转录因子SOX2 对胃癌干细胞自我更新、增殖和迁移的影响

目的:检测SOX2在胃癌组织中的表达,探讨SOX2对胃癌干细胞自我更新、增殖和转移能力的影响。方法:采用免疫组化检测SOX2在胃癌及癌旁组织中的表达情况。通过肿瘤球形成实验富集、分离胃癌干细胞。构建SOX2过表达慢病毒并感染胃癌干细胞中,通过实时定量PCR和western bolt检测感染慢病毒后胃癌干细胞中SOX2表达情况。分别利用肿瘤球形成实验检测SOX2对胃癌肿瘤干细胞自我更新能力的影响,CCK-8实验检测SOX2对胃癌干细胞增殖能力的影响,流式细胞术分析SOX2对胃癌干细胞的细胞周期的影响,Transwell实验检测SOX2对胃癌干细胞转移能力的影响。结果:SOX2在胃癌组织中表达显著低于癌旁组织。肿瘤球形成实验能够有效富集胃癌细胞SGC-7901和BGC-823的干细胞。慢病毒载体感染能够显著增强SOX2在胃癌干细胞中的表达。过表达SOX2能够抑制胃癌干细胞的自我更新、增殖和侵袭能力。结论:SOX2在胃癌中发挥抑癌基因的功能,其机制可能通过抑制肿瘤干细胞的自我更新、增殖和侵袭转移能力而抑制胃癌的发生发展。     

食管鳞癌组织中CDC2、CLDN5蛋白表达及其临床病理意义的研究

目的探讨CDC2及CLDN5在食管鳞癌中表达及其临床病理特征的关系。方法应用免疫组化Elivision法检测90例食管鳞癌组织、28例正常食管黏膜组织及16例重度不典型增生组织中CDC2和CLDN5的蛋白表达情况。结果在食管鳞癌和正常食管黏膜组织中CDC2和CI。DN5的阳性表达率分别为88．89％（80／90）、85．56％（77／90）和48．86％（12／28）、25．00％（7／28）,两者差异有统计学意义（P〈O．05）。CDC2蛋白表达在低分化食管鳞癌中明显高于高分化食管鳞癌;临床分期Ⅲ＋Ⅳ期组的CDC2蛋白的表达显著高于I期、Ⅱ期组（P〈O．05）。CDC2和CLDN5在食管鳞癌中表达呈正相关（r=0．537,P〈o．05）。结论CDC2和CLDN5在食管鳞癌的发生、发展过程中可能发挥重要作用,可能作为食管癌临床早期诊断的重要指标。     

黄芪皂苷IV对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨黄芪皂苷对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用.方法:以H2O2诱导SD大鼠心肌损伤细胞模型为基础,用黄芪皂苷IV预处理进行干预.MTT法检测不同时段细胞凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测24h时段Cyclin D1蛋白和mRNA表达水平.结果:H2O2对SD大鼠心肌细胞的损伤呈时间依赖性.H2O2可显著诱导SD大鼠心肌细胞凋亡.而这一作用可被黄芪皂苷IV显著抑制.结论:黄芪皂苷IV对H2O2诱导的SD大鼠心肌细胞损伤有明显保护作用.     

HRB2基因对细胞增值影响的研究

目的:研究HRB2基因对细胞增值的影响.方法:设计4对HRB2 RNA寡核苷酸片段,经退火制备的双链DNA oligo,连接经双酶切的线性化PLKO.1-TRC-SP6载体上,转化后经PCR鉴定,阳性克隆测序,质粒抽提,应用Lipofectamine2000将质粒导入293T细胞,包装成慢病毒,再感染靶细胞293T,用嘌呤霉素筛选15天后,收集细胞抽提RNA,实时定量RT-PCR检测HRB2mRNA水平,评价干扰效果.Western免疫印迹进一步确认有效作用靶点.通过划痕愈合实验和绘制生长曲线研究HRB2基因对细胞增值的影响.结果:载体构建成功.包装成慢病毒感染293T细胞系,发现:2号和4号靶点敲减HRB2基因效率达84%和88%.差别有统计学意义.通过western进一步证实了2号和4号是抑制HRB2的有效作用靶点.划痕愈合实验和绘制生长曲线的结果显示2号和4号靶点细胞株细胞生长受到抑制,并且4号较2号稍明显.结论:成功构建并筛选了携带有人HRB2基因的shRNA慢病毒载体及有效靶点,研究发现HRB2基因对细胞增值产生了影响,这为进一步研究HRB2的生物学功能提供了实验平台.     

理气调补汤对运动性疲劳大鼠血清皮质醇和白细胞介素2影响的研究

目的:通过观察理气调补汤对运动性疲劳大鼠血清皮质醇(C)和白细胞介素2(IL-2)水平的影响,以期揭示中药理气调补汤促进运动性疲劳恢复的作用机理.方法:健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组(Ⅰ组)8只、单纯运动组(Ⅱ组)11只、中药运动组(Ⅲ组)11只.实验时Ⅲ组每天定时定量中药灌胃1ml/100g体重,Ⅰ组、Ⅱ组灌胃相同剂量的生理盐水.实验采用游泳运动训练方式.6周末力竭训练后24h分离血清测定C和IL-2含量.结果:Ⅲ组大鼠游泳至力竭的时间较Ⅱ组显著延长;Ⅱ组和Ⅲ组大鼠血清IL-2浓度均显著低于Ⅰ组,但Ⅲ组大鼠血清IL-2浓度显著高于Ⅱ组;血清C浓度Ⅱ组显著高于Ⅰ组,Ⅲ组较Ⅱ组显著降低.结论:大强度运动训练可能导致HPA轴释放过量皮质醇,从而使免疫功能受到抑制.理气调补汤能够调节疲劳大鼠的HPA轴适应性,降低C的过量释放,维持免疫功能稳定,延缓疲劳的发生.     

