酒酒球菌液氮超低温保存

【目地】为安全、长期的保藏酒酒球菌,本文研究了菌体生长时间、冷冻方法、解冻温度、菌密度以及保护剂等对酒酒球菌细胞冷冻存活率的影响,找到最优液氮超低温保存方法。【方法】采用平板计数法测定冷冻存活率。【结果】实验结果表明酒酒球菌的最佳保存方法为:首先在稳定期前期离心收集菌体;其次加入保护剂(20 g/L酵母浸提物,40V/V甘油,20 g/L蔗糖,30 g/L谷氨酸钠)稀释菌体,使菌密度为109CFU/mL;然后直接投入液氮冷冻;最后在37℃温水浴中迅速解冻。保存6个月后,其中21株酒酒球菌的冷冻存活率达到99%以上。【结论】初步研究表明酵母浸提物,甘油,蔗糖,谷氨酸钠复合保护剂对酒酒球菌的保护效果较好,液氮超低温保存可用于酒酒球菌的长期保存。     

豆科种子休眠破除方法初探

对9种常见豆科植物种的适宜休眠破除条件进行了探索,结果表明,硫酸休眠破除效果最好,但最佳处理时间因种而异,处理时间过长可引致死种子数增多.在采用的60℃、80℃和95℃热水处理中,以80℃效果最好,60℃仅破除少部分种子休眠,而95℃则引致大部分种子死亡;除60℃外,延长热水处理时间可导致死种子数增加.液氮处理效果与种子大小有关,可显著破除苜蓿等小粒种子休眠,对中粒种子如印度田菁的休眠破除没有影响,但显著伤害苦豆子等大粒种子;液氮破除休眠与种子浸入液氮的时间无关.     

疫霉属菌种的液氮超低温保藏

对疫霉属的15个种68株菌和霜疫霉2株菌进行了液氮超低温的保藏试验并得到成功。比较了冷冻速度、保护剂和解冻速度对菌存活的影响。严格控制每分钟降温摄氏1度直到-40℃后再放入液氮罐中,对疫霉和霜疫霉来说都是非常必要的。这种降温程序可通过简单设备人工操作达到。而直接由室温降到-150℃以下会损伤菌种以致死亡。在所用的保护剂中,不论10％甘油还是5-15％二甲基亚砜都能起到保护作用。尚看不出对那种保护剂有特别的要求,似可任意选用。至于解冻条件,由液氮中取出放置在38℃水浴中快速融化与在20℃水浴中中等速度融化效果相等,对菌的成活都没有太大影响。我们的试验肯定了在有保护剂存在下,用慢速冷冻可以在液氮中保存疫霉和霜疫霉。     

植物挥发性物质提取的一种简易方法--液氮冷凝法

介绍了植物挥发物提取的一种简易方法——液氮冷凝法。利用液氮的制冷原理对植物挥发性物质进行提取收集,当携带植物挥发性物质的纯净空气带动供试植物组织的挥发性物质通过一置有U形玻璃管的液氮罐时,由于液氮的低温作用,挥发性物质在U形管内壁上遇冷凝结。该提取装置简单,由硅胶柱、活性碳柱、流量计、锥形瓶、U形管、液罐及各种连接管构成,容易组装。利用该装置提取的挥发性物质可以用于生测,去除水分后还可用于电生理以及挥发性物质化学组成分析等。     

各种酵母菌经超低温冻结和融化后的反应

本文报告用液氮超低温(-196℃)冻结和融化后,对酵母菌的影响。34种酵母菌经慢速(冷却速度为1℃/min)冻结后细胞成活率普遍高于快速(冷却速度为450℃/min)冻结。10%甘油和10%二甲亚砜比水在冻结中呈现出显著的保护作用。冻结保藏4个月后,细胞成活率都在11%以上,最高达97%,平均70.4%,而水,最低者仅0.4%,最高87%,平均46.5%。所观察的白地霉 Geotrichum candidum As 2.361,椭圆酿酒酵母 Saccharomyces cere-visiae var.ellipsoideus AS 2.541,八孢裂殖酵母 Schizosaccharomyces octosporus AS 2.1148,其细胞在冻结过程中的形态,最初质壁分离,继之整个细胞收缩,而融化后则可复元.解脂假丝酵母 Candida lipolytica AS 2.1207和2.1405经冻结48小时以上,融化后的细胞悬液直接接种培养后检测脂肪酶活力;酿酒酵母 Saccharomyces cerevtsiae AS 2.399和椭圆酿酒酵母 As 2.541冻结48小时后乙醇发酵力;异常汉逊酵母 Hansenula auomala AS 2.300和 AS 2.470冻结后形成乙酸乙酯的能力,都无明显的减退,而且以甘油作保护剂的细胞,较未经冻结者呈现出稍强的活力。就代谢产物而言,用气相色谱法分析发酵液,乙醇或乙酸乙酯都是很纯的终产物。嗜渗压的固囊酵母 Citeromyces matritensis AS 2.1401和汉逊德巴利酵母 Debaryomyceshansenii AS 2.45冻结后的细胞耐 NaCl 的能力无改变.冷冻真空干燥法保藏菌种,适合的菌类较广,是久经考验的方法。但是对于酵母菌冻干后细胞成活率平均为8.6%,而超低温冻结24小时细胞成活率平均为86.7%,大了10倍。     

