海马齿状回内beta肾上腺素能受体对睡眠剥夺大鼠空间学习记忆的作用及其机制*

目的: 探究海马齿状回(DG)内beta肾上腺素能受体(beta-AR)对睡眠剥夺(SD)大鼠空间学习记忆的作用及其机制。方法: 本研究应用剥夺杆式睡眠剥夺仪建立21 d(18 h/d)慢性SD模型。动物分为4组(n=6):对照组,ISO组(异丙肾上腺素组),SD组和SD+ISO组。每天训练前30 min,以0.5 ml/min速度向DG区微量注入ISO (2 mg/μl) 或盐水1 ml。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。免疫组织化学和免疫印迹法检测海马DG区c-Fos和脑源性神经营养因子(BDNF)表达。结果: 与对照组相比, SD组大鼠前4 d逃逸时间显著增加(P＜0.01),且第5日目标象限时间比和穿台次数明显减少(P＜0.05),与SD组相比SD+ISO组上述行为学指标显著改善(P均＜0.05)。与对照组比较,SD组大鼠海马DG区c-Fos和BDNF蛋白表达水平均显著降低(P均＜0.05),然而与SD组比较,SD+ISO组两蛋白表达水平明显增加(P均＜0.05)。结论: 海马DG区beta-AR激活可改善SD诱发的空间学习和记忆障碍,其机制可能与上调DG区c-Fos和BDNF蛋白表达有关。     

不同时间段睡眠剥夺配合改良式水合氯醛保留灌肠法在婴幼儿肺功能检查中的效果分析

摘要 目的：探讨不同时间段睡眠剥夺配合改良式水合氯醛保留灌肠法在婴幼儿肺功能检查中的镇静效果。方法：前瞻性选取2018年2月~2020年8月本院收治并需行肺功能检查的婴幼儿临床资料,纳入194例婴幼儿作为研究对象,根据随机数字表法简单随机分为四组。对照组（n=48）不进行睡眠剥夺,短时段组（n=48）行短时段睡眠剥夺,中时段组（n=49）行中时段睡眠剥夺,长时段组（n=49）行长时段睡眠剥夺。对比四组婴幼儿的入睡时间、镇静效果及不良反应。结果：四组婴幼儿入睡时间的组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比,联合睡眠剥夺干预的三组婴幼儿在10 min内进入睡眠的例数明显增多;随着睡眠剥夺时间增加,睡眠剥夺的三组婴幼儿超过30 min才进入睡眠的例数明显少于对照组。四组婴幼儿镇静效果的组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）;与对照组相比,联合睡眠剥夺干预的三组婴幼儿镇静效果明显升高,镇静总有效率均高于对照组（P＜0.05）。在实验期间,四组婴幼儿均出现不同类型的不良反应,各类型不良反应发生率及总发生率的组间比较,差异均无统计学意义（P>0.05）,但长时段组出现情绪烦躁的比例略高。结论：睡眠剥夺配合改良式水合氯醛灌肠法对婴幼儿具有良好的镇静效果,但长时段睡眠剥夺可能会使其情绪烦躁,需在检查完成后悉心安抚婴幼儿情绪。     

烟草远缘杂种合子中父本特异表达基因EB30的克隆与分析

已知烟草远缘杂种的合子中EB30基因(EST序列号EB426694)的表达具有父本特异性。参考NCBI的EST序列设计引物,克隆得到该基因的CDS序列,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析。使用染色体步移和hi TAIR-PCR技术获取EB30基因的5'侧翼序列(启动子和5'UTR)。构建由该基因5'侧翼序列驱动的EB30-EGFP融合蛋白表达载体并转化烟草。结果表明,EB30蛋白由211个氨基酸组成,蛋白分子量为22.616 2 k D,等电点p I为5.63。该蛋白具有亲水性,可能定位于线粒体中。烟草EB30蛋白与同属茄科的番茄和马铃薯的蛋白序列相似度最高,约为73%。不同物种的同源蛋白的N端和C端都具有一段较为保守的序列区段。观察转基因植株合子和二胞原胚能检测到较强荧光,证实所获EB30基因的5'侧翼序列在早期胚胎发生时期具有启动子活性。     

