2019年肇庆市不同来源金黄色葡萄球菌分离株分子流行与耐药特征研究

目的了解2019年肇庆市不同来源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,本文简称金葡菌)分子流行特征和耐药谱构成情况。方法对2019年分离自食品样、医院环境涂抹样和患者样中的117株金葡菌进行肠毒素基因聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测、抗生素敏感性试验及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST),并对优势序列型(sequence type,ST)菌株进行脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分析。结果 117株金葡菌中sea、seb毒力基因在不同来源的菌株间的携带情况存在差异,pvl毒力基因在不同耐药表型的菌株间携带情况也存在差异;肇庆市金葡菌耐药表型分为耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)株和甲氧西林敏感金葡菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus, MSSA)株,MRSA株有4个优势耐药谱型,MSSA株则有3个优势耐药谱型。MSRA株耐药表型以多重耐药的MRSA株为主,且耐药情况严重;MLST分型、PFGE和ST型遗传进化分析显示,117株金葡菌可分为50个ST型,其中优势ST型有4个,分别为ST239、ST1891、ST3191和ST7,以患者分离株为主。4个优势ST型菌群间亲缘聚类距离较远,除ST7型菌群外,其他3个ST型菌株群中,不同来源的金葡菌间存在一定的亲缘关系。50个ST型可分为2个进化分支,其中有43个ST型在进化分支1上,7个ST型在进化分支2上,进化分支1与进化分支2间的菌株进化差异较大。结论肇庆市金葡菌毒力基因sea、seb在不同来源的菌株间携带情况存在差异,毒力基因pvl在不同耐药表型的菌株间携带情况也存在差异;耐药表型以多重耐药的MRSA株为主;肇庆市金葡菌流行4个优势ST型。不同来源间金葡菌存在相互散播的风险。肇庆市菌株主要位于进化分支1;防控部门应对不同来源和不同耐药表型的金葡菌制定相应的分级防控方案,并警惕不同来源的金葡菌相互散播的风险,防止高毒力强耐药的菌株引起本地区流行。同时注意ST1981型菌株,警惕该型菌株引起食源性疾病和院内感染的风险。     

金黄色葡萄球菌黏附素ClfA，FnBPA-A，FnBPA-BCD联合免疫的免疫生物学特性

摘要:【目的】为比较金黄色葡萄球菌黏附素分子聚集因子(ClfA)与纤连蛋白结合蛋白A(FnBPA)A区(FnBPA-A)及BCD区(FnBPA-BCD)的抗原性、抗体的黏附抑制特性及其免疫保护力。【方法】分别表达了ClfA蛋白、FnBPA-A和FnBPA-BCD蛋白,并将表达纯化后得到ClfA、FnBPA-A和FnBPA-BCD重组蛋白单独或联合免疫小鼠,收集免疫血清对其进行抗原性及免疫保护力的比较分析。【结果】结果显示,重组蛋白FnBPA-BCD对Fn的结合能力高于其对Fg的结合,而重组蛋白ClfA及FnBPA-A对Fg的结合能力高于FnBPA-BCD。血清抗体的检测结果表明,ClfA蛋白及FnBPA-A蛋白免疫组诱导抗体的水平均优于FnBPABCD组。3种蛋白联合免疫组的血清抗体效价及抗体抗黏附能力明显优于单一蛋白免疫组(P＜0.05)。3种蛋白联合免疫组与ClfA蛋白免疫组免疫保护率为100%,FnBPA-A组与FnBPA-BCD组免疫保护率分别为80%与50%。【结论】重组蛋白ClfA及FnBPA-A的免疫原性优于FnBPA-BCD,三者联合免疫较单一蛋白免疫在抗细菌的黏附、抗体诱导和免疫保护方面具有优势,提示这3种蛋白联合免疫有利于达到更好的免疫效果。     

沙蜇(Stomolophus meleagris)刺丝囊毒素生物活性的初步分析

从沙蜇触手提取刺丝囊细胞毒素,并对该毒素进行溶血活性、致死活性、SOD活性和抗肿瘤活性的研究。结果显示,沙蜇毒素具有明显的溶血活性,其半溶血率(HU50)约为10.5μg/ml;该毒素还对草鱼显示出较强的致死活性,半致死量(LD50)为50μg毒素/g鱼;同时该毒素具有明显的SOD活性和抗肿瘤活性,当毒素浓度为18μg/ml时其总SOD活性为161 U/mg,而毒素浓度为1 mg/ml时,该毒素对肝癌细胞Bel-7402表现出显著的抑制效果,其抑制率达到54.9%。因此,有必要对沙蜇毒素内的生物活性组分进行深入研究,为沙蜇毒素的开发利用提供依据。     

β-溶血型链球菌与银屑病发病、发生及发展的研究现状

银屑病的发病与链球菌感染的相关性近年来得到人们的密切关注.银屑病是一类由T细胞介导的自身免疫性疾病,链球菌抗原可在易感人群中诱发或加重银屑病并使银屑病慢性持续存在.从β-溶血型链球菌诱发银屑病相关的细胞壁、细胞膜、CpG DNA序列及其他相关蛋白的自身抗原及β-溶血型链球菌通过活化T细胞、抗原抗体反应途径、通过作用机体的基因改变遗传易感性诱发银屑病的可能作用途径几方面,阐述β-溶血型链球菌与银屑病发病、发生及发展的研究现状.     

