抗CD20嵌合抗体的表达与活性检测

表达了基因重组抗CD20嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定。设计合成轻、重链可变区序列;提取血液RNA,通过RT-PCR得到人κ、IgG1的轻、重链恒定区序列。运用重叠延伸PCR,连接可变区与恒定区,将轻、重链基因连接至pIRES双表达载体。将质粒以阳离子脂质体转染CHO细胞,ELISA挑选阳性克隆,共获得7株表达较高的克隆,表达量约为2mg/L。扩大培养阳性克隆anti-CD20-1B3,收获上清,以蛋白A进行亲和层析纯化表达蛋白。SDS-PAGE检测表明纯化纯度达到95％,蛋白相对分子量与理论值吻合。以CD20₊细胞Raji、Daudi、Ramous检测,表明该抗体能与CD20抗原特异性结合,体外杀伤试验说明抗体能够杀伤CD20₊淋巴瘤细胞。     

EB病毒致胃癌形成的分子学机制研究进展

EB病毒是一种DNA肿瘤病毒,感染人类,可以引起鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤,近年来EB病毒与胃癌的关系也逐渐得到了人们的重视。EB病毒在人原代胃上皮细胞和胃癌细胞系中促癌作用已得到证实,但是它致胃上皮细胞增殖及胃癌形成的分子学机制仍不十分清楚。本文综述了国内、外这方面的研究进展。     

JAK/STAT信号转导通路与淋巴瘤的形成

JAK/STAT信号转导通路的异常激活在多种淋巴瘤的发生发展中发挥重要作用. 该信号通路的抑制剂在淋巴瘤的靶向治疗中具有良好的应用前景．本文对JAK/STAT信号通路与淋巴瘤发生、发展的最新研究进展进行综述,重点介绍该信号通路中各种JAK激酶及STAT分子的异常突变类型,以及它们在各类淋巴瘤形成中的作用、调控机制及其靶向治疗策略,旨在为该信号通路在淋巴瘤发生发展中的影响及作用机制的进一步研究提供借鉴．     

重组人p53腺病毒转染淋巴瘤源性树突状细胞的抗肿瘤免疫效应

目的：研究重组人p53腺病毒转染淋巴瘤源性树突状细胞的抗肿瘤免疫效应。方法：采集本科室初诊的弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）肿大淋巴结分离单个核细胞（MNC）进行体外DC的诱导培养,分为实验组A（rAd-p53-DC）、对照组A（rAd-DC）、空白对照组A（N-DC）,同时采集患者的外周血分离单个核细胞（MNC）,进行体外DC的诱导培养,分为实验组B（rAd-p53-DC）、对照组B（rAd-DC）、空白对照组B（N-DC）,用重组人p53腺病毒（rAd-p53）转染2种来源的DCS,流式检测DCS免疫表型,用Western-blotting鉴定P53蛋白的表达,ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12的含量,混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reac-tion,MLR）测定DCS刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放法检测经rAd-p53转染的两种来源DCS的细胞毒性T淋巴细胞反应（CTL）。结果：DC的表型（CD1a除外）CD83、CD80、CD86和HLA-DR实验组均较对照组及空白对照组明显增高（p〈0.05）。Western-blotting可检测到实验组P53蛋白的表达。上清液中IL-12分泌水平实验组均较对照组及空白对照组明显增高（p〈0.05）。实验组具有明显的刺激自体淋巴细胞增殖的能力,且刺激能力随rAd-p53-DC与淋巴细胞比例的增加而升高。对照组及空白对照组也能刺激同种自体淋巴细胞增殖的能力,但较实验组差（p〈0.05）。对靶细胞的细胞毒作用（CTL效应）结果显示,实验组介导同种异体的淋巴细胞杀伤率显著高于对照组及空白对照组（P〈0.05）。且实验组A的CTL效应明显高于实验组B,两者之间有显著性差异（P〈0.05）。结论：rAd-p53-DC为基础的肿瘤疫苗有可能在解决淋巴瘤的MRD、DC免疫耐受等问题上发挥强大的治疗作用。     