二十二碳六烯酸对氧糖剥夺环境下大鼠脑星形胶质细胞凋亡及血管生成因子分泌的影响

摘要 目的：评价二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)预处理对氧糖剥夺环境下(Oxygen and glucose deprivation,OGD)大鼠脑星形胶质细胞凋亡及血管生成因子分泌的影响。方法：大鼠脑星形胶质细胞传代培养,第3~4代用于实验。采用随机数字法将培养的细胞分为6组：正常对照组、OGD组、OGD+10 μMDHA组、OGD+40 μMDHA组、OGD+10 μMDHA+GW9662组、OGD+40 μMDHA+GW9662组。在所有缺氧模型组(除正常对照组外)先用无糖、无血清的DMEM液置换原培液;其次在OGD+10 μMDHA、OGD+40 μMDHA、OGD+10 μMDHA+GW9662、OGD+40 μMDHA+GW9662组加入相应浓度的DHA,同时在OGD+10 μMDHA+GW9662组和OGD+40μMDHA+GW9662组加入5 μM GW9662(过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ的抑制剂)。预处理完成后,正常对照组和其余各组分别在5% CO₂:95%空气和94％N₂:5％ CO₂:1％O₂条件下培养24 h。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附剂测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测培养上清液中的促血管生成素1（Angiopoietin-1,Ang1）、促血管生成素2（Angiopoietin2,Ang2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌量,Western blotting法检测Bax、Bcl-2、caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,其余组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达水平明显增加(P＜0.01),而Bcl-2、Bcl-2/Bax表达明显降低(P＜0.01)。与OGD组比较,OGD+10 μMDHA组和OGD+40 μMDHA组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达水平明显降低(P＜0.01),而Bcl-2、Bcl-2/Bax表达明显增加(P＜0.01);Ang1分泌量明显增加(P＜0.01),而Ang2和VEGF分泌量明显降低(P＜0.01);上述各指标的差异在OGD+40 μMDHA组里更加显著(P＜0.01)。与OGD组比较,OGD+10 μMDHA+GW9662和OGD+40 μMDHA+GW9662组各个观察指标均无明显差异(P＞0.05)。相关性统计分析结果显示细胞凋亡率与Ang1水平呈显著负相关(P<0.01),与Ang2和VEGF的水平呈显著正相关(P<0.01)。结论：二十二碳六烯酸(DHA)预处理能够减少大鼠脑星形胶质细胞在氧糖剥夺(OGD)环境下的凋亡,其机制与增加Ang1分泌,减少Ang2和VEGF分泌,进而调控Ang/Tie2信号通路相关。     

短暂的糖氧剥夺导致小鼠黑质核团的即时性损伤

为研究运动控制关键核团黑质在代谢负荷下发生的即时性损伤,研制了多通道组织灌流槽,改进了以MTT、甲酚紫染色考察脑组织损伤的方法,获得了20 min的短时程糖氧剥夺所引起的小鼠黑质区即时性功能和形态损伤的组织化学依据。1)MTT检测显示,糖氧剥夺使黑质区域MTT与线粒体琥珀酸脱氢酶的反应产物甲臜晶体密度减少,并且这种减少在黑质的中部到吻侧的背部区域最为明显(约42.5%);2)甲酚紫染色结果表明,糖氧剥夺不影响脑片黑质区面积和着色斑块的数密度,而使斑块的平均面积减低(6.9%)。上述研究结果提示短时程糖氧剥夺可导致黑质区空间依存性的线粒体功能损伤,并且具有与凋亡相似的形态学特征。     

慢性睡眠剥夺加重APP/PS1/tau小鼠学习记忆能力和病理损伤

睡眠在认知功能和情绪的调节过程中发挥重要作用。近年研究显示,睡眠障碍是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)重要的危险因素之一,但慢性睡眠剥夺对于AD模型小鼠认知功能的影响及其机制尚不明确。本研究采用改良多平台法对8月龄雄性APP/PS1/tau三转基因AD模型(3xTg-AD)小鼠和野生型(wild type, WT)小鼠(每组8只)进行连续21天、每天20 h的睡眠剥夺。睡眠剥夺结束后,采用旷场、高架十字迷宫、糖水偏好、物体识别、Y迷宫和条件恐惧记忆实验等多种行为学手段观察慢性睡眠剥夺对3xTg-AD小鼠的焦虑和抑郁样行为以及多种认知功能的影响,并通过免疫组织化学染色观察小鼠海马区β淀粉样蛋白(amyloidβprotein, Aβ)斑块沉积、神经原纤维缠结和小胶质细胞的活化程度。结果显示:(1)慢性睡眠剥夺未影响3xTg-AD小鼠的焦虑(P=0.539)和抑郁样行为(P=0.874);(2)慢性睡眠剥夺加重了3xTg-AD小鼠的识别记忆(P 0.001)、工作记忆(P=0.002)和条件恐惧记忆能力(P=0.039)损伤;(3)慢性睡眠剥夺增加了3xTg-AD小鼠海马区Aβ斑块的沉积(P 0.001)和小胶质细胞的过度活化(P 0.001),但并未导致tau蛋白异常磷酸化和神经原纤维缠结出现。以上结果表明,慢性睡眠剥夺加重了3xTg-AD小鼠的识别记忆、工作记忆和条件恐惧记忆能力损伤,且其损伤作用与3xTg-AD小鼠海马区Aβ斑块沉积增加和小胶质细胞过度活化密切相关。     