金黄色葡萄球菌蛋白A (SpA) Z结构域串联体的克隆、表达和筛选

筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)用于制备抗体纯化亲和介质。首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因,将目的基因分别克隆至pET-22b表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得不同串联个数的Z结构域基因工程菌,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化得到Z结构域单体和二-五串体蛋白。纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质,对人免疫球蛋白G(IgG)进行分离纯化。分析比较Z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异。结果表明,构建的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白,制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人IgG。增加Z结构域串联数,重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高,其中,重组四串体蛋白产量大(160 mg/10 g湿菌体),对抗体的吸附载量高(34.4 mg人IgG/mL胶),更适合作为配基用于亲和层析介质的制备。     

实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立

目的建立一种能够应用于实验动物金黄色葡萄球菌检测及鉴定的环介导等温扩增（loop-mediatedisothermal amplification,LAMP）方法。方法本研究针对金黄色葡萄球菌特异的nuc基因设计4条引物,对反应条件进行优化。结果通过优化,该方法 60℃、40 min、Mg2＋浓度8 mmol/L、dNTP浓度2.0 mmol/L、甜菜碱浓度0.8mmol/L时,对金黄色葡萄球菌检测限为2 cfu,且与其它常见实验动物致病菌无交叉反应。反应结果可通过添加荧光染料SYBR green I直接肉眼观察。结论本研究建立的金黄色葡萄球菌LAMP方法具有快速、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,适用于基层、大批量样本、快速检测的要求。     

流感病毒-金黄色葡萄球菌共感染小鼠模型建立及达菲的干预作用研究

目的 模拟临床常见的流感病毒+金黄色葡萄球菌(金葡菌)共感染建立小鼠模型,评价达菲干预后的药效及对淋巴细胞和炎症因子调控作用。方法 (1)通过筛选不同滴度的PR8流感病毒、金葡菌,建立共感染小鼠模型。(2)选用雄性BALB/c小鼠,随机分为6组。第0天滴鼻流感病毒(0.25 TCID₅₀,每只20μL),第3天滴鼻感染2.5×10⁷ CFU金葡菌20μL。感染病毒24 h后灌胃给药达菲,连续7 d。末次给药24 h后处死,计算脏器指数,RT-qPCR检测流感病毒M基因相对表达量,流式细胞术检测CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞含量及IL-6等13种炎症因子的分泌水平,以气泡图的形式显示每组促炎平均值和促炎细胞因子之和。结果 (1)0.25 TCID₅₀的流感病毒感染后体重下降相对平缓,小鼠没有出现死亡;(2)2.5×10⁷ CFU的金葡菌共感染后半数致死,体重下降相对平缓,作为后续共感染组的剂量;(3)共感染组小鼠体重下降较大,胸...     

金黄色葡萄球菌L型致间质性肺炎的实验动物模型的建立

目的：观察各实验动物感染金葡萄L型后肺脏和其他重要脏器的病理变化。方法：高渗培养金黄色葡萄球菌L型,经静脉和腹腔人工感染小白鼠,大白鼠等动物,光镜观察相应脏器变化。结果：发现主要脏器实质细胞发生变性,慢性炎细胞浸润和间质细胞增生性改变。结论：细菌L型具有侵入和破坏组织脏器实质细胞的能力,引起脏器发生间质性炎症改变。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及其检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起医院感染的多重耐药菌,其有效的治疗药物为万古霉素。近年已发现对万古霉素耐受的金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌一旦对万古霉素耐药,临床将面临无药可供选择的局面。由于其所造成治疗上的困难,对其耐药机制的深入研究和该菌准确、及时的检出对于寻找新的治疗靶位和防止其播散有着极其重要的意义。本文就mecA耐药决定子、调节基因、染色体上的辅助基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药表达的影响及其表型和基因检测方法作一综述。     

用壳聚糖替代Sepharse 4B固定相关配体纯化酶的研究

采用壳聚糖固定酶作用的特定底物（菌体细胞）,并用戊二醛交联制备成酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂纯化溶葡球菌的研究表明,经一步纯化可提高纯度4倍,酶活性回收大于70％。SDS－PAGE的电泳结果显示,产品基本上达到了标准酶的纯度。同时表明该吸附剂没有非特异性吸附。由载体壳聚糖替代Sepharose 4B制备的吸附剂具有简单、快速、较高收得率和操作安全等优点,适用于特定酶或基因工程产品的分离纯化。