内蒙古典型草原细菌群落结构的PCR-DGGE检测

用液氮冻融法和蛋白珠法对内蒙古典型草原土壤基因组DNA进行提取,用PCR—DGGE对细菌群落结构进行分析,并对主要的条带进行测序。发现蛋白珠法比液氮冻融法更能反应出实际的微生物群落结构和组成。内蒙古典型草原土壤细菌主要有5个分支：放线菌门（Actinobacteria）,变形菌门（Proteobacteria）的α、β及γ类群,拟杆纲门（Bacteriodetes）,芽单胞菌门（Gemmatimonadetes）和酸杆菌门（Acidobacteria）。与基因库中进行比较后发现有4个序列和已知的细菌种类相似达到了99％以上。     

液氮保存曲霉菌种的效果

本文报告了以蒸馏水、10%甘油和5%二甲基亚砜(DMSO)为保护剂,用液氮冻结法保存5种8株曲霉的效果,并检测了这些菌分别产生的亚甲基丁二酸、柠檬酸、蛋白酶和糖化酶的生理活性。这些菌在液氮气相(接近-150℃)中保存180天全部保持着生活能力,它们的培养特征和形态特征保留原来的形状。所测定的液氮保存8株菌种的生理活性,除两株糖化酶活力稍有降低外,其它菌株没有明显的变化。     

甘草酸二胺肠溶胶囊联合液氮冷冻治疗斑秃的疗效

为了研究观察不同剂量的甘草酸二胺肠溶胶囊联合液氮冷冻治疗斑秃的疗效分析,以及检测甘草酸二胺肠溶胶囊对患者肝肾功能的影响,进一步阐明甘草酸二胺肠溶胶囊对斑秃治疗的效果与对人体的健康影响,本研究以仅使用液氮冷冻治疗斑秃为对照组,设低剂量甘草酸二胺肠溶胶囊联合液氮为低剂量组(50 mg/次),高剂量甘草酸二胺肠溶胶囊联合液氮为高剂量组(200 mg/次),一日3次,共治疗12周,以斑秃皮损面积及严重程度指数(PASI)评分为疗效评价。采用血液生化检验(肝,肾功检查)检测3组治疗前后的丙氨酸氯基转移酶、尿素氮和肌酐水平。研究结果表明,治疗后高剂量组总有效率(92.50%)高于低剂量组(82.50%)及对照组(55.00%)(p<0.05)。高剂量组PASI评分及治疗前后丙氨酸氯基转移酶、尿素氮、肌酐水平相对于低剂量组及对照组无统计学意义(p>0.05)。本研究初步结论表明,高剂量的甘草酸二胺肠溶胶囊联合液氮治疗斑秃疗效显著高于甘草酸二胺肠溶胶囊联合液氮及仅使用液氮冷冻治疗;甘草酸二胺肠溶胶囊安全可靠,不影响患者的肝肾功能。     

低温冷冻保存技术与精子库、卵细胞库和胚胎库

以低温冷冻保存技术为基础建立的精子、卵细胞、胚胎的保存,对生殖生物学的发展做出了重大贡献,但同时不可避免地存在的一些问题没有引起足够重视,本文简要介绍了冷冻保存技术及其存在的低温生物学的危害作用和亟等解决的问题。     

新生隐球菌总RNA抽提方法的实验研究

目的探讨快速获取高质量的新生隐球菌总RNA的实验方法。方法选取新生隐球菌的荚膜株、荚膜缺陷株,分别设计采用4种方法提取总RNA:酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法。用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用定量PCR法鉴定RNA质量。结果酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法的RNA产量分别为0.2μg/105细胞、0.4μg/105细胞、0.1μg/105细胞、0.6μg/105细胞。结论冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取的RNA均一性和完整性最好,是简便、快捷地提取具有荚膜和细胞壁双重屏障的新生隐球菌RNA的理想方法。