24h睡眠剥夺后作业效率与心率变异性的变化

目的:探索24h睡眠剥夺(Sleep Deprivation,SD)后作业效率和心率变异性的变化.方法:通过观察8名健康男性在24h睡眠剥夺前后的作业效率、主观脑力负荷和心率变异性的变化,寻找与脑力疲劳相关的敏感指标.结果:在24h睡眠剥夺后,NASA-TLX评分呈显著性增加(p＜0.05),75°立位时HF呈显著性减少(p＜0.05),TINN、LF/HF呈显著性增加(p＜0.05).结论:NAsA-TLX量表从主观感受上很好的反映了脑力疲劳后工作绩效下降的变化,HRV的变化主要原因在于24h SD后迷走神经活性降低,交感神经相对加强.     

miR-32-3p通过靶向Smad3调节氧糖剥夺/再灌注损伤中的细胞活力

该文探讨了miR-32-3p通过靶向Smad3调节氧糖剥夺/再灌注损伤中的细胞活力。通过利用SK-N-SH细胞构建了一个研究脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)模型。通过生物信息学预测miR-32-3p的靶基因并进行功能注释和筛选;通过双荧光素酶报告实验、实时定量PCR、Western blot、CCK-8和活/死细胞检测等实验检测miR-32-3p通过靶向Smad3对细胞活力的影响。结果显示,Smad3是miR-32-3p的新靶点,并且在SK-N-SH OGD/R模型中miR-32-3p表达上调。CCK-8分析表明,与miR-32-3p抑制剂对照组和shNC组相比,sh-Smad3和miR-32-3p抑制剂+sh-Smad3组的细胞活力显著降低。随后,活/死细胞活力测定进一步支持了这些结果。与抑制剂NC和shNC组相比,sh-Smad3和miR-32-3p抑制剂+sh-Smad3组中可观察到更多以红色荧...     

利用等位酶对油松无性系种子进行父本分析

利用水平淀粉凝胶电泳8种酶10个位点34个等位基因,对辽宁兴城油松无性系种子园中17个无性系20个单株的200粒种子作了父本分析。无性系雄花量的多少与授粉果率并不成正比;不同无性系对花粉的接受存在一定的选择性,分析试样单株与周围的无性系并没有构成固定的授粉组合,说明授粉期风向等气象因子,无性系的雌雄花器的构造,受精等对受粉的成败都有作用,种子园结实初期自交现象并不明显,在分析试样中只有16＃,17＃,19＃无性系存在自交现象;种子园内花偻的有效传播一般在半径30m范围内,同时,分析了种子园子代的等位酶变异和空间遗传结构,从另一侧面反映出采种母树周围花粉分布比较均匀,并说明散粉期间风向等气象因子对授粉成败影响较大。     

δ-联蛋白通过AKT信号通路调控OGD/R后的炎症反应

δ-联蛋白(delta-catenin)作为高表达于神经系统的黏附蛋白质,在神经系统的功能发挥中有着至关重要的作用,但其在缺血缺氧性脑病中的研究尚未见报道。本文通过体外培养原代皮层神经元,构建氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）模型。用Western 印迹、LDH等方法显示,与对照组相比,δ-联蛋白在OGD/R模型后的不同时间点（0、4、12、24 和48 h）表达呈先降低后升高的趋势。在12 h表达量最低（0.48±0.08 vs 1.53±0.18,P<0.05）,在48 h表达升高到对照组水平（1.35±0.15 vs 1.53±0.18,P>0.05）。用siRNA慢病毒干扰δ-联蛋白表达后,ELISA结果显示,和对照组相比,OGD/R后,IL-1β和IL-18升高（24.80±1.64 vs 12.75±0.87,28.12±2.69 vs 12.99±1.24,P<0.05）,但在干扰δ-联蛋白表达后,和OGD组相比,IL-1β和IL-18释放降低（12.81±0.78 vs 24.80±1.64,14.27±1.37 vs 28.12±2.69,P<0.05）。Western 印迹结果显示,AKT信号通路磷酸化位点Ser 473活化增高（1.08±0.04 vs 0.85±0.06,P<0.05）,但Thr 308位点活化无改变（1.17±0.06 vs 1.11±0.08,P>0.05）。在siRNA慢病毒干扰并且联合使用AKT信号通路抑制剂GSK 690693后,和OGD+siRNA组相比,IL-1β和IL-18释放增高（24.58±0.99 vs 12.81±0.78,31.62±2.23 vs 14.27±1.37,P<0.05）。上述结果显示,δ 联蛋白通过AKT信号通路调控OGD/R后的炎症反应,这可作为δ-联蛋白功能研究的新的实验依据。