.We also observed some cells in which a few chromosomes shows only a single Cd in centromeric region.Cd variation in different age groups has no significant difference between the male and the female. 相似文献
117.
本文利用印迹杂交技术对中国华北地区黑线姬鼠Apodemusagrariuspalidior和韩国黑线姬鼠A.agrariuscoreae共107号标本的线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtD-NA),通过8种限制性内切酶的消化,进行了限制性片段的分析。共检出35种限制性片段和12种单倍体类型。12种单倍型在平均离散度为1.01%时聚合为两个亚群:一个亚群为黑线姬鼠华北亚种,由采自中国4个不同地区的51号标本的4种单倍型所组成;另一个亚群为黑线姬鼠朝鲜亚种,由采自韩国4个不同地区的56号标本的8种单倍型所组成。黑线姬鼠华北亚种和朝鲜亚种在mtDNA表型上表现出一定差异,这在分子水平上确立了两亚种的分类地位。为了进一步澄清黑线姬鼠种下分类的混乱,很有必要对中国其他地区的标本进行该项研究 相似文献
118.
对EcoRI作用于DNA的新认识邹国林皮新春(武汉大学生物化学与生物物理学系,武汉430072)关键词蛋白质与核酸相互作用EcoRI模体蛋白质与核酸的相互作用是分子生物学研究的中心问题之一。当前以阐明DNA结合蛋白的结构与蛋白质-DNA复合物的结构为... 相似文献
119.
甘蔗和烟草幼叶原生质体的核酸含量与核酸酶活性及其影响因素 总被引:1,自引:0,他引:1
与幼叶组织相比,酶法新鲜分离的甘蔗和烟草幼叶原生质体内的RNA、DNA及总核酸含量均降低。其原因可能是刚游离的原生质体内酸性和碱性RNA酶与DNA酶等活性提高所致。甘蔗叶原生质体内的核酸降低量和RNA酶与DNA酶活性的增加程度均高于烟草。随用作渗透压稳定剂的甘露醇浓度增加,甘蔗和烟草叶原生质体的RNA酶和DNA酶活性均相应提高。其中以甘蔗叶原生质体的核酸酶活性增加水平较明显。在细胞壁降解产物的作用下,除了甘蔗原生质体内的RNA酶活性略被促进外,其DNA酶和烟草叶原生质体内的核酸酶均不受影响 相似文献
120.
在体外系统中,发现超氧化物歧化酶(SOD)具有切割超螺旋DNA的活性. 猪血和牛血Cu/Zn-SOD以及烟草Mn-SOD都能将超螺旋DNA转变为非超螺旋结构的缺刻环状DNA,进一步产生线状DNA. 它们只作用于超螺旋DNA而不作用于线状DNA. 这个事实排除了SOD样品中污染核酸酶的可能性. 用H2O2、胍基抑制或蛋白酶降解的实验结果表明,这两种酶的活性中心处于酶蛋白的不同部位. 相似文献