慢性高剂量胰岛素刺激猪脂肪细胞脂肪分解

为研究慢性高剂量胰岛素对猪脂肪细胞脂肪分解的影响及其分子机制, 分化的猪脂肪细胞在PKA(Protein kinase A)或ERK(Extracellular signal-related kinase)抑制剂预处理或不处理的情况下, 再用不同浓度的胰岛素(0、200、400、800、1600 nmol/L)处理不同时间(24、48、72、96 h), 通过测定甘油释放量检测脂肪细胞的脂解率; 采用RT-PCR和Western blotting检测perilipin A和PPARg2的mRNA和蛋白表达。结果显示, 慢性高剂量胰岛素以剂量和时间依赖性的方式刺激猪脂肪细胞的脂肪分解, 并削弱脂肪细胞对异丙肾上腺素刺激的脂解应答; 同时显著下调perilipin A和PPARg2的mRNA及蛋白表达; 另外, PKA和ERK抑制剂均显著抑制胰岛素刺激的脂肪分解, 但仅ERK抑制剂显著逆转perilipin A基因表达的下调。由此推测, 慢性高剂量胰岛素通过ERK通路抑制perilipin A的表达, 进而刺激猪脂肪细胞的脂肪分解。     

TiO_2纳米管阵列的表面特性对猪肾小管上皮细胞生长状态的影响

TiO2纳米管阵列由于其优异的生物相容性及光催化效应,在生物医学领域引起了广泛关注.但能否将肾小管上皮细胞较好地黏附于TiO2纳米管材料并使其发挥肾小管的功能,目前还未见报道.为研究TiO2纳米管材料的表面特性对猪肾小管上皮细胞株（LLC-PK1）的黏附及增殖影响,采用阳极氧化法制备新型高强度的TiO2纳米管阵列,利用荧光显微镜考察了TiO2纳米管阵列光照特性、晶型结构及几何形貌参数对LLC-PK1细胞黏附的影响,采用MTT方法检测了黏附细胞的活性;同时使用扫描电子显微镜观察了4种不同管径上细胞生长的形态,并与纯钛片上细胞的生长形态进行对照.结果表明,管径为70nm的TiO2纳米管阵列膜最有利于LLC-PK1细胞的黏附及增殖,且细胞的活性最高;未经紫外光照射时锐钛矿型的TiO2比无定型更有利于细胞的黏附,然而锐钛矿型TiO2经紫外光照射后会导致细胞凋亡.扫描电子显微镜观察显示,细胞在纳米管上延伸为长条状,而在钛片上则呈堆积平板状.证实TiO2纳米管阵列膜具有良好的生物相容性,有助于改善细胞与材料的黏附.     

猪防御素PD基因表达载体的构建

目的：构建猪防御素PD基因表达载体。方法：化学合成经过适当改造的带有双酶切位点的PD基因,将该基因定向插入带有相同酶切位点的融合表达质粒PinPoin^TMXa-3的多克隆位点构建表达质粒。结果：构建的表达载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,表明PD基因表达载体构建成功。结论：PD基因表达载体的构建,为进一步获得PD基因的表达产物,研究其抗菌活性、抗菌机理打下基础。     

小型猪动脉粥样硬化模型

动脉硬化（arteriosclerosis）泛指动脉变硬,由于形态特征不同分为三种疾病,动脉粥样硬化是最主要的一种动脉硬化疾病,其病灶累及弹性动脉和较多弹性纤维的肌性动脉,典型的动脉粥样硬化病灶内含有大量的脂质和坏死细胞构成的“粥样”成分。另两种动脉硬化疾病分别为门克伯格氏中膜钙化性硬化（Mfinckeberg medial calcific sclerosis）和微（小）动脉硬化（arteriolosclerosis）     

猪细小病毒分子生物学研究进展

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一,研究发现该病毒在进化史上相对保守,对宿主专一性高,但近年来相继发现的PPV2和PPV香港株(Porcine HoKovirus,PHoV)与PPV差异较大,对PPV、PPV2和PHoV的基因组结构、分子进化研究、复制培养现状及其蛋白表达方面研究进行了简单综述,为猪细小病毒多样性研究提供参考。     

