Role of chaperone-mediated autophagy in degrading Huntington＇s disease-associated huntingtin protein

Mutant N-terminal huntingtin （Htt） protein resulting from Huntington＇s disease （HD） with expanded polyglutamine accumulates and forms aggregates in vulnerable neurons. Both ubiquitin proteasomai and autophagic pathways con- tribute to the degradation of mutant Htt. Here, we focus on the involvement of chaperone-mediated autophagy （CMA）, a selective form of autophagy in the clearance of Htt. Selective catabolism in CMA is conferred by the presence of a KFERQ-Iike targeting motif in the substrates, by which molecular chaperones recognize the hydrophobic surfaces of the misfolded substrates, and transfer them to the lysosomal membrane protein type-2A, LAMP-2A. The substrates are taken into the lysosomes through LAMP-2A and are rapidly degraded by the lysosomal enzymes. Taken together, we summarize the recent evidence to elucidate that Htt is also a potential substrate of CMA. We propose that the manipulation of CMA could be a therapeutic strat- egy for HD.     

人类免疫缺陷病毒潜伏库定量检测技术的研究进展

以静息CD4~+T细胞为主的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)潜伏库的清除已成为治愈HIV-1感染的主要障碍,人们迫切需要建立一种高通量、可靠的、高灵敏度的方法来定量检测病毒潜伏库的真实大小。本文就目前关于HIV潜伏库的多种定量检测方法进行综述。     

梅毒螺旋体4种主要膜蛋白分子的研究现状

梅毒螺旋体是梅毒的病原体。因其体外培养至今尚未成功,该螺旋体获取困难,从而制约了其基础研究。但随着基因工程技术的发展,梅毒螺旋体全基因序列已经成功揭示,其主要结构蛋白研究也取得了重大进展,这些都为进一步深入开展研究提供了基础和前提。本文从梅毒螺旋体几种主要外膜蛋白的结构在梅毒致病机制中的作用和功能,以及有关实际应用等几方面进行综述。     

马传染性贫血病毒弱毒疫苗株跨膜蛋白截短突变对其体外复制特性影响

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了.研究发现,EIAV疫苗株EIAVFDDV12的跨膜蛋白gp45在马体内发生高频率261W位点翻译终止突变,使该蛋白质C端出现154个氨基酸的截短.为了探讨该截短对EIAV疫苗株生物学特性的作用,以EIAV弱毒疫苗株感染性克隆为骨干,构建了gp45截短型感染性病毒株,检测该截短突变对EIAV疫苗株在体外培养的马外周血单核细胞由来的巨噬细胞(MDM)、驴MDM和驴胎皮细胞(FDD)中的复制.实验结果表明,gp45截短型毒株在马和驴MDM中复制能力比未截短型毒株显著降低(P<0.01),特别是在马MDM中此差异更明显.相反,截短型毒株在FDD中的复制能力则显著高于未截短型毒株(P<0.01).此外,结果显示gp45截短型毒株在马MDM中的低水平复制降低了EIAV对其靶细胞诱导的凋亡.以上结果提示,EIAV疫苗的gp45截短型毒株是适应在体外FDD细胞中传代致弱的变异,该变异导致疫苗株在EIAV体内主要靶细胞巨噬细胞中复制能力的降低,导致毒力进一步减弱.     

糜蛋白酶提高膜蛋白质谱分析序列覆盖率的胶内消化方法

近年来,质谱技术在膜蛋白结构与功能研究中被广泛应用。由于膜蛋白的跨膜结构域含有大量疏水性氨基酸,常常导致液质串联质谱检测的序列覆盖率较低,从而限制了质谱技术在膜蛋白结构与功能研究中的应用。文中利用人的整合膜蛋白维生素K环氧化物还原酶为模型,优化胶内消化条件,建立了一种稳定提高膜蛋白质谱序列覆盖率的糜蛋白酶胶内消化方法。通过探索钙离子浓度、pH值和缓冲体系对序列覆盖率、检测特异肽段的总数和类型以及特异肽段大小的影响,发现在5–10 mmol/L钙离子浓度、pH 8.0–8.5的Tris-HCl缓冲液中,可以兼顾序列覆盖率和肽段的多样性。该方法可以使膜蛋白的质谱覆盖率达到80%以上,将在膜蛋白结构与功能、膜蛋白相互作用位点的鉴定以及膜蛋白与小分子药物结合位点的鉴定等研究中具有广泛的应用价值。     

