幼猫单眼视剥夺和反缝过程中显示的双眼竞争机制

本研究以光栅为刺激所同时产生的图形视觉诱发电位和图形视网膜电图为指标,测定了单眼视剥夺和缝的新生幼猫个体在发育不同阶段的空间频率调谐曲线,并与同龃正常猫,成年正常猫进行了比较研究。结果显示,在０．１２－１．５ｃ／ｄ空间频率范围内,正常幼猫单独刺激其左眼和右眼所驱动的Ｐ－ＶＥＰ振幅相近,但都明显地比双眼驱动的为小。在单眼剥夺的幼猫,由剥夺眼所驱动的Ｐ－ＶＥＰ振幅大幅度下降,健康眼所驱动的Ｐ－ＶＥＰ则     

CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中作用的研究

目的：探讨CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法：线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）;激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞的比例及脾和胸腺中CD8＋CD12TT细胞数量变化;RT—PCR方法检测CD8＋CD122＋T细胞对氧糖剥夺（Oxygen—glucosedeprivation,OGD）条件下星形胶质细胞表达TNF-α,IL-1β,IFN-γ的影响。结果：各时间点脑缺血组织中均有CD8＋CD122＋T胞浸润,且随脑缺血时间延长,缺血侧脑组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞比例逐渐增加,5d和7d组差异显著,与非缺血侧相比,P5d〈0．05,P7d〈0．05;MCAO小鼠脾及胸腺中CD8＋CD122＋T细胞呈现先增高后降低的趋势。星形胶质细胞经OGD处理后,与对照组相比,IFN-γ、TNF-α、IL—1β表达显著增高,PIFN-γ〈0．01、PTNF-α〈0．001、PIL-1β〈0．01;CD122-blocked组与CD8＋组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达明显增高,PIFN-γ〈0．05、PINF-α〈0．05、PIL-1β〈0．01;CD8＋组与HBSS组相比,IFN-γ表达降低,P〈0．05;IL-1β表达有降低的趋势。结论：CD8＋CD122可细胞在脑缺血过程中发挥保护性作用,其保护作用通过CD122抑制星形胶质细胞TNF-α,IL-1β,IFN-γ炎症因子表达实现的。     

白藜芦醇对氧糖剥夺/再灌注损伤的PC12细胞的保护作用及其作用机制

目的:探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法:体外培养PC12细胞,分为对照组,白藜芦醇组,OGD/R组及OGD/R+白藜芦醇组。以改良的噻唑蓝法测定细胞活性,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡率,用双氢罗丹明(DHR)检测细胞内活性氧簇(ROS)的水平,采用蛋白印迹法(western blot)分析SIRT1的蛋白表达情况。结果:与对照组相比,经过OGD/R损伤后,细胞活力显著降低。而在OGD/R的同时给予10μmol/L的白藜芦醇处理,可以明显提高细胞活力。流式细胞仪检测发现,10μmol/L的白藜芦醇可以显著地减少OGD/R引起的细胞凋亡,抑制细胞内的ROS产生。western blot的结果提示,与对照组比较,白藜芦醇可提高SIRT1的蛋白表达水平。结论:白藜芦醇可以通过抑制ROS的产生和上调SIRT1的表达等机制而发挥其对抗氧糖剥夺/再灌注损伤的神经保护性作用。     

血管紧张素1-7对氧糖剥夺/复氧海马神经元的保护作用

血管紧张素1-7（angiotensin 1-7, Ang1-7）在神经系统中发挥重要作用。已有研究发现,Ang1-7在脑缺血动物模型中发挥保护作用,但至今未见有关Ang1-7对氧糖剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/ reoxygenation, OGD/R）损伤神经元的保护作用及其机制的研究报道。本研究以厌氧培养及不含葡萄糖的EBSS培养基培养、建立新生大白鼠原代培养的海马神经元OGD/R模型模拟脑缺血环境,实验分为3组：正常对照组、实验对照组和Ang1-7处理组。倒置显微镜观察神经元形态显示,Ang1-7处理组的神经元形态明显改善|CCK8试剂盒检测发现,Ang1-7处理组的细胞活性提高|流式细胞术研究发现,Ang1-7处理组的神经元凋亡和坏死率降低、神经元内Ca2+及NO水平降低|Western印迹结果发现,Ang1-7处理组Bax表达降低,Bcl-2表达增加。以上结果说明,Ang1-7可降低OGD/R神经元中NO和Ca2+水平,降低Bax蛋白、增加Bcl-2蛋白的表达,减少OGD/R神经元凋亡和坏死率,对OGD/R神经元发挥了保护作用。本研究为进一步在神经元水平上研究Ang-1-7的保护机制奠定基础,对中风等脑缺血疾病的防治具有重要意义。     