森林生态系统土壤CO2释放随海拔梯度的变化及其影响因子

联合国气候框架公约的签署提升了人们对全球变暖、碳循环的关注。土壤CO₂释放作为土壤-大气CO₂交换的主要途径之一,成为了各国生态学家研究的重点内容。通过对1800~2155m海拔梯度上森林生态系统土壤CO₂释放进行研究,揭示了较小空间尺度上土壤CO₂释放的变化规律及其控制机制。在研究区域内,随着海拔梯度的增加,森林土壤CO₂释放由(1.94±006) μmol m^-2 s^-1逐渐增加至(2.22±0.07) μ mol m^-2 s^-1。土壤温度、土壤水分、土壤有机碳（SOC）、全N、全P与土壤CO₂释放呈显著正相关（n=14, P<0.05）;土壤容重与土壤CO₂释放速率呈显著负相关（n=14,P<0.05）;土壤pH对土壤CO₂释放影响不显著。作为一个复杂的生态学过程,环境因子及其交互作用对土壤CO₂释放产生影响,为了减少因子共线性影响,逐步降低因子维数,采用主成分分析（PCA）揭示了土壤温度、土壤水分、SOC、全N、全P、容重6个因子的联合作用,其累积贡献率达到了57％以上;进一步运用逐步回归分析方法,探讨了影响土壤CO₂释放沿海拔梯度分布的主导因子,结果表明土壤水分是研究区域森林生态系统土壤CO₂释放沿海拔梯度变化的主导因子。     

猪链球菌2型菌毛骨架蛋白编码基因SSU2101敲除突变株的构建及其生物学功能

利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33菌毛骨架蛋白(Backbone protein,BP)编码基因SSU2101敲除突变株。采用引物特异性PCR分析、Southern杂交及RT-PCR等方法鉴定,证实成功构建了BP基因缺失突变株。生物学特性显示,突变株的菌落形态、溶血活性以及染色特性方面与野生株之间均无明显差异。小鼠致病性试验结果显示,突变株的毒力比野生株显著减弱。研究结果提示菌毛在S.suis2感染致病过程中起重要作用,为系统研究S.suis2菌毛分子装配机制及其生物学功能奠定了基础。     

蛇床子素对L-和N-型钙通道的影响

目的：比较蛇床子素对不同钙通道亚型的作用差异。方法：首先在tsA201细胞上瞬时转染Cavl．2,Cav1.3,Cav2．2e[37a],和Cav2．2e[37b]通道,然后采用全细胞膜片钳技术,记录tsA201细胞上的钙电流,并观察蛇床子素对各种钙通道亚型的影响。结果：蛇床子素可以浓度依赖性抑制Cav1．2和Cav1.3电流,抑制的半有效浓度分别为162．1μmol·L-1和56．2μmol·L-1．此外,蛇床子素对Cav2．2通道也有一定的抑制作用,在300μmol·L-1。的浓度下,抑制38％的Cav2．2e[37a]电流和61％的Cav2．2e[37b]电流,蛇床子素对钙电流的抑制是快速可逆的。蛇床子素在各个测试电位水平均能抑制上述四种钙通道电流,但不改变电流的激活阂值和最大峰值电流的激活电压。结论：蛇床子素以浓度依赖的方式抑制多种钙通道亚型并表现出不同的亲和力。     

小麦叶肉细胞原生质体中微管骨架的排列格局与[Ca2+]cyt的关系

以小麦叶肉细胞原生质体为材料,通过免疫荧光标记和Ca~(2 )荧光染料的装载并结合药物学试验,借助激光共聚焦扫描显微镜观察,探讨微管骨架和Ca~(2 )之间的内在联系。试验结果表明,[Ca~(2 )]_(cyt)的升高能够诱发微管骨架的解聚;而微管骨架的解聚也会促使胞外Ca~(2 )内流,进而造成[Ca~(2 )]_(cyt)的升高。     

UV-B辐射引起的绿豆幼苗叶片Rubisco量降低与H2O2含量升高有关

为了探讨UV-B辐射引起的Rubisco含量降低的可能机制,研究了两个绿豆品种(秦豆-20和中绿-1)幼苗在UV-B辐射下叶片Rubisco含量、蛋白水解酶活性和H2O2含量的变化.结果表明:UV-B辐射显著加速了两个绿豆品种幼苗叶片H2O2含量和蛋白水解酶活性上升,使Rubiscco含量下降.秦豆-20品种在UV-B辐射下H2O2含量和蛋白水解酶活性的上升程度明显大于中绿-1,相应其Rubisco含量的下降程度也大于中绿-1.抗坏血酸处理能明显降低UV-B辐射下两品种幼苗叶片H2O2含量,同时明显抑制蛋白水解酶活性的上升及Rubisco含量的下降.结果说明UV-B辐射诱导Rubisco含量的降低可能通过提高H2O2水平从而加强蛋白水解酶系统的活化而加速了Rubisco的降解.