猪细小病毒PK-15细胞适应株的培育及增殖特性

为了研究猪细小病毒不同接毒方式的增殖规律及在不同细胞的病毒含量差异。本实验利用PK-15细胞对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)分离株进行适应性培养。针对PPV的NS1基因设计特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法。利用该方法检测PPV分离株同步和分步接毒的病毒含量,绘制一步生长曲线;同时检测PPV在HeLa、MDBK、PK-15、ST、F81、BHK-21和Marc-145细胞上的增殖特性。结果显示,PPV分离株盲传至12代产生CPE,继续传代培养10代仍能产生稳定的细胞病变,成功培育出PK-15细胞适应株。一步生长曲线显示,分步接毒的病毒含量高于同步接毒,而增殖周期短于同步接毒;PPV在不同细胞的增殖结果显示,各细胞开始出现CPE的时间依次为PK-15、ST、HeLa和MDBK,病毒含量高低依次是ST、PK-15、MDBK和HeLa,而不能在F81、BHK-21和Marc-145细胞上增殖。本实验首次利用荧光定量PCR方法成功分析PPV不同接毒方式的增殖规律及不同细胞的增殖特性,为PPV基础研究和疫苗生产提供资料。     

猪源乳酸杆菌对鼠伤寒沙门氏菌DT104在猪肠道上皮细胞IPEC-J2上粘附的影响

采用猪肠道上皮细胞株IPEC-J2体外培养模型,考察9株猪源乳酸杆菌对IPEC-J2细胞的粘附特性,以及对鼠伤寒沙门氏菌DT104粘附的竞争、排斥、置换和抗侵袭作用.结果显示,9株乳酸杆菌均能粘附IPEC-J2细胞,粘附率在0.1%～10%之间,具有菌株特异性和浓度效应.乳酸杆菌和沙门氏菌同时加入细胞培养,能竞争性抑制沙门氏菌的粘附,并具有浓度效应,高浓度(109 CFU/mL)添加K30、K67和K16时,抑制率可达80%以上.乳酸杆菌预处理细胞后再加入沙门氏菌,高浓度乳酸杆菌可降低沙门氏菌粘附率40%～70%,而中浓度(108 CFU/mL)乳酸杆菌能抑制23%～33%沙门氏菌对细胞的侵入.但是,只有高浓度添加乳酸杆菌能置换已经粘附的沙门氏菌,置换率在12%～84%之间.该结果为临床上筛选乳酸杆菌,有效防治猪沙门氏菌病提供了一条新的途径.     

猪戊型肝炎病毒防控及研究策略分析

戊型肝炎为人畜共患病病原, 猪是主要的病毒储库。我国猪场戊肝病毒流行情况复杂, 猪感染率高, 同一地点存在3型或/和4型两种基因型混合污染。病毒存在基因重组和准种现象, 为病毒遗传进化提供了遗传基础。当前猪戊肝感染人的主要媒介为污染的猪肉及其制品, 其他感染机制和途径还有待进一步阐明。应加强对猪HEV与猪场其他流行病原体相互关系的研究, 同时应加强猪HEV相关信息的积累分析包括对猪HEV感染特性和遗传特性进行实时监测, 将猪HEV流行情况纳入兽医公共卫生预警体系, 实现常态跟踪。     

猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种快速、特异、敏感的检测血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法。【方法】利用生物学软件对PEDV S蛋白进行抗原位点分析,选择S蛋白的主要抗原表位区进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。用纯化的重组蛋白作为包被抗原,经过条件优化、特异性和重复性试验,建立一种针对血清中PEDV抗体的间接ELISA检测方法。【结果】表达了重组S蛋白,重组的S蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性反应,并建立一种基于重组S蛋白的间接ELISA检测方法。组内及组间变异系数均小于10%,重复性较好。建立的间接ELISA检测方法分别与商品化PEDV抗体检测试剂盒和Western-blot鉴定结果相比,两者符合率分别为86.67%和88.89%。【结论】建立的间接ELISA方法可以用于PEDV抗体的检测。