中风膏对氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的：研究中风膏对体外氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠神经干细胞增殖的影响。方法：采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑海马神经干细胞,免疫荧光法鉴定细胞,第3代贴壁培养神经干细胞氧糖剥夺2 h后,复氧培养24 h造模。实验分为正常对照组、模型组、中风膏5%含药血清组、中风膏10%含药血清组、中风膏20%含药血清组,每组6个复孔,分1 d、3 d、5 d、7 d 4个时间点。CCK8法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果：悬浮培养细胞均高表达巢蛋白（nestin）。在增殖试验中,正常组与模型对照组比较,模型对照组的细胞增殖能力明显降低（P<0.01）;与模型对照组相比,第3日,中风膏20%治疗组的细胞增殖能力明显增强（P<0.01）;实验第5日、7日,中风膏5%、10%、20%组细胞增殖能力明显增强（P<0.01）。在凋亡实验中,与正常组比较,模型对照组的细胞凋亡明显升高（P<0.01）;与模型对照组相比,中风膏20%组细胞凋亡显著下降（P<0.01）。结论：中风膏含药血清对海马神经干细胞OGD/R损伤后的增殖能力有显著的修复作用,20%中风膏含药血清对干细胞损伤有治疗作用,可降低细胞凋亡。     

川芎嗪对PC12细胞氧糖剥夺后细胞内抗超氧阴离子能力和过氧化氢的影响

目的:探讨川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对PC12细胞氧糖剥夺/复氧复糖损伤后细胞内抗超氧阴离子能力和过氧化氢(H2O2)的影响.方法:建立PC12细胞氧糖剥夺(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)模型,复氧复糖给予不同浓度(0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12、10.24 μmol/L)的川芎嗪,培养24 h后行MTT和LDH的检测.采用四甲基偶氮唑(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)比色检测细胞生存率,并检测细胞内抗超氧阴离子能力和过氧化氢.结果:氧糖剥夺可明显降低PC12细胞活性(55.05％),而川芎嗪可以显著提高PC12细胞活性,其作用呈现一定的剂量—效应相关性.复氧复糖后给予0.16 μmol/L川芎嗪可以提高PC12细胞的活性到75.38％.氧糖剥夺/复氧复糖后6h、24h,TMP组(川芎嗪组)抗超氧阴离子能力明显高于OGD组(模型组)(P＜0.05),而H2O2的含量TMP组明显低于OGD组(P＜0.05).结论:川芎嗪可能提高抗超氧阴离子能力,减少H2O2的产生,从而减轻PC12细胞氧糖剥夺/复氧复糖损伤,具有较好的治疗作用.     

睡眠剥夺对大鼠心肌损伤效应和抗氧化指标的影响

目的：探讨睡眠剥夺对大鼠心肌和抗氧化指标的影响。方法：大鼠随机分为睡眠剥夺2 d组（SD 2 d）、睡眠剥夺4 d组（SD 4 d）、睡眠剥夺6 d组（SD 6 d）、大平台对照组（TC）、正常对照组（CC）,利用＂小平台水环境法＂建立大鼠睡眠剥夺模型,利用BL-410机能实验系统描记体表心电图,采用光镜及透射电镜观察心肌形态学改变,测定心肌线粒体丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性。结果：睡眠剥夺组大鼠心率加快,心电图出现缺血性改变;心肌细胞染色质、肌浆网、线粒体、闰盘等亚细胞结构出现损伤性改变,部分心肌纤维溶解、坏死,心肌间质水肿、出血、炎性细胞浸润;心肌线粒体MDA水平升高,SOD活性随睡眠剥夺时间延长有降低趋势。结论：睡眠剥夺能够引起大鼠心肌损伤,其引起的氧化应激可能是心肌损伤的机制。     

