游离线粒体拷贝数检测方法建立及应用

摘要 目的：线粒体在生理和病理过程中都起着重要作用,线粒体破碎后形成的游离线粒体与一系列疾病密切相关。然而,人体内游离线粒体的含量较低很难被稳定抽提且易降解等因素导致游离线粒体拷贝数检测具有极大挑战。本研究拟建立一种快速、准确检测外周血游离线粒体拷贝数定量PCR技术。方法：通过多重荧光定量PCR技术在SLAN?-96S全自动医用PCR分析系统上检测人外周血游离线粒体拷贝数,构建新的游离线粒体检测方案。游离核基因在人体外周血中的稳定性远大于游离线粒体,因此使用多拷贝参考基因YH-1（300拷贝）检测游离核基因作为对照组。结果：成功建立了核基因标准曲线和线粒体标准曲线,并筛选游离线粒体拷贝数检测最佳引物扩增片段长度为82bp、血清有效分离时间在2h内、血清最佳分离方案为1600 r/min 离心10 min再16000 r/min 离心10 min、磁珠法游离核酸抽提试剂盒抽提游离核酸得率最高的新流程。利用新方案对100 例不同年龄段的随机人群外周血抽提游离线粒体拷贝数进行检测,结果显示30-79岁游离线粒体拷贝数与年龄之间的相关性参数为｜R｜= 0.18、P value = 0.077,游离线粒体拷贝数与性别之间的相关性参数为｜R｜= 0.27、P value = 0.061即游离线粒体拷贝数与年龄和性别均无显著相关性,研究结果与报道一致。结论：表明优化后的方案可稳定检测游离线粒体拷贝数,提供了一种快速、准确检测游离线粒体拷贝数的方法。     

封闭式负压引流术联合自体游离皮片植皮治疗四肢皮肤软组织感染创面的疗效观察

探究封闭式负压引流术(VSD)联合自体游离皮片植皮治疗四肢皮肤软组织感染创面的疗效及其对疼痛的影响。方法:选择2018年12月-2020年10月北京积水潭医院收治的四肢皮肤软组织感染创面患者90例,按随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组45例。对照组采用传统的治疗方法治疗,观察组采用VSD联合自体游离皮片植皮治疗。对比两组治疗结束后的临床疗效,并观察两组治疗前以及治疗后24 h、3 d的疼痛程度,对比两组一般治疗情况及治疗过程中的不良反应。结果:观察组治疗总有效率为93.33%,显著高于对照组的68.89%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者在治疗后24 h和3 d的数字疼痛量表(NRS)评分低于治疗前,治疗后3 d NRS疼痛评分低于治疗后24 h(均P<0.05),且治疗后24 h和3 d观察组NRS疼痛评分均显著低于对照组(P均<0.05)。观察组患者并发症的发生率为31.11%,明显低于对照组的57.78%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组换药频率显著低于对照组,且疼痛暂缓时间、创面愈合时间、住院时间更短,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:VSD联合自体游离皮片植皮有利于提高治疗四肢皮肤软组织感染创面的临床疗效,缓解患者疼痛症状,并降低并发症发生率。     

扩增子测序技术应用于乳腺癌循环游离DNA无创性检测的研究

目的:应用扩增子测序方法检测乳腺癌循环游离DNA肿瘤相关突变。方法:军事医学科学院附属医院的10例HER2阳性晚期乳腺癌患者血样入组,应用扩增子测序技术检测血细胞和血浆中的循环游离DNA(cfDNA),筛选出肿瘤相关基因突变,即循环肿瘤DNA(ctDNA)。结果:检测10例晚期乳腺癌患者外周循环血50个基因,共检出11个突变基因,其中PIK3CA、ERBB4的阳性检出率均达到100%,AKT、TP53的阳性检出率为90%。结论:检测覆盖度及深度均良好,结果提示11个基因的热点突变区域出现单核苷酸的多态性基因突变,突变基因与PI3K-AKT-m TOR通路、Ras-Raf-MEK-ERK通路明显相关。扩增子测序技术和筛选方法可以用于乳腺癌ctDNA的无创性检测。     

