C-Terminus-Mediated Voltage Gating of Arabidopsis Guard Cell Anion Channel QUAC1

Anion transporters in plants play a fundamental role in volume regulation and signaling. Currently, two plasma membrane-located anion channel familiesmSLAC/SLAH and ALMTmare known. Among the ALMT family, the root-expressed ALuminium-activated Malate Transporter 1 was identified by comparison of aluminum-tolerant and Al3＋-sensitive wheat cultivars and was subsequently shown to mediate voltage-independent malate currents. In con- trast, ALMT12/QUAC1 （QUickly activating Anion Channel1） is expressed in guard cells transporting malate in an Al3＋- insensitive and highly voltage-dependent manner. So far, no information is available about the structure and mechanism of voltage-dependent gating with the QUAC1 channel protein. Here, we analyzed gating of QUACl-type currents in the plasma membrane of guard cells and QUACl-expressing oocytes revealing similar voltage dependencies and activation- deactivation kinetics. In the heterologous expression system, QUAC1 was electrophysiologically characterized at increas- ing extra- and intracellular malate concentrations. Thereby, malate additively stimulated the voltage-dependent QUAC1 activity. In search of structural determinants of the gating process, we could not identify transmembrane domains com- mon for voltage-sensitive channels. However, site-directed mutations and deletions at the C-terminus of QUAC1 resulted in altered voltage-dependent channel activity. Interestingly, the replacement of a single glutamate residue, which is con- served in ALMT channels from different clades, by an alanine disrupted QUAC1 activity. Together with C- and N-terminal tagging, these results indicate that the cytosolic C-terminus is involved in the voltage-dependent gating mechanism of QUAC1.     

农杆菌介导的日本落叶松胚性细胞遗传转化研究

基于体细胞胚胎发生技术平台,利用携带pSuper1300+质粒,以潮霉素为筛选标记基因的农杆菌GV3101介导日本落叶松遗传转化,对植物受体材料生理状态、农杆菌浓度和浸染时间以及共培养时间等影响因素进行了研究、分析和讨论.结果表明:综合优化各影响因素,生长旺盛的日本落叶松胚性细胞,经浓度为0.4(OD600)的农杆菌浸染10min,共培养2d,再用含400mg/L的头孢霉素的液体培养基清洗脱菌,然后在含400mg/L的头孢霉素固体培养基上恢复培养,并置于含5mg/L潮霉素的固体培养基上多次筛选,最终共获得54个抗性细胞系,转化率平均为0.94个/g.PCR检测鉴定,所有抗性细胞系均为阳性转化体,并排除了农杆菌污染导致的假阳性.研究建立并优化了农杆菌介导的日本落叶松遗传转化技术,为进行遗传改良和基因功能鉴定提供有利平台.     

慢病毒介导荧光素酶表达的人鼻咽癌细胞小鼠模型的建立

目的：建立荧光素酶标记的人鼻咽癌细胞裸鼠模型,活体成像系统监测肿瘤的生长并与肿瘤的体积进行对比。方法：构建表达荧光素酶基因2（1uc2）的慢病毒载体,与辅助质粒共转染293T细胞以制备慢病毒,感染人鼻咽癌SUNEl细胞后经嘌呤霉素筛选获得表达luc2的细胞株。活体成像设备体外检测不同数量细胞的发光强度,最后以5×10 6个细胞皮下接种BALB／cnu／nu裸鼠,活体成像系统动态记录接种后肿瘤的信号并与肿瘤的体积对比。结果：成功构建慢病毒表达质粒pLenti．1uc2并包装出慢病毒颗粒,病毒感染后嘌呤霉素筛选6天得到鼻咽癌细胞株SUNEl一luc2。细胞株传代后有稳定的发光强度,且经活体检测的每秒光子数与细胞数成正相关（R2=0．96）;活体成像观察发现裸鼠接种第2天接种部位的发光强度就达到3-2×10^8,而且成瘤过程中发光强度的变化与肿瘤大小一致。结论：成功构建适用于活体成像的人鼻咽癌SUNEl细胞的裸鼠成瘤模型,该模型从细胞接种开始即可有效动态监测鼻咽癌皮下瘤的生长及转移,从而为鼻咽癌的成瘤机制及药物干预研究提供一个新的手段。     

苦瓜果实β-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及亚细胞定位

根据已构建苦瓜果实均一化文库中获得的1个与β-Gal基因相关的EST序列,采用经3’RACE技术,克隆获得1 个苦瓜β-Gal基因的cDNA 序列McGAL,全长为2261bp,开放阅读框2187bp,编码719个氨基酸。该基因在GenBank 基因数据库的登录号为AFD54987.1。应用生物信息学软件对McGAL氨基酸序列分析表明,McGAL含有糖苷水解酶家族35的保守结构域G-G-P-[LIVM]-x-Q-x-E-N-E-[FY],C端不含凝集素结构域。二级结构显示,该酶含有α-螺旋（19.89%）,伸展链（26.98%）,β-转角（6.54%）和无规卷曲（46.59%）。McGAL氨基酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、绿豆、大豆、羽扇豆的氨基酸序列的同源性分别达到73%、73%、73%、72%和71%。亚细胞定位结果表明,McGAL定位在线粒体膜上。荧光定量结果表明,McGAL在果实绿熟期表达量最高并随之下降,该基因可能与果实成熟软化初期相关。     

