细菌RNA分离试剂盒

Bioscience Technology 2003年7月31页报道：美国Amersham Biosciences公司最近推出GenomiPhi^TM DNA扩增试剂盒。利用这种试剂盒可从有限的生物材料制备高质量的DNA。这是一种简单的等温扩增技术，它不需要使用热循环器。原材料可以是来自全血、颊面拭子、细胞印迹纸、     

pSV—2neo和HPV—Ⅱ DNA共同转染NIH3T3细胞的结果

本实验将neo及HPV-11两种DNA共同转染NIH 3T3细胞,以G418抗生素作为选择剂,对诱导的转化灶进行筛选。同时还就G418对NIH 3T3细胞的毒性进行了观察。neo单独使用诱导的转化灶数为44.00/1×10~5;neo与HPV-11合用诱导的转化灶数为162.66/1×10~5。由neo转化的细胞含有neo基因,由neo和HPV-11转化的细胞内含有该两种基因。     

白细胞介素2受体α链基因转录起始点和5'调控区结合蛋白的初步研究

 借助于5'和3'末端删切后重建的IL-2R a链基因调控区次级克隆,在体外合成有放射性同位素参入的反意义RNA探针与总RNA进行液相杂交,结果表明TPA或PHA分别活化的T细胞在IL-2R a链表达过程中都在不同程度上有选择地利用了调控区内分别为-58(5')和+1(3')位两个转录起始点中3'转录起始点。热休克使PHA活化细胞更明显地利用+1位点。PHA诱导Jurkat细胞表达IL-2RamRNA斑点杂交证实,Jurkat细胞在活化16小时表达IL-2Ra基本达到高峰,至24小时已明显下降。根据这一规律提取PHA诱导活化15小时的Jurkat细胞S100和NE,进行有关结合蛋白的研究,初步结果显示磷酸纤维素柱的KCI洗脱组分中存在着DNA结合蛋白,有关结合蛋白性质的研究正在进行中。     

彻底清除转化体中野生型DNA的专一位点诱变方法

我们设计了一种高效的专一位点诱变方法,可从混合体中清除野生型ＤＮＡ。并将所需突变ＤＮＡ转入被转化细胞中,如此合成了与一种ＤＮＡ分子目标序列一致的并带有能产生限制性内切酶位点的插入突变的两条互补的寡核苷酸链。利用野生型ＤＮＡ分子中的两端各有两个限制性位点的一段目标ＤＮＡ片段作为模板,上述合成的两种寡核苷酸引物被延伸、富集并分离。被延伸的产物在聚合酶链式反应中又反过来被用作模板,以获得突变的双链ＤＮＡ片段,此片段通过其两端的限制性位点能很方便地用侧面限制性内切位点克隆到质粒中去。用这些质粒转化的大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）细胞可进行大量的分析。通过集落杂交试验、限制性内切酶分析和ＤＮＡ序列分析,得知这些转化体百分之百含有突变型的ＤＮＡ序列。     

人体肝癌及其相关慢性肝病的肝细胞DNA含量定量分析

利用图像分析技术对轻度慢性活动性肝炎（ＭＣＡＨ）、重度慢性活动性肝炎（ＳＣＡＨ）、小结节肝硬变（ＭＩＮＣ）、大结节肝硬变（ＭＡＮＣ）、癌周肝硬变（ＰＣ）和肝细胞癌（ＨＣＣ）及正常对照共６７例样本的肝细胞或癌细胞ＤＮＡ含量进行测定分析。结果（１）ＭＣＡＨ、ＳＣＡＨ和ＭＡＮＣ多倍体化受抑制,显示细胞分化能力下降,可能与肝癌的发生相关;（２）ＨＣＣ均为异倍体肿瘤,细胞具有较高的增殖能力并处于较低的分化状态;（３）ＰＣ倍体分布和双核细胞率介于其他非癌病变和ＨＣＣ之间,细胞分化受抑制且有向异倍体发展趋势,具有癌前病变性质;（４）ＭＩＮＣ明显多倍体化,为分化性的再生修复病变而与肝癌发生无关。因此肝细胞ＤＮＡ含量的定量分析对于了解肝细胞的增生状态,以及患者的预后评估有重要意义。     

一种纯化双链DNA测序模板的有效方法

以变性质粒ＤＮＡ为模板的核苷酸序列分析（又称双链ＤＮＡ测序）的结果会受到诸多因素的影响。然而,模板的制备及其纯度显得尤为重要。本试验对以三种方法纯化的质粒为模板的测序结果作了比较,结果显示．能为普通实验室所采纳的二氧化硅吸附法操作上简单、重复性好,其结果可与Ｍ１３顺序分析系统相媲美。