携带OX40L重组溶瘤病毒的构建及靶向杀伤肝癌的研究

目的 拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株，全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法 将编码OX40L的基因片段嵌合在A/PuertoRico/8/34（PR8）的NS片段特定位置，利用反向遗传学技术（reverse genetics，RG），与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M共转染COSⅠ/MDCK细胞，成功拯救获得重组溶瘤流感病毒，命名为rFlu-OX40L。经血凝、TCID₅₀方法测定病毒滴度；重组病毒纯化后电镜观察病毒形态特征及大小分布；检测MDCK细胞病毒生长曲线；MTS法检测重组病毒对肝癌细胞活力的影响；流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式；利用肝癌荷瘤小鼠模型评价重组病毒rFlu-OX40L在动物体内的抗肿瘤效果。结果 重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L可在鸡胚中稳定传代，HA效价达2^7~8，病毒滴度可达 7~8 LgTCID₅₀/ml；重组病毒rFlu-OX40L与流感病毒PR8生长曲线相一致，72 h达高峰；MTS结果显示，3 MOI重组病毒可显著降低肝癌细胞活力，且对正常肝细胞无明显影响，呈时间和剂量依赖性；流式细胞结果显示，重组病毒可显著诱导肝癌细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性；利用肝癌荷瘤小鼠模型，瘤内注射重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L较PR8、PBS对照组，小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD69+ T细胞数量呈现显著升高趋势。结论 携带OX40L的重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L在体内外均可选择性杀伤肝癌细胞，有望为肝癌的临床治疗提供新的免疫治疗策略。     

靶向宿主代谢重编程的溶瘤病毒调控策略

溶瘤病毒是一类天然的或经过基因编辑后能特异性在肿瘤细胞中复制、发挥抗肿瘤效应的病毒。溶瘤病毒的抗肿瘤效应主要通过以下两个方面实现：a. 直接的溶瘤效应，例如诱导肿瘤细胞发生凋亡、促使细胞裂解等；b. 溶瘤病毒作为一种激活免疫的药物，通过诱导机体产生强烈的抗肿瘤免疫，达到清除肿瘤的目的。溶瘤病毒疗法作为免疫疗法的一个重要分支，因其具有肿瘤特异性，便于基因改造等优点，成为该领域的研究热点。截至目前，处在临床实验招募和完成阶段的溶瘤病毒疗法虽然已达100多例，但已批准上市的产品仅有4款。溶瘤疗法应用于肿瘤治疗领域还面临着诸多挑战。因此，系统性回顾溶瘤病毒的改造策略，深入了解溶瘤病毒的生物学过程显得尤为必要。病毒依赖于宿主完成复制、增殖过程，其生物学过程与宿主的代谢状态密切相关。肿瘤的标志性特征为代谢重编程，即肿瘤细胞重新构建代谢网络以满足指数生长和增殖的需求并防止氧化应激的过程。通常包括糖酵解的增强和谷氨酰胺分解，以及线粒体功能和氧化还原稳态的变化。通过靶向宿主代谢重编程增强溶瘤病毒的复制、溶瘤能力是当前极具前景的方向。本文综述溶瘤病毒的临床应用现状及与代谢相关的调控机制，为进一步开发新型溶瘤病毒以及联用方式提供新的思路。     

大鼠胸部照射后支气管肺泡灌洗液成分和肺组织纤溶活力…

大鼠脑部照射γ射线２０ＧＹ，照射后观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中蛋白质含量、细胞总数和分类及巨噬细胞存活率，肺指数及肺组织纤溶活力，并做了大体解剖和组织学检查。结果为：照射后２周后开始ＢＡＬＦ中蛋白质含量、细胞总和中性粒细胞即明显增多，照射后１－２个月持续处于高水平，高峰在１．５－２个月，照射后３－４个月有所下降，肺指数有相应变化；肺组织纤溶活力则相反，从照射后２周开始持续下降，至照射后２个月     

组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）cDNA序列的测定

已经从ｍｅｌａｎｏｍａ细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ，在此基础上用双脱氧终止法测定了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ编码区全序列及３’非编码区部分序列，并发现与Ｐｅｎｎｉｃａ等发表的ｒ－ＰＡｃＤＮＡ序列相比，有两处差异，其一是第１７２５位核苷酸残基为Ｃ而非Ａ，并使此处序列与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比新产生一个ＳｔｙＩ切点，但由于差异发生在密码子第三位，没有引起编码的氨基酸变化；其二是第     

特发性肺纤维化的机制与治疗

组织纤维化会对限制性疾病,如特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)患者的肺部结构和功能造成不可逆损伤。血管外凝血、纤溶酶与纤溶酶原激活物抑制剂-1被认为在肺纤维化的发展中发挥作用。凝血激活与纤溶酶激活的蛋白酶可以分别形成和分解纤维蛋白系统,凝血酶、凝血剂和凝血因子Xa可以裂解蛋白酶活化受体促进纤维化;而尿激酶纤溶酶原激活剂的纤溶酶原蛋白酶也能结合受体引发纤维化活化。本综述聚焦IPF并描述了两个纤维蛋白稳态系统参与及促进间质纤维化,认为选择性靶向受体介导的凝血剂和纤溶酶蛋白酶既可以限制肺纤维化发展,又没有与溶栓治疗和常规抗凝血剂相关的出血并发症的危险。