PNAS：一种肿瘤抑制因子作用机理查明

据美国每日科学网报道,美国斯坦福一伯纳姆医学研究所的研究人员日前发现一种名为PKCzeta的酶,能够抑制前列腺肿瘤的形成,并在实验鼠和人体中同时获得了证实。此外,该研究还描述了一条控制肿瘤细胞生长和转移的分子通路。研究人员称。这一发现是前列腺癌治疗领域的一项重大进展。将有助科学家开发出新的方式来控制肿瘤的进展。相关论文近日发表在美国《国家科学院院刊》上。     

外周血树突状细胞CD83＋表达对胃癌术后病人预后影响及意义

目的：探讨胃癌外周血中树突状细胞CD83＋表达对预后的影响及意义。方法：选取2010年1月至2011年6月间我科收治的胃癌病人74例进行分析,均为原位癌或仅有局部淋巴结转移,以外周血树突状细胞CD83＋为研究对象,以术后生存时间为标准,对病人手术预后进行分析。结果：所选74例病人术后3周测得外周血树突状细胞CD83＋表达频数平均值（7．32＋1．88脚,以表达频数中位数7．32％为标准将74例病人分为高频组和低频组两组,每组37人。术后总体生存时间108周-413周,平均生存时间（207＋227）周,其中高值组平均生存时间（247＋121）周,低值组平均生存时间（118＋54）周,两组生存时间具有明显差别（P〈O．05）。结论：胃癌外周血中树突状细胞CD83＋的表达对接受手术病人预后有重要影响,可以作为判断病人预后的参考依据,对预后不良者加以对症及时干预以降低死亡率。     

Wnt5a抑制Wnt3a促黑素细胞黑素生成的作用探究

目的：研究WntSa对Wnt3a处理过的melan—a细胞分泌黑色素的影响。方法：体外培养黑色素细胞（melan-a细胞）,分别进行GFP、Wnt3a、Wnt3a＋WntSa处理,比较细胞的突起,酪氨酸酶的活性以及黑素合成相关基因（TYR、TRP2、MITF）表达情况。结果：Wnt3a促进黑色素细胞突起的生长和TYR、TRP2、MITF的表达,而Wnt5a逆转了Wnt3a对黑色素细胞的作用。结论：Wnt5a抑制Wnt3a促黑素细胞黑素生成的作用,表明在melan．a黑素细胞中Wnt5a可有效抑制wnt经典通路。     

无融合生殖悬铃叶苎麻（Boehmeria tricuspis）多倍性发生的染色体行为研究

摘要：对无融合生殖悬铃叶苎麻（2n=42）和有性生殖悬铃叶苎麻(2n=28)花粉母细胞（PMC）减数分裂行为进行比较研究,从而推断两者之间的进化关系;探索无融合生殖悬铃叶苎麻（B.tricuspis）发生的细胞遗传学基础,为无融合生殖发生的遗传学研究提供理论依据。在无融合生殖类型经诱导所产生的PMC的减数分裂过程中,发现有丰富的三价体形成,属典型的同源三倍体减数分裂行为特征;而有性生殖类型 PMC的减数分裂行为绝大多数正常,但也存在少量异常现象。其中有些异常行为,可能与未减数配子（2n）的形成紧密相关。因而推断,在有性生殖类型的生殖过程中,可能发生了未减数配子（2n）与减数配子（n）的融合,产生了同源三倍体合子。这应该是无融合生殖悬铃叶苎麻发生的重要的细胞遗传学基础。     

抗肿瘤多肽研究进展

近些年,具有抗肿瘤生物活性的人工合成多肽受到广泛的关注.尽管受技术条件的制约,目前多数抗肿瘤肽类药物的半衰期较短,但抗肿瘤肽类药物具有其独特的优势:它们分子量小、抗肿瘤特异性高、免疫原性低,并且易于合成和改造.目前,多种抗肿瘤肽及其衍生物已上市或进入临床研究,以肽为基础的治疗不仅高效低毒,还可以增加肿瘤对其他治疗方法的敏感度,对于肿瘤的临床治疗将具有重要价值.综述了诱发肿瘤坏死活性肽、细胞凋亡肽及功能阻断肽等几种新型天然抗肿瘤活性肽诱发肿瘤死亡的作用,并归纳其应用前景.     

玉米种质资源抗南方锈病鉴定

玉米南方锈病已成为近几年我国夏玉米生产区间歇性暴发流行的病害,对玉米生产构成严重威胁,病害流行年份可造成10%以上的产量损失。目前,已确认的抗病自交系非常有限,而抗病育种急需不同抗性控制背景的自交系。为发掘和丰富可利用的南方锈病抗源,于2008～2012年,在广西南宁采用田间人工接种方法对1589份玉米种质资源进行抗南方锈病鉴定。通过高病害压力和连续多年的鉴定,从1589份玉米种质中鉴定出高抗（HR）材料26份,占鉴定总数的1.64%;抗病（R）材料137份,占鉴定总数的8.62%;中抗（MR）水平的材料382份,占鉴定总数的24.04%;感病（S）材料489份,占鉴定总数的30.77%;高感（HS）材料555份,占鉴定总数的34.93%。总体上抗南方锈病种质较少,引进种质中抗病类型材料的比例略高。经重复鉴定,筛选出赤556等18份自交系、老来秕等3份地方品种、A69等4份来自津巴布韦的材料、引自CIMMYT的Dr11表现稳定高抗南方锈病,为今后我国玉米抗南方锈病育种提供了新的抗性资源。