沙眼衣原体多形态膜蛋白D基因序列分析及其B细胞抗原表位预测

分析沙眼衣原体多形态膜蛋白D(PmpD)的基因序列并预测PmpD蛋白的B细胞抗原表位。在GenBank中检索沙眼衣原体不同血清型的PmpD基因序列,进行序列比对分析。以L2血清型PmpD基因序列为材料,采用Karplus-Schulz、Chou-Fasman和Gamier-Robson方案预测蛋白质的二级结构和柔性区;按Jamesonv-Wolf方案预测抗原指数,运用Kyte-Doolittle方案预测PmpD氨基酸的亲水性,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。检索到20个沙眼衣原体不同菌株的PmpD基因序列,分析发现其核苷酸序列非常保守,一致性高达99.14%~100%;对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于PmpD N端的67~74、132~140、335~340、851~861、972~988及1091~1097。多参数方案综合预测PmpD蛋白的B细胞抗原表位,为进一步实验鉴定PmpD抗原表位及其多表位疫苗设计和研究奠定基础。     

福氏痢疾菌膜成分与细菌抗原性和毒力的关系

应用免疫转移技术,用从感染福氏痢疾菌的病人获取的恢复期血清分析了福氏痢疾菌膜成分与细菌抗原性和毒力的关一。发现福氏痢疾菌的膜蛋白67kD和63kD均含有两种成分,一种和膜蛋白60kD都可能是保护性抗原,而另一种与膜蛋白78kD和35kD一样与福氏痢疾菌的毒力有关。采用微细胞同位素掺入示踪显示这些与病人恢复期血清反应的膜蛋白由质粒编码。     

EB病毒及其癌基因LMP1对上皮细胞的转化作用

EB病毒(EBV)是一种人群感染率较高的致病性疱疹病毒,与伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌的关系最为明确。近年来EBV在上皮源性肿瘤发生、发展中的作用受到众多学的关注,而其癌基因LMP1在上皮源性肿瘤发病的病因学方面的作用更成为研究的热点。本综述就EBV进入上皮细胞、永生化上皮细胞的机制、LMP1的基本结构及其对上皮细胞的生物学功能作一较为详细的阐述。     

单纯疱疹病毒的研究现状与展望

本文对单纯疱疹病毒潜伏与复发机理、疫苗的研究现状以及它在基因治疗载体方面的应用等,就近年来国内外单纯疱疹病毒研究的现状与进展作简要综述。     

基于光激活定位显微镜的膜蛋白鉴定技术

病原菌膜蛋白的原位标记和定位追踪是一项非常繁琐的工作。为了建立一种可以用于快速鉴定膜蛋白、且分辨率达到纳米级别的膜蛋白荧光定位技术,将结核分枝杆菌外膜蛋白OmpA与具有光敏活性的蛋白mEos2m在无致病性的耻垢分枝杆菌中进行融合表达。重组菌固定在载玻片上后,利用405 nm激光激活mEos2m。利用普通荧光体视显微镜、正置荧光显微镜和超分辨率光激活定位显微镜观察OmpA-mEos2m,分析融合蛋白在细菌内的分布情况,并捕获光激活蛋白在细胞膜上释放的光子信号。通过超分辨率光激活定位显微镜,发现OmpA-mEos2m融合蛋白在细胞膜上呈"带"状环绕分布,这是观察到膜蛋白在细胞膜上定位的最直接证据。mEos2m与OmpA融合表达后,并不改变OmpA的膜蛋白属性和定位特征。因此可以将mEos2m用于其他非多聚体膜蛋白的融合和定位研究。可以应用非致病性的耻垢分枝杆菌作为模型,采用高分辨率活菌成像技术,研究致病性的结核分枝杆菌蛋白结构、定位和功能。这是目前为止国内采用光激活定位显微成像技术研究膜蛋白的首次报道。