通络救脑注射液对脑微血管内皮细胞活性影响的特征

目的：观察通络救脑注射液对培养的正常及缺血脑微血管内皮细胞的活性影响。揭示其通络作用的效应靶点与特征。方法：原代培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞,传至第三代。分为正常及拟缺血组,采用培养基氧糖刺夺（OGD）法建立拟缺血模型。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色分析法测定不同浓度的通络救脑注射液对正常及OGD内皮细胞的活性影响。结果：通络救脑注射液作用于正常脑微血管内皮细胞,与未加药组比较,小剂量药物抑制细胞活性趋势,大剂量促进细胞活性趋势,剂量总趋势呈反抛物线形;通络救脑注射液作用于OGD组脑微血管内皮细胞,小剂量范围促进内皮细胞的增殖活性,呈显著和极显著差异,而大剂量组则抑制细胞活性,剂量总趋势呈抛物线形。结论：通络救脑注射液对正常及缺血脑微血管内皮细胞具有双向调节作用,药物剂量与细胞增殖活性呈非线性关系。天剂量与小剂量可能是不同的作用机制,反映了中药复方药效的多维性。     

二十二碳六烯酸对氧糖剥夺环境下大鼠脑星形胶质细胞凋亡及血管生成因子分泌的影响

摘要 目的：评价二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)预处理对氧糖剥夺环境下(Oxygen and glucose deprivation,OGD)大鼠脑星形胶质细胞凋亡及血管生成因子分泌的影响。方法：大鼠脑星形胶质细胞传代培养,第3~4代用于实验。采用随机数字法将培养的细胞分为6组：正常对照组、OGD组、OGD+10 μMDHA组、OGD+40 μMDHA组、OGD+10 μMDHA+GW9662组、OGD+40 μMDHA+GW9662组。在所有缺氧模型组(除正常对照组外)先用无糖、无血清的DMEM液置换原培液;其次在OGD+10 μMDHA、OGD+40 μMDHA、OGD+10 μMDHA+GW9662、OGD+40 μMDHA+GW9662组加入相应浓度的DHA,同时在OGD+10 μMDHA+GW9662组和OGD+40μMDHA+GW9662组加入5 μM GW9662(过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ的抑制剂)。预处理完成后,正常对照组和其余各组分别在5% CO₂:95%空气和94％N₂:5％ CO₂:1％O₂条件下培养24 h。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附剂测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测培养上清液中的促血管生成素1（Angiopoietin-1,Ang1）、促血管生成素2（Angiopoietin2,Ang2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌量,Western blotting法检测Bax、Bcl-2、caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,其余组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达水平明显增加(P＜0.01),而Bcl-2、Bcl-2/Bax表达明显降低(P＜0.01)。与OGD组比较,OGD+10 μMDHA组和OGD+40 μMDHA组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达水平明显降低(P＜0.01),而Bcl-2、Bcl-2/Bax表达明显增加(P＜0.01);Ang1分泌量明显增加(P＜0.01),而Ang2和VEGF分泌量明显降低(P＜0.01);上述各指标的差异在OGD+40 μMDHA组里更加显著(P＜0.01)。与OGD组比较,OGD+10 μMDHA+GW9662和OGD+40 μMDHA+GW9662组各个观察指标均无明显差异(P＞0.05)。相关性统计分析结果显示细胞凋亡率与Ang1水平呈显著负相关(P<0.01),与Ang2和VEGF的水平呈显著正相关(P<0.01)。结论：二十二碳六烯酸(DHA)预处理能够减少大鼠脑星形胶质细胞在氧糖剥夺(OGD)环境下的凋亡,其机制与增加Ang1分泌,减少Ang2和VEGF分泌,进而调控Ang/Tie2信号通路相关。     

利用等位酶对油松无性系种子进行父本分析

利用水平淀粉凝胶电泳8种酶10个位点34个等位基因,对辽宁兴城油松无性系种子园中17个无性系20个单株的200粒种子作了父本分析。无性系雄花量的多少与授粉果率并不成正比;不同无性系对花粉的接受存在一定的选择性,分析试样单株与周围的无性系并没有构成固定的授粉组合,说明授粉期风向等气象因子,无性系的雌雄花器的构造,受精等对受粉的成败都有作用,种子园结实初期自交现象并不明显,在分析试样中只有16＃,17＃,19＃无性系存在自交现象;种子园内花偻的有效传播一般在半径30m范围内,同时,分析了种子园子代的等位酶变异和空间遗传结构,从另一侧面反映出采种母树周围花粉分布比较均匀,并说明散粉期间风向等气象因子对授粉成败影响较大。