蜜蜂幼虫血淋巴游离氨基酸和微量元素含量的差异对其抗螨特性的影响

重新界定的外寄生螨类---狄斯瓦螨Varroa destructor(Anderson and Trueman),严重危害全世界的西方蜜蜂Apis mellifera。但是对其原始寄主东方蜜蜂Apis cerana不构成可见的危害。在西方蜜蜂群中,狄斯瓦螨在雄蜂房和工蜂房都能进行繁殖。在其亚洲的原始寄主东方蜜蜂群中,它们可以寄生于雄蜂和工蜂,但在工蜂房中不育。蜜蜂的血淋巴是狄斯瓦螨生存和繁殖需要摄取的惟一食物来源,推测血淋巴中的某种物质含量会影响狄斯瓦螨的繁殖。对中华蜜蜂Apis ceranaFabricius和意大利蜜蜂ApismelliferaL.工蜂和雄蜂封盖幼虫血淋巴中游离氨基酸和与营养有关的微量元素含量进行了比较,发现其存在明显差异,并推测这些差异与东方蜜蜂抗螨能力强有关。     

稀有鮈鲫对高浓度二氧化碳和低溶氧的急性反应

鱼类生活在水中,其生存与水中的溶解氧和游离的二氧化碳浓度息息相关.在稀有的螂(Gobiocypris rarus Ye et Fu)的养殖及作为实验鱼、灭蚊鱼的应用中,引起它出现呼吸困难或者死亡的CO,和溶氧浓度的高低值,是人们很关心的问题.为此,我们于1992年12月至1993年4月进行了稀有约螂对高浓度CO:和低溶氧的急性反应的研究,本文就是关于这方面的研究报告.       

胡萝卜与烟草原生质体的低温保存

在较长的时间内,可保持正常生理状态与细胞活性的原生质体的制备及保存技术是进行空间细胞融合实验的前提条件。本研究以0.7ml/L的葡萄糖作渗透压,在6-8℃低温条件下经过72小时保存后,供试原生质体的存活率仍可达81%,并保持了其长壁与分裂的特性。 Abstract:Storage duration and acativity of isolated protoplasts are important problem for experiment on plant cell fusion in space.We have achieved preliminary success using glucose as osmotic reagent,The survival protopasts after 72 hour storage in 0.7mol/L glucose at 6~8℃ reached 81% and maintained a very high activity of division.     

食品上的应用

<正>在东方国家,红曲霉用于制造红色米酒、绍兴酒、红色腐乳以及红曲米。在游离细胞发酵实验中,红曲NRRL1993用工业葡萄糖和新胨(neopeptone)为培养基,在28℃和摇瓶通气条件下培养。固定化细胞发酵是在藻朊酸中接种48小时的原培养物进行     

富营养化水体灌溉对高羊茅生理生态特征的影响

通过采用两处不同浓度富营养化水体对高羊茅进行灌溉,研究了高羊茅生理生态特征响应。结果表明：稀释后的富营养化水体能显著促进高羊茅根系生长,当稀释浓度大于50%时,不利于株高的增长。富营养化水体的各个浓度对高羊茅叶绿素各项指标无显著影响。各富营养化水体稀释后灌溉高羊茅,对其游离脯氨酸、可溶性糖、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响与对照相比差异不显著,外环水体能显著促进高羊茅过氧化物酶（POD）活性增加,稀释浓度为75%能使高羊茅过氧化氢酶（CAT）活性显著增加。综上分析表明,富营养化水体稀释后灌溉高羊茅是可行的,且生活区污水更适合用于高羊茅的灌溉。     

血浆游离DNA检测在心血管系统疾病诊断中的应用

心血管疾病发病率和病死率居高不下,寻求敏感性高的生物学指标帮助早期诊断和改善预后意义重大.血浆游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)是一类存在于血浆、尿液及其他体液中游离于细胞之外的双链DNA片段.血浆cfDNA水平在心血管疾病的早期明显升高,提示其可能是心血管疾病的潜在生物标志物.为了更深入理解cfDN...     

新生儿缺氧缺血脑病体液中游离氨基酸的改变

新生儿缺氧缺血脑病 ( hypoxic- ischem ic encephalapothy,HIE)是引起新生儿死亡及影响新生儿发育成长的一种常见病。使用丹酰氯反应 ,聚酰胺薄层析方法 ,分析了新生儿 HIE体液 (脑脊液及血液 )中 9种游离氨基酸水平的改变 ,以此探讨新生儿 HIE的发病机理 ,诊断依据以及治疗效果