重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础。方法设计引物扩增获得目的基因小鼠MIP-1α和B7-1基因的全长编码序列cDNA,将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其产物转化感受态细胞,对长出的阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析。MIP-1α和B7-1目的基因质粒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白（GFP）表达,采用Western Blot法检测其蛋白表达,实时荧光定量PCR,检测慢病毒浓缩液的滴度。结果成功构建了重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,实时荧光定量PCR证实MIP-1α、B7-1基因重组慢病毒载体的滴度均达2.00E＋8 TU/mL。结论本研究成功构建并包装出高滴度的小鼠MIP-1α和B7-1基因重组慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定了基础。     

在单个肿瘤中发现克隆

<正> 斯坦福大学医学院的Jeffrey Sklar说,长期以来,人们假设所有肿瘤中的细胞在遗传上是同一的,因为它们来自一个原始的出差错的细胞。Sklar和他的同事在《新英格兰医学杂志》7月5日的一期中报告说,β-细胞淋巴瘤患者的20％具有“双克隆的”瘤,由两个遗传上完全不同的细胞克隆组成。这一发现最直接的含意就是,那些用单一抗体治疗很可能无效的一批淋巴瘤患者一直得不到保护。由于设计的治疗方法只识别到一种类型的细胞,第二     

5''-Aza-CdR 对B细胞淋巴瘤的抑制作用及对瘤细胞CHFR 表达和甲基化的影响

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-Cd R)对人伯基特淋巴瘤Raji裸鼠移植瘤的抑制作用,以及对瘤组织中CHFR表达和甲基化的影响。方法:1皮下接种Raji细胞悬液构建荷瘤裸鼠模型18只,并随机分为实验组和对照组,分别予腹腔内注射等体积的5'-Aza-Cd R(1μg/g)及生理盐水,计算肿瘤体积大小,绘制肿瘤生长曲线,24天后比较两组移植瘤体积大小和重量。2分别从移植瘤组织中提取DNA及RNA,应用实时荧光定量PCR检测CHFR m RNA的表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测CHFR基因甲基化情况。结果:1实验组移植瘤生长速度较缓慢。实验结束时,实验组移植瘤体积、重量与对照组相比,差异有显著统计学意义(P0.01)。2实验组瘤细胞中CHFR m RNA的表达水平(3.69±1.20)与对照组(1.04±0.30)相比,差异有显著统计学意义(t=3.94,P0.001)。3实验组中的甲基化条带与对照组相比明显变暗,同时出现非甲基化条带,对照组中CHFR基因启动子只有甲基化条带被扩增。结论:5'-Aza-Cd R能抑制人伯基特淋巴瘤的生长,诱导瘤细胞CHFR m RNA表达增加,其机制可能为5'-Aza-Cd R使甲基化的CHFR启动子发生去甲基化。     

药物递送载体靶向治疗中枢神经系统淋巴瘤的研究进展

中枢神经系统淋巴瘤(central nervous system lymphoma,CNSL)少见且治疗困难.目前主流方案多为采用大剂量可通过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的化疗药物静脉给药或治疗有效的药物鞘内注射给药治疗,然而效果欠佳.许多外周疗效佳的化疗药物难以跨越BBB,或进入中枢神经...     

美国马里兰罗克维尔生物技术研究实验室(有限公司)研制一套测定人体血液里抗EB病毒(EBV)的抗体水平的商品酶免疫测定(EIA)仪

<正> EB病毒是传染性单核细胞增多症的一种病原体,也是鼻咽癌和Burkitts淋巴瘤的一种病毒。这套新仪器是根据通过单克隆抗体分离出的一些特异性病毒抗原研制的。据报道,这套仪器所利用的EIA技术可以提供很大数量的样品供技术员每小时分析使用,并用分光光度测定法测定其结果,与前测定系统比较,用这种分光光度测定得出的分析结果具有更高的客观     

转录因子STAT5A、STAT5B在T淋巴母细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的 探索信号转导和转录激活因子STAT5A及STAT5B蛋白在T淋巴母细胞淋巴瘤(T-cell lymphoblastic lym-phoma,T-LBL)组织中的表达情况,分析其与患者疾病发生、发展及生存预后的相关性.方法 应用免疫组织化学染色检测确诊的104例T-LBL组织和40例反应性增生淋巴结